PM 對 A10 細胞是否造成細胞凋亡之現象

一、以DNA 裂解方式探討

A10 細胞在經過 24 小時細胞週期同步化後，給予不同濃度的 PM

（20、40 及 80 μg/ml），放入培養箱培養48 小時。將細胞中的 DNA 抽出後，利用agraros DNA 電泳分析方式，觀察是否有因為細胞凋亡，

所造成的典型DNA 裂解片段（ DNA fragmentation ）的現象。結果 顯示，PM（ 40 及 80 μg/ml ）作用 48 小時，有較控制組明顯之 DNA 裂解片段（ DNA fragmentation ）的現象發生【圖 9】。

二、以MC540 / Propidium iodide 方法探討

A10 細胞在經過 24 小時細胞週期同步化後，給予不同濃度的 PM

（20、40 及 80 μg/ml），放入培養箱培養時間分別為 24、48 及 72 小時。使用MC540 及 Propidium iodide 雙染之方式，藉由流式細胞儀 的檢測下，觀察早期及晚期凋亡細胞。結果顯示，PM （ 24、48 及 72 小時 ） 在不同濃度下皆會造成 A10 細胞，早期及晚期細胞凋亡 比例明顯增加，早期加上晚期凋亡細胞比率分別約為 23 ％、30 ％ 及33 ％【圖 10、圖 11、圖 12、圖 13】。

三、以Annexin V-FITC 方法探討

A10 細胞在經過 24 小時細胞週期同步化後，給予不同濃度的 PM

（ 20、40 及 80 μg/ml ），放入培養箱培養時間分別為 48 小時。使

用Annexin V-FITC 之方式，藉由螢光顯微鏡的檢測下，觀察早期及 晚期細胞凋亡細胞。結果顯示，PM （ 20、40 及 80 μg/ml ）於 48 小時，與控制組相較細胞核會帶有紅色螢光，且細胞膜有表現綠色螢 光，表示細胞有細胞凋亡之現象【圖14】。

四、以細胞凋亡蛋白探討

（一）p53 蛋白與 A10 細胞凋亡之關係

A10 細胞在同步化後，給予不同濃度的 PM （ 20、40 及 80 μ g/ml ），放入培養箱培養時間為 24、48 及 72 小時，以西方墨點法分 析藥物對於細胞中 p53 蛋白的表現變化。結果顯示，PM （ 20、40 及 80 μg/ml ） 於 24 小時會顯著增加 A10 細胞中 p53（p＜0.05）

的表現，然而，於 48 及 72 小時，儘管有觀察到 p53 蛋白的表現量增 加，但並沒統計上的意義【圖15、圖 16】。

（二）Bax 蛋白與 A10 細胞凋亡之關係

A10 細胞在經過同步化後，給予不同濃度的 PM （20、40 及 80 μg/ml），放入培養箱培養時間為 24、48、72 小時，以西方墨點法分 析藥物對於細胞中Bax 蛋白的表現變化。結果顯示，PM （ 20、40 及80 μg/ml ）於 24 及 48 小時會顯著增加（p＜0.05）A10 細胞中 Bax 的表現量，然而，於 72 小時，儘管有觀察到 Bax 蛋白的表現量 增加，但並沒統計上的意義【圖17、圖 18】。

（三）p21 蛋白與 A10 細胞凋亡之關係

A10 細胞在經過 24 小時細胞週期同步化後，給予不同濃度的 PM

（20、40 及 80 μg/ml），放入培養箱培養時間為 24、48、72 小時，

以西方墨點法分析藥物對於細胞中 p21 蛋白的表現變化。結果顯示，

PM （ 40 及 80 μg/ml ）於 24 小時會顯著增加 A10 細胞中 p21 的 表現（p＜0.05），然而，於 48 及 72 小時，儘管有觀察到 p21 蛋白的 表現量增加，但並沒統計上的意義【圖19、圖 20】。

（四）Fas 蛋白與 A10 細胞凋亡之關係

A10 細胞在經過 24 小時細胞週期同步化後，給予不同濃度的 PM

（20、40 及 80 μg/ml），放入培養箱培養時間為 24、48、72 小時，

以西方墨點法分析藥物對於細胞中Fas 蛋白的表現變化。結果顯示，

PM 會增加 A10 細胞中 Fas 的表現，但並沒統計上的意義【圖 21、圖 22】。

（五）p38 蛋白與 A10 細胞凋亡之關係

A10 細胞在經過 24 小時細胞週期同步化後，給予不同濃度的 PM

（20、40 及 80 μg/ml），放入培養箱培養時間為 24、48、72 小時，

以西方墨點法分析藥物對於細胞中 p38 蛋白的表現變化。結果顯示，

PM 會增加 A10 細胞中 p38 的表現，但並沒統計上的意義【圖 24】。

（六）Caspase 3 蛋白與 A10 細胞凋亡之關係

A10 細胞在經過 24 小時細胞週期同步化後，給予不同濃度的 PM

（20、40 及 80 μg/ml），放入培養箱培養時間為 24、48、72 小時，

以西方墨點法分析藥物對於細胞中caspase 3（17 kda）蛋白的表現變 化。結果顯示，PM 會增加 A10 細胞中 caspase 3（17 kda）的表現，

但並沒統計上的意義【圖25、圖 26】。