夜交藤對囓齒類動物抗焦慮作用之研究;Studies on the Anxiolytic Effects of Polygoni Multiflori Caulis in Rodents

中國醫藥大學 中國藥學研究所 藥學碩士論文

組別：藥理學組 編號：ICPS-M332

指 導 教 授 ： 彭 文 煌 博士

共同指導教授： 謝 明 村 博士

共同指導教授： 吳 啟 瑞 博士

論文題目

夜交藤對囓齒類動物

抗焦慮作用之研究

Studies on the Anxiolytic Effects of

Polygoni multiflori Caulis in Rodents

研究生：石龍振

中國醫藥大學 藥學院 中國藥學研究所 中 華 民 國 96 年 6 月

謝辭

時光匆匆，轉眼間兩年的研究所生活即將告一段落，對於在這段 期間曾經給予我鼓勵與幫助的所有師長與親友，要再一次的表達我由 衷的謝意。 首先誠摯的感謝指導教授 彭文煌博士及謝明村博士，兩位老師 悉心的教導使我得以一窺藥理領域的深奧，不時的討論並指點我正確 的方向，使我在這些年中獲益匪淺。老師對學問的嚴謹更是我輩學習 的典範。 兩年裡的日子，亦得感謝藍先元博士夫婦在我進研究所的初期即 相贈實驗儀器及技術協助，使得本論文能夠順利的完成。 感謝林立偉學長不厭其煩的指出我動物實驗中的缺失，且總能在 我迷惘時為我解惑，也感謝眾位學長姐、同學、學弟妹的共同砥礪， 你們的陪伴讓兩年的研究生活變得絢麗多彩，順利走過這兩年。實驗 室的鄭承瑋學弟及許舒雁學妹們當然也不能忘記，妳的幫忙使我銘感 在心。 老婆玲菁在背後的默默支持更是我前進的動力，沒有玲菁的體 諒、包容，相信這兩年的生活將是很不一樣的光景。最後，謹以此文 獻給我摯愛的母親。 石龍振 謹致

目錄

謝辭 ………I 目錄 ……… II 略字表 ……… V 圖目錄 ……… VI 表目錄 ……… VII 摘要 ……… IX Abstract ……… XI 第一章 緒 言………1 第二章 總 論………4 第一節 夜交藤及大黄素之藥理作用文獻考察………4 一、夜交藤藥理作用 ………4 二、大黃素(Emodin)藥理作用 ………5 第二節 夜交藤之本草學及生藥學考察 ………12 一、本草學考察………12 二、生藥學考察………14 第三節 夜交藤化學成分之考察 ………16 第四節 焦慮症之定義與分類 ………17

第六節 焦慮之囓齒類動物模式………24 一、舉臂型十字迷宮（Elevated plus-mazetese，EPM）………… 24 二、孔洞實驗(Hole-board test) ……… 25 第三章 實驗材料與方法 ………28 第一節 實驗材料 ………28 一、藥材之基原與製備 ………28 二、實驗試藥………29 第二節 實驗方法 ………30 一、抗焦慮實驗 ………30 二、鎮靜實驗 ………31 三、大黃素抗焦慮作用機轉之探討 ………32 第三節 統計方法 ………35 第四章 實 驗 結 果 ………36 一、對舉臂型十字迷宮誘發焦慮之影響 ………36 二、對孔洞實驗誘發焦慮之影響 ………38 三、對大鼠運動量之影響………39

四、與影響中樞GABAergic 及 serotonergic system 之藥物分別

五、對小鼠腦內單胺濃度及其代謝物濃度的影響………46

第五章 討 論 ………49

第六章 結 論 ………56

略字表

PMC Polygoni Multiflori Caulis

EPM Elevated plus-maze

OT Open arm time

CT Closed arm time

OE Open arm entry

CE Closed arm entry

DIZ Diazepam BUS Buspirone

5-HT 5-Hydroxytryptamine

NE Norepinephrine HCl

DA Dopamine HCl

VMA Vanilly-mandelic acid

HVA Homovanillic acid

5-HIAA 5-Hydroxy-indole3-acetic acid

RIT Ritanserin

8-OH DPAT 8-Hydroxy-2-(di-n-propylamino)tetralin

DOI 1-(2,5-Dimethoxy-4-iodophenyl)-2-aminopropane WAY-100635 N-[2-[4-(2-Methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]

-N-(2-pyridiny)Cycolhexane carboxamide p-MPPI 4-(2´-Methoxy-phenyl)-1-[2´-(n-2"-pyridinyl)-p

圖目錄

Fig 1.Effects of ethanol extract of Polygoni Multiflori Caulis (PMCEtOH)

on thelocomotor activity in mice.………39

Fig 2.Effects of emodin on thelocomotor activity in mice.………40

Fig 3. Effects of ethanol extract of Polygoni Multiflori Caulis(PMCEtOH)

on thelocomotor activity in rat. ……… 41

表目錄

Table 1.Effects of ethanol extract of Tuber Polygoni Multiflori(TPMEOH)

on the arms entries and the time spent in the closed arms and open arms of the elevated plus-mazetese during a 5-min test in

mice.………34

Table 2.Effects of emodin on the arms entries and the time spent in the closed arms and open arms of the elevated plus-mazetese during a 5-min test in mice. ………35

Table 3.Effects of ethanol extract of Tuber Polygoni Multiflori

(TPMEOH)and emodin on thehead-dip countsand thehead-dip

duration and head-dip latency in the Hole-board test during a 5-min test in rat.………36

Table 4.Effect of emodin on DIZ-, BUS-, WAY-100635, 8-OHDPAT-,

P-MPPI-,DOI-,RIT-induced time spent ,arm entries in the

plus-maze during a 5-min test. ………41

Table.5.The effect of emodin on the concertration of monoamines and their metabolites in the striatum of mice. ………42

Table.6.The effect of emodin on the concertration of monoamines and their metabolites in the hippocampus of mice. ………43

Table.7.The effect of emodin on the concertratoin of monoamines of and their metabolites in the cortex of mice. ………44

夜交藤對囓齒類動物抗焦慮作用之研究

石龍振

中國醫藥大學 藥學院 中國藥學研究所

摘要

本研究以舉臂型十字迷宮及孔洞實驗誘發動物焦慮模

式，探討夜交藤乙醇粗抽物

及其活性成分

大黃素(emodin)之

抗焦慮作用，並分別併用影響中樞

GABAergic 及 serotonergic

system 之藥物進行舉臂型十字迷宮實驗，評估抗焦慮作用之

機轉，

最後測定小鼠腦組織海馬回(hippocampus)、紋狀體

(striatum) 與 皮 質 (cortex) 組 織 中 神 經 傳 導 物 質 ： 血 清 素

(serotonin)、正腎上腺素(norepinephrine)、多巴胺(dopamine)

及其代謝物的濃度

。

結果顯示，口服夜交藤乙醇粗抽物（0.5, 1.0 g/kg）及大

黃素(10, 15 mg/kg)可增加小鼠在舉臂型十字迷宮之開放臂的

滯留時間及進入次數，並減少在封閉臂之滯留時間及進入次

數；並增加大鼠在孔洞實驗的點頭次數及時間。口服夜交藤

乙醇粗抽物(0.1,0.5,1g/kg)及大黃素(1,10,15mg)對小鼠在舉臂

型十字迷宮運動量無明顯變化，在孔洞實驗對大鼠運動量有

增加作用。大黃素並未影響

diazepam 之抗焦慮作用，大黃素

可增強突觸前

5-HT

1A

之部份致效劑

buspirone，突觸後 5-HT

1A

受體拮抗劑

P–MPPI 及 5-HT

2

拮抗劑

ritanserin 之抗焦慮作

用，拮抗突觸前

5-HT

1A

受體拮抗劑

WAY-100635，突觸後

5-HT

1A

受體作用劑

8-OH DPAT 及 5-HT

2

致效劑

DOI 誘發之

焦慮作用，顯示大黃素抗焦慮作用可能與

GABAergic 受體無

關，與活化突觸前

5-HT

1A

autoreceptors 及拮抗突觸後 5-HT

1A

受體有關與拮抗

5-HT

2

受體有關。

口 服 大 黃 素

(10, 15 mg/kg) 對 小 鼠 腦 組 織 海 馬 回

(hippocampus)、紋狀體(striatum)與皮質(cortex)組織中神經傳

導物質

NE、DA、5-HT 的濃度有減少之作用，對 VMA、HVA

及

5-HIAA 的濃度有增加之作用。

綜合以上結果，顯示夜交藤與大黃素不論在孔洞實驗

或舉臂型十字迷宮誘發老鼠焦慮模式中均具明顯之抗焦慮

作用，而大黃素之抗焦慮機轉則可能與活化突觸前

5-HT

1A

autoreceptors 及降低突觸後 5-HT

1A

及

5-HT

2

受體之活性，及

減少海馬回、紋狀體與皮質組織中單胺濃度有關。

Studies on the Anxiolytic Effects of

Polygoni Multiflori Caulis in Rodents

Shih Lung-chen

Institute of Chinese Pharmaceutical Sciences﹐College of

Pharmacy﹐China Medical University

Abstract

This study investigated the anxiolytic-like effects of ethanol extract of Polygoni Multiflori Caulis (PMCEtOH) and emodin by using elevated plus-maze (EPM)

and the hole-board test (HBT). I also detected the levels of monoamines and their metaboltes in the mouse’s hippocampus, striatum and cortex and combined some anxiolytics to inquire the relationship between anxiolytic-like mechanism of emodin.

The results shows that PMCEtOH (0.5, 1 g/kg)and emodin (10,15 mg/kg) after

oral administration increased the open arms entries and time spent in EPM. It also increased rats head-dip counts and duration time in HBT. Emodin did not affect the anxiolytic effect of diazepam. It augmented the anxiolytic effects of buspirone,

P-MPPI and ritenserin and antogonisted the anxiogenic effects of WAY-100635, 8-OH

DPAT and DOI. Emodin decreased the levels of NE, DA and 5-HT and increased the levels of VMA, HVA and 5-HIAA in the mouse’s hippocampus, striatum and cortex.

These results indicated that PMCEtOH and emodin possessed anxiolytic-like

effect in both HBT and EPM. The anxiolytic-like mechanism of emodin may be related to activating pre-synapse 5-HT1A autoreceptor , blocking the activities of

post-synapse 5-HT1A and 5-HT2 receptor and decreasing the levels of NE、DA、5-HT

and increasing the levels of VMA、HVA and 5-HIAA in hippocampus, striatum and cortex.

第一章 緒 言

隨著時代的進步，社會急劇地變遷，現代化和工業化的程度愈 來愈高，人際關係也變複雜，幾乎每個人在一生當中都要承受各式各 樣的心理精神壓力，面對種種來自工作和生活方面的衝突。當種種困 難和不順之事無情地顯現在人們面前時，焦慮的情緒就會隨之而來。 而這類耳熟能詳的精神官能症，事實上是最常見的精神科疾病，特別 是焦慮性精神官能症更是普遍。它對於患者和其家人所造成的困擾， 生活品質的影響，其實並不亞於其他身心疾病，對社會成本的負擔極 為巨大﹙1﹚。 焦慮(anxiety)是精神疾病的一種常見症狀，而焦慮症則是呈現急 性焦慮反復發作為特徵的精神官能症，並伴有神經功能紊亂。發作 時，患者多表現為恐懼、緊張、心悸、出冷汗、震顫及睡眠障礙等症 狀。焦慮性障礙患病率約占臺灣人口的2%~4%，臺灣流行病學研究 證明城市人口中大約有4.1%~6.6%的人口在他們的一生中會患焦慮 症，且在女性中的發病率比男性要高，比例為3：2，尤其是隨著工 作壓力的加大，最容易被忽略的社交焦慮症患者也急劇上升﹙1﹚。

臨床上常用抗焦慮藥（antianxiety drugs 或 anxiolytic）來治療焦慮症 或焦慮狀態。由於抗焦慮藥或多或少帶有一定程度的鎮靜作用，抗焦 慮藥又稱弱安神劑（minor tranquilzers）。在過去的 30 多年中，焦慮

症的治療主要使用三環類(tricyclic)和苯二氮平（benzodiazepine）類藥 物。前者，三環類(tricyclic)有抗膽鹼能及心血管方面的副作用。後者 是常用的鎮靜、催眠和抗焦慮藥，其藥效學特點是：作用強、起效快； 這類藥物的副作用有抑制腦運動損傷，長期使用產生耐受、成癮和戒 斷症狀，如：失眠、頭痛、煩躁、緊張、噁心、嘔吐、肌肉疼痛或抽 動，重者可伴癲癇發作或呈激越狀態；其抗焦慮作用與抑制腦幹網狀 結構及邊緣系統的5-HT 活性能有關(2)。由此可見，尋找安全性更大、 副作用更小，即使長期使用也不會引起依賴的新抗焦慮藥物已成為當 務之急。 雖然民間早有利用草藥於安神抗焦慮之記載，值得深入研究的 抗焦慮植物很多，開發潛力還很大。因此，在抗焦慮藥物的開發利用 方面，中藥有著很大的優勢和潛力，極待去挖掘、創新和開發。 夜交藤為蓼科(Polygonaceae)植物何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.） 的藤莖或帶葉藤莖。本品始載於開寶本草今附品；主產於 河南、湖南、湖北、江蘇、浙江等地﹙3﹚﹙4﹚。歷代以來即用於養心安神， 袪風通絡，主治驚悸煩躁、虛煩不眠，多夢健忘，血虛身痛，風濕痹 痛，皮膚癢疹﹙4﹚。现代藥理學研究夜交藤主含蒽醌(anthraquinon)衍生 物如大黃素(emodin)、大黄酚(chrysophanol)、大黄瀉素、大黄酸、大 黄瀉素甲醚﹙5﹚，又以大黃素為主其平均含量為0.473%﹙6﹚ 。藥理證實

夜交藤有鎮痙安神，調節神經的作用，具有安神、養血、活絡之功效。 然有關夜交藤治驚悸煩躁之抗焦慮作用的研究並未見有文獻報告發 表。 當今被廣泛使用於研究焦慮的動物模式有數十種﹙7﹚，本研究 採用其中兩種常用模式，一是依據囓齒類動物厭惡高處及開放空間的 天性而設計的舉臂型十字形迷宮 (elevated plus-maze)模式，二是依據 囓齒類動物的新奇(curiosity)和恐懼(fear)兩個因素來控制動物在新環 境下的行為，用逃避(escapes)來反應這兩個因素的作用結果之孔洞實 驗(hole-board test)模式，本研究採用此兩種研究模式來探討夜交藤 70%乙醇粗抽物及其活性成分大黃素之抗焦慮作用，並以當今精神醫 療臨床常用的抗焦慮藥物diazepam 及 buspirone 作為正對照組，再與

影響中樞GABAergic 及 serotonergic system 之藥物分別併用

WAY-100635（5-HTA selective antagonist）、

8-OH DPAT（5-HTA selective anonist）P-MPPI（5-HTA selective

antagonist）、DOI（5-HT selective anonist ）、Ritanserin(RIT)，藉以 評估其抗焦慮作用之療效。而上述併用影響中樞神經系統傳遞物質之 藥物，期能闡明大黃素抗焦慮作用之機轉。

第二章 總 論

第一節 夜交藤及大黄素之藥理作用文獻考察 一、 夜交藤藥理作用︰ 1﹒鎮靜催眠作用︰ 夜交藤煎劑 9.0 g/kg 灌服大鼠可使總睡眠時間延長﹙8﹚ 。 2﹒鎮咳作用︰ 電刺激貓喉上神經法表明，大黃素有鎮咳作用﹙9﹚ 。 3﹒降血脂作用︰ 實驗性高血脂症大鼠灌服夜交藤 4.0 g/kg 連續給藥 10 日後， 夜交藤能顯著降低血清總膽固醇（TC）54.8％（P＜0.05）。高 脂鵪鶉灌服夜交藤 2.0 g/kg 連續 4 週後，能顯著降低實驗性高 脂血症鵪鶉的 TC（P＜0.05），並能明顯升高 HDL-C/TC 的比 值﹙10﹚。對高血脂引起的脂肪肝有保護作用﹙11﹚。 4﹒對腸管的影響︰ 離體及活體腸管實驗證明，一定濃度的大黃素可引起小腸肌 張力增高，收縮振幅增大，增大劑量則可抑制小腸活動﹙10﹚。 5﹒抗腫瘤︰ 每日灌服 50 mg/kg 的大黃素，對小鼠 B16 黑色素瘤有明顯的 抑制作用，抑制率為 76％﹙12,13﹚ ，對小鼠乳腺癌和艾氏腹水炎

（EAC）也有抑制作用﹙14﹚ 。大黃素甲醚對人體宮頸癌Hela 細 胞有較強的抑制作用﹙15﹚。 6﹒抗菌作用︰ 體外實驗證明，夜交藤對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠衣 桿菌、痢疾桿菌、甲型鏈球菌、肺炎球菌、流感桿菌、卡他 球菌以及白喉、枯草、副傷寒桿菌等均有不同程度的抑制作 用﹙16﹚。 7. 其他︰ 夜交藤有降血壓、利尿及殺滅鈎端螺旋體作用﹙17﹚。 二、 大黃素藥理作用︰ 1. 大黃素之結構與理化性質﹙18﹚ 化學名： 1,3,8-Trihydroxy-6-methylanthraquinone 3-methyl-1,6,8 trihydroxyanthraquinone 分類：蔥醌類的化合物 結構式：

分子式&分子量：C H O 、270.2 物理化學性質：為橙黃色或橘黃色結晶或粉末，對光敏感 （Photosensitive），熔點為 256~257℃，UVλmax（MeOH） 222、252、265、289、437 mm。不溶於水，溶於乙醇 亦溶於DMSO。 作用性質：大黃素雖有瀉下活性，但由於在體內易被氧化破壞，實際 上瀉下作用很弱，如與糖結合成苷類，則可發揮瀉下作用。大黃素除 游離存在外，尚以還原狀態(如蒽酚、蒽酮的衍生物)或與糖結合成苷 類存在。例如，大黃素蒽酚或大黃素蒽酮(熔點 250～258 C)為大黃素 的還原產物，不穩定，易被氧化再轉變成蒽醌。在新鮮植物中可發現 此類還原衍生物，如經長時間貯存，往往被氧化成蒽醌類。 大黃素蒽酚 大黃素蒽酮

2﹒大黃素之藥理學作用 (一) 抑制脂肪酸合成之作用 1)、大黃素使用低濃度時，會促進 preadipocyte 3T3-L1 細胞的 增生（proliferation）。但是在高濃度之下，反而會抑制細胞 增生﹙19﹚。 2)、大黃素可以用來當作有效來降低脂肪的藥物（fat-reducing drug）﹙20﹚ 。 (二) Casein Kinase II 選擇性抑制劑 大黃素可以抑制casein kinase II 的活性﹙21﹚ 。 (三) 抗胃潰瘍活性 1)、動物實驗發現大黃素可以減緩 aspirin 和 immobilization stress 所誘導胃潰瘍模式 ﹙22﹚ 。 2)、大黃素可以用來降低胃酸和胃蛋白酶（pepsin）釋放 ﹙23﹚ 。 3)、大黃素可以對抗幽門螺蜁桿菌（Helicobacter pylori），故 可進一步去治療消化性胃潰瘍﹙23﹚。 (四) 對細胞內鈣離子的影響 大黃素處理大鼠的腦細胞，不僅促進鈣離子釋放，還可以促 進外鈣內流，可能有促進腦細胞之功能和促進傳遞訊息物質 合成與釋放有關﹙24﹚。

(五) 抗氧化作用 大黃素可以抑制亞麻油酸(linoleic acid)的過脂質氧化作用 （lipid peroxidation）﹙25,26﹚ 。 (六) 酪胺酸激酶蛋白抑制劑 大黃素是一強效的酪胺酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor）﹙27﹚ 。 (七) 致基因突變作用與抗基因突變作用 大黃素具有致基因突變作用（mutagenicity），其可能的活性基 團是位於 6 位甲基上（6-methyl group）﹙28﹚ 。 (八) DNA 修復作用

大黃素可以增加因 UV-和 cisplation induced DNA 傷害所誘導

DNA 修復（DNA repair）的活化﹙29﹚

。 (九) 抗發炎作用

動物試驗發現大黃素可以抑制 carrageenan 誘導水腫大鼠所

引起的發炎反應﹙30﹚。

(十) 免疫抑制作用

1)、人類單核細胞（human mononuclear cells）0.25%

Phytohemagglutinin 前處理後，再加入大黃素發現能降低細胞增殖能

receptor expression﹙31﹚

。

2)、大黃素能夠有效抑制 T 淋巴細胞增生能力﹙32﹚

。

(十一) 對心血管系統的作用-血管擴張降血壓。抑制 NADPH oxidase、xanthine oxidase、succinate oxidase 進而達到血管 舒張的效果﹙33﹚。

(十二) 抗菌作用

1)、大黃素可以造成幽門螺蜁桿菌（Helicobacter pylori）的 DNA

傷害極具有生長抑制之功效﹙23﹚。

2)、大黃素的有效抑菌濃度為 1.5~25mg/ml-對金黃色葡萄球菌

不易產生抗藥性，可以顯著的抑制4 株 methicillin-resista 金

黃色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus）；

對臨床常見的厭氧菌有很強的抑制作用。但對於E.coli 和 P. aerginosa.則沒有明顯之效果﹙23﹚﹙34﹚ 。 3)、抗真菌、殺鉤端螺施體。 (十三) 保肝作用 大黃素對大鼠肝纖維化具有治療作用﹙35﹚。 (十四) 對消化系統的作用-高劑量會導致瀉下作用 1)、對腸道的瀉下作用，是由藥物在腸道內的細菌代謝產物所導 致﹙36﹚。

2)、大黃素能誘導環狀平滑肌細胞收縮，而且成劑量依存性效應 （dose-dependent）。其大黃素所誘導的收縮反應，其作用機

轉是經由鈣離子/調鈣激素路徑（Ca²+/CaM dependent

pathyways）﹙37﹚

。 (十五) 抑制肺纖維化作用

大黃素對於肺纖維細胞生長有延遲效用，這項發現有助於利用

大黃素來預防肺纖維化疾病（lung fibrosis diseases）﹙38﹚

。 (十六) 抗癌作用

1)、大黃素造成肝癌細胞（heptaocelluar carcinoma cell， HCC）

凋亡；能夠有效去抑制肝癌細胞﹙39,40﹚。

2)、將肺鱗狀上皮細胞癌（lung squamous cell carcinoma）以大

黃素處理後，促使肺癌細胞死亡﹙41﹚。

3)、抗癌藥物與大黃素併用後，發現具協同性抑制細胞增生的能 力﹙42,43﹚。

4)、大黃素可以去抑制子宮頸癌細胞（cervical cancer cell）﹙44﹚

。 5)、將血癌細胞（myelogenous leukemia cell）以大黃素處理後會

造成細胞凋亡﹙45﹚。

6)、可以有效的抑制卵巢癌細胞（ovarian carcinoma）的侵入 （invasion）以及轉移（metastasis）﹙46﹚

7)、對小鼠肉瘤、小鼠肝瘤、小鼠艾氏腹水瘤 小鼠淋巴肉瘤、 小鼠黑色素瘤及大白鼠瓦克癌均有效﹙47,48,49﹚。 (十八) 對解痙作用、止咳作用、利尿作用有療效。 1)、大黃素對乙醯膽鹼引起的痙攣有很強的解痙作用，約比罌粟 鹼強 4 倍﹙19﹚ 。 2)、口服易吸收，吸收後左肝、腎、膽囊分佈最多，易從尿液排 出﹙50﹚。

第二節 夜交藤之本草學及生藥學考察 一、本草學考察： 1.本草系統：本品始載於開寶本草今附品﹙51﹚ 。 2.藥名：夜交藤在《本經逢源》異名棋藤《南京民間藥草》，首烏藤 《江蘇植藥志》﹙52﹚。 3.來源：1).本出順州南河縣，嶺外、江南諸州亦有，今處處有之。 2).本出虔州，江南諸道皆有之。 4.產地：1).以西洛、嵩山及南京柘城縣者為勝。 2).所出順州南河縣、韶州、潮州、恩州、賀州、廣州四 會 縣、潘州，以上出處為上。 3).邕州晉興縣、桂州、康州、春州、勒州、高州、循州， 以 上所出次之。 4).道地者為懷慶府柘城縣﹙53﹚ 。 5.採集：採時乘濕以布帛拭去土，後用苦竹刀切，米泔浸一宿， 曝干。忌鐵。以木臼杵搗之。 春末、夏中、初秋三時，候晴明日兼雌雄采之。一云：春 採根，秋採花。又曰：春末夏中秋初候晴明日取根。 九蒸九曝，乃可服。採時盡其根，乘潤以布帛拭去泥土，

6.性味、藥能：性味 甘微苦，平。功用主治 養心，安神，通絡， 祛風，治失眠，勞傷，多汗，血虛身痛，癰疽， 瘰鬁，風瘡疥癬。《本草再新》味苦，性温，無毒， 入心、脾二經，補中氣，行經絡，通血脈，治勞 傷。《陝西中草藥》性平，味甘。歸經 入心、肝 經。《四川中藥志》入肝、腎二經﹙54﹚。 7.修治、方用：《醫醇媵義》甲乙歸髒湯治徹夜不寐。《陝西中草藥》 祛風濕，通經絡。治失眠，多汗，貧血，周身酸痛， 疥癬等皮膚病﹙55﹚。《廣西民間常用草藥》治腋疽、 痔瘡腫痛。《本草正義》夜交藤，稱莖葉治風瘡疥 癬，作浴湯甚效，今以治夜少安寐，蓋取其能引陽 入陰耳。而惟以此為普通用品"治夜少安寐"。《本草 綱目》風瘡疥癬作癢，煎湯洗浴。《飲片新參》苦 澀微甘，養肝腎，止虛汗，安神催眠。《安徽藥材》 消癰腫、瘰鬁和痔瘡﹙56﹚。

二、 生藥學考察：

1﹒生藥名：夜交藤 英文名 Tuber Fleeceflower Stem，拉丁文 Polygoni Multiflori Caulis，科名 Polygonaceae 蓼科、用部莖 木類、別名首烏藤、何首烏藤、棋藤、交藤，學名何首烏

Polygonum multiflorum Thunb.的莖藤或帶葉莖藤，化學成分

莖含蒽醌類，主要為大黃素、大黃酚或大黃素甲醚，均以結 合型存在。 2﹒來源：夜交藤為蓼科植物何首烏的藤莖或帶葉藤莖。採集帶 葉的藤莖，于夏、秋採取。但商品大都用藤莖，于秋季葉落後 割取，除去細枝、殘葉，切成長約70 釐米的段落，捆成把，曬 乾。藥材為乾燥的藤莖呈細長圓柱狀，通常扭曲，有時分枝， 直徑3～7 毫米。表面紫褐色，粗糙，有扭曲的縱皺紋和節，併 散生紅色小斑點，栓皮菲薄，呈鱗片狀剝落。質硬而鹿，易折 斷，斷面皮部棕紅色，木部淡黃色，木質部呈放射狀，中央為 白色疏鬆的髓部。氣無，味微苦澀。以粗壯均勻、外表紫褐色 者為佳。 3. 產地：主產河南、湖北、湖南、江蘇、浙江等地。四川商品為 乾燥的帶葉嫩莖。莖細，黃綠色或黃褐色，葉多皺縮﹙53﹚。 炮製清水洗淨，稍浸泡，撈出，潤透後，切段，曬乾﹙57﹚。

4.藥用用途：治失眠症、勞傷、多汗、血虛身痛、癰疽、瘰癧、 風瘡疥癬。傳統藥效分類為安神藥 功能主治養心、安神、鎮靜、 通絡、祛風。適應症治失眠症、勞傷、多汗、血虛身痛、癰疽、

第三節 夜交藤化學成分之考察 一、蒽醌類

主要為大黄素、大黄酚（chrysophanic acid，chrysophanol）或大黄

素甲醚（emodinmono methyl ether），均以结合型存在﹙59﹚

。 二、黄酮類 莖葉含多種黄酮，已得到木犀草素-5-O-木糖甙 （lutiolin-5-O-xyloside）。 大黄素-8-O－5-O-木糖甙（luteolin-5-O-xyloside）。 三、葡萄糖甙類 大黄素-8-O-β-D-葡萄糖甙(emodin -8-O-β-D-glucoside)。 四、其他 β-穀固醇(β-sitosterol)和鞣質。

第四節 焦慮症之定義與分類

現今的焦慮症定義（精神官能症）界定於以病態焦慮

（pathological anxiety）為核心，如恐慌、焦慮、畏懼等，納入以強迫 思考為主要障礙的強迫症（obsessive compulsive disorder），以及與壓

力有關的「急性壓力反應」（acute stress reaction）和創傷後症候群

（post-traumatic stress disorders），成為統稱的焦慮障礙（anxiety

disorders）的一大類精神疾病﹙60﹚。 焦慮和畏懼是人類最普遍的情緒反應之一，是一種可以強化注 意力和反應，有助於個體適應情境改變或危機的正常生物行為。但是 當焦慮所產生的自律神經反應太頻繁，強烈，或持續過久，造成個體 的功能障礙時，即可稱之為病態焦慮。 焦慮（anxiety）通常意指一種面對不確定未來的內在不安與慌 怕，通常伴隨有過度不合理的擔憂思考；畏懼（phobia）則是一種針 對某種已知情境或物體所產生的害怕感覺，通常伴隨退避（avoidance） 的行為。臨床上到達病態程度者通常一般人或患者本身會認為不合 理，而且對社會，職業功能已有某種程度的影響﹙61﹚。

焦慮症之分類以 DSM-IV-TR（the fourth edition of the diagnostic and manual of mental disorders）列出 12 種 anxiety disorders，這十二類

型在症狀病因行為模式及治療上有重要之不同：

（1） panic disorder with agoraphobia（恐慌症伴有懼曠症） （2） panic disorder without agoraphobia（恐慌症不伴有懼曠症） （3） agoraphobia without history of panic disorder（懼曠症沒有恐慌症

的病史）

（4） specific phobia（特殊單一型畏懼症） （5） social phobia（懼社交症）

（6） obsessive-compulsive disorder（OCD，強迫症） （7） posttraumatic stress disorder（創傷後症候群） （8） acute stress disorder（急性壓力反應），

（9） generalized anxiety disorder（廣泛性焦慮症），

（10） anxiety disorder due to a general medical condition（一般性醫學 狀況造成的焦慮性疾患）

（11） substance-induced anxiety disorder （物質誘發之焦慮性疾患）

（12） anxiety disorder not otherwise specified （其他未註明之焦慮性疾患）

第 五 節 焦慮與 GABAergic 及 serotonergic system 之關係 在許多動物行為實驗的文獻及治療焦慮症患者的研究顯示， serotonergic system 在恐懼和焦慮情緒行為的調節上扮演一重要之 角色，包括睡眠、慾望、自主神經系統的調節等許多的行為﹙62﹚。 當面臨壓力時，生理學上會引發下視丘-腦下垂體-腎上腺皮質 軸（hypothalamus-pituitary-adrenocortical axis）之內分泌變化。臨床 上Benzodiazepine 可抑制因壓力所引起 ACTH、cortisol、TSH、生 長激素（growth hormone）之分泌﹙63﹚。而以 5-HT 的前驅物 1-tryptophan（100mg/kg）高劑量下腹腔給予會引起泌乳素（prolactin） 和血漿中的生長激素的釋放﹙64﹚。在神經內分泌研究上5-HT1A 接 受體作用劑引起血漿中ACTH、corticosteroids、prolactin 提高﹙65﹚ ， 及生長激素增加 ﹙66﹚。 當將5-HT 神經毒素（neurotoxins）或 5-HT 合成的抑制劑給 予在矛盾衝突環境下的動物，動物顯示會有壓抑的行為產生﹙67﹚ ﹙68﹚ 。大多數的文獻顯示增加5-HT 的活性會產生動物的焦慮行為 ﹙69﹚ 。相反的，減少5-HT 的活性會產生抗焦慮﹙69﹚。 目前已知5-HT 接受體可分為 5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HT4、 5-HT 、5-HT6、5-HT7等七大類，其中以5-HT1A 、5-HT1B 、 5-HT2A/2C 等受體與焦慮關係較密切﹙70﹚。

5-HT1接受體分布相當廣泛，以突觸前的5-HT1 A接受體

（5-HT1 A presynaptic receptors）最多，其為一種 autoreceptors 或稱

somatodendritic autoreceptors；主要是位於腦幹核縫上的 5-HT 細胞

體上；而突觸後的5-HT1 A接受體（5-HT1 A postsynaptic receptors）

則是集中在limbic system（包括 hippocampus 和 amygdala）﹙71﹚﹙72﹚

上。活化突觸前 5-HT1 A接受體可抑制 5-HT 神經細胞之 firing rate， 減少 5-HT 的神經傳遞。突觸前 5-HT1 A autoreceptors 及突觸後的 5-HT1 A receptors 與 5-HT1 A 部分致效劑或 5-HT1拮抗劑結合後， 會活化Gi protein，而引起 K+通道打開，促使神經細胞膜過極化， 進而減低5-HT 神經傳導而產生抗焦慮活性。日前常用於研究 5-HT1 A 接受體的藥物有 5-HT1 A接受體的部分作用劑（如：buspirone）

及作用劑（如 8-OH DPAT）。Buspirone 有效用於治療廣泛性焦慮症

﹙73﹚

。而8-OH DPAT 已知亦作用於 5-HT7接受體﹙74﹚。

早期研究證明全身或局部給予LSD 會引起大鼠背側縫線核

5-HT firing rate 之明顯抑制﹙75﹚，目前有研究發現5-HT1 A作用劑

Buspirone 也有相同作用，且這些作用可被 5-HT1 A選擇性拮抗劑

WAY100635 所阻斷﹙76﹚。而8-OH DPAT 會增加大鼠大腦皮質和海

馬迴 acetylcholine 之釋放﹙77﹚，最近有研究指出 5-HT1 A 接受體位

微透析實驗中證明8-OH DPAT 會增加許多腦區 noradrenaline 之釋

放，包括下視丘、海馬迴、額葉皮質及腹被膜區﹙79﹚﹙80﹚。

歸結上述，5-HT1 A接受體對於 5-HT 調節 noradrenergic 及

cholinergic pathways 扮演著重要角色。雖然 5-HT1 A接受體作用劑

引發 5-HT cell firing 之抑制，一般認為係直接作用在 raphe，但最近

的資料則提高突觸後5-HT1 A autoreceptor 參與之可能性﹙81﹚﹙82﹚。而

5-HT1 B接受體被發現大量出現在囓齒類動物中，現已有證據指出

5-HT1 B接受體與5-HT1 A接受體一樣不但存在於突觸前終端

autoreceptors（presynaptic terminal autoreceptors）亦存在於突觸後接

受體（postsynatic receptors）﹙83﹚。5-HT1 D接受體則在其他種系動物 （牛、猪、狗、人類）發現。現在一般接受5-HT1 D 接受體事實上 是5-HT1 B接受體之種系變異﹙84﹚ 。最近一部份研究指出 5-HT1 D 接受體在人類腦中分布於基底神經節（蒼白球及黑質）中腦導水管 灰質及脊髓﹙85﹚。5-HT1 D接受體作用劑（如：sumatriptan）一般使 用於偏頭痛（migranine）的治療。至於 5-HT1 E和5-HT1 F接受體雖 早已被發現，但它們的特性卻尚未清楚。 5-HT2接受體為一種醣蛋白（glycoprotein），含有 471 個胺基 酸﹙86﹚ ，具有相當高密度的結構。其接受體有一部份位於細胞膜 內，另部份位於細胞膜外，突觸後的5-HT2接受體主要存在皮質、

下視丘和杏仁核（amygdala）；而 5-HT2A接受體則是位於皮質、帶 狀核及一些邊緣系統區和部份的基底神經節的5-HT 神經突觸後 上；5-HT2C接受體被發現存在於脈絡叢、邊緣系統和基底神經節上 ﹙87﹚ 。有研究指出，5-HT2 A藥物對5-HT2C接受體具有相同的親和 力﹙88﹚；因此5-HT2 A /2C接受體作用劑MCPP﹙89﹚，會引起焦慮作用 ﹙90﹚﹙91﹚ ，而常用之 5-HT2 A /2C受體拮抗劑ritanserin，則具抗焦慮 作用 ﹙92﹚。Ritanserin 常被用於治療廣泛性焦慮症（GAD）和心情 不佳（dysthymia）的患者﹙93﹚。 活化5-HT2 A接受體會增加cortisol、ACTH、renin 及 prolactin 之分泌﹙94﹚。而5-HT2B接受體分布於外側中隔、背側下視丘、杏仁 核﹙95﹚。5-HT2B接受體作用劑 BW723C86 直接注射入杏仁核內側有 抗焦慮作用﹙96﹚。5-HT2接受體活化結果造成多種腦區神經興奮，活 化5-HT2 A接受體造成之興奮反應，與減少鉀離子電導性相關﹙97﹚。 在電生理研究中5-HT2 A接受體牽涉到調節藍斑核之noradrenergic 神經﹙98﹚。 5-HT3接受體則在邊緣系統如杏仁核﹙99﹚等區域分布最多。

5-HT3接受體是ligand-gated ion channel。1992 年 Martin 等證明活

化5-HT3接受體可增強5-HT 之釋放﹙100﹚。有研究指出活化 5-HT3

接受體抑制acetylcholine 釋放非直接作用﹙101﹚﹙102﹚，而經由 GABA。 電生理研究中則指出，5-HT3接受體亦參與調節腦部之 dopamine 神經活性。其拮抗劑如 ondansentron 和 granisetron 已被運用於治療 抗腫瘤藥物及放射線治療引起的噁心嘔吐，另外臨床上也有報導指 出ondansetron 具明顯之抗焦慮作用﹙103﹚。 首先指出5-HT4接受體可能參與焦慮的是 Costall 和 Naylors。

5-HT4接受體分佈於nigrostriatal 和 mesolimbic system﹙104﹚﹙105﹚。有

越來越多的證據指出5-HT4接受體也參與調節dopamine 之釋放，

5-HT4接受體活化也造成海馬迴5-HT 釋放增加﹙106﹚。1994 年

Consolo 等證明側腦室給予 5-HT4接受體作用劑BIMU1 和 BIMU8

第六節 焦慮之囓齒類動物模式 以囓齒類動物作抗焦慮實驗的方法及模型之歷史悠久，因動物僅 能依其反射行為來判斷，而發展出的實驗模型，依非條件反射建立的 焦慮模型其分類又可分成探究行為焦慮模型及社會行為模型；而以探 究行為焦慮模型的實驗方法最多，如舉臂型十字迷宮（elevated plus-mazetese，EPM）實驗、小鼠爬梯實驗、小鼠明暗穿箱、孔洞實 驗(hole-board test)、大鼠開場實驗。社會行為模型亦有大鼠群居接觸 實驗(the social interaction test)、分離發聲實驗﹙7﹚。

在本實驗採用舉臂型十字迷宮實驗及孔洞實驗，作為探究行為焦 慮模型，實驗方法分述如下︰ 一、舉臂型十字迷宮 1﹒實驗儀器是由兩個開放臂 ( 30 × 5 cm)及兩個封閉臂 ( 30 × 5 × 15 cm)，中間開放之正方形( 5 × 5 cm)相連接，距離地面 50cm 高所組成。實驗流程是將小鼠放入正方形處，面向開放臂，連 續測定 5 分鐘。 2﹒實驗記錄指標分為三個方面：(1) 進入開放臂時間（秒）（open arm

time,OT）及進入封閉臂的時間（秒）（closed arm time,CT）。(2).

次數，以小鼠四個爪子均進入到臂內為準，中途一個爪子從該 臂中完全退出則為該次進入活動完成。及進入封閉臂次數 （closed arm entry,CE）：進入到任一封閉臂的次數，以小鼠四 個爪子均進入到臂內為準。 由（1）~（2）分別計算出：1開放臂和封閉臂的總進入次 數，即：OE+CE,表示小鼠的運動活力（locomotor activity）；2開 放臂進入次數（OE），即：開放臂進入次數/（開放臂進入次數+ 封閉臂進入次數）；3開放臂停留時間比例（OT），即開放臂停留 時間/（開放臂進入時間+封閉臂進入時間）。每隻小鼠測試5 min， 中間用10%乙醇溶液擦拭迷宮清除動物遺跡，且用乾布擦淨后再 進行下一隻小鼠測試。 3.評估指數 焦慮 抗焦慮 進入開放臂時間及次數 ↓ ↑ 進入封閉臂時間及次數 ↑ ↓

二、孔洞實驗 1﹒實驗儀器是孔板箱壁及每一孔周邊都裝有紅外光電管，並與微機 相聯，可同時自動記錄動物的點頭次數和點頭時間、運動活性及 站立數等多項指標，既提高工作效率又增加實驗可靠性。而流程 是將大鼠單獨放置於實驗箱中央，背朝觀察者，開始記錄 5min 內 的下述行為指標，動物兩眼消失在洞中為一次點頭(a head-dip) ， 記錄 5min 的點頭次數及點頭持續時間。（1）head-dipping 時間和 次數：以動物把頭部伸入孔中直到雙眼低於板平面時為一次。大 鼠在一個圓孔探究一次後，不離開該圓孔而繼續探究該孔的次數 不計入，離開該孔後重新回來探究，算作另一次有效探究次數， 並由此計算出每隻大鼠探究所有圓孔的次數的總和；以秒表記錄 每一次的有效研究時間（秒），單次探究時間不足1 秒（持續 2 秒 及以上者按實際時間計算）。（2）locomotor activity（運動活力） 動物在實驗箱內水平走動的時間（除去停下來探究圓孔、後腿豎 立身體和停滯修飾身體、觀望等身體無水平運動所占用時間）。（3） rearin（後腿直立豎立身體）的次數：後腿支持使身體豎立的次數。 （4）head-dipping 潛伏期（latency to the first head-dipping）：從大

2﹒評估原理是利用新奇(curiosity)和恐懼(fear)兩個因素來瞭解動物在 新環境下的行為，並以逃避(escapes)來反應這兩個因素的作用結 果。 焦慮 抗焦慮 點頭時間 ↓ ↑ 點頭次數 ↓ ↑

第三章 實驗材料與方法

第一節 實驗材料

一、 藥材之基原與製備

1. 本實驗所使用之夜交藤藥材採集自雲林縣斗六鎮黃進溪先生 的藥園經陳忠川教授鑑定，其基原為：

蓼科(Polygonaceae)植物何首烏 Polygonum multiflorum Thunb.

的藤莖或帶葉藤莖。將夜交藤藥材鮮品15 kg 陰乾後為 12.2

kg，以 70%乙醇水浸潤之，在 40 ℃迴流抽取四次，每次約兩 天，共八天合併抽取液，經減壓濃縮乾燥後，即得夜交藤乙醇

粗抽物278.5 g，抽出率 2.28%。

2. Emodin(大黃素)購自 Sigma chemical Company (St.Louis MO, U.S.A.)。

3. 實驗動物

本研究採用之動物為樂斯科生物科技股份有限公司

(BioLASCO Taiwan Co., Ltd.)提供 SD 雄性大鼠，體重 276~300 克(孔洞實驗 hole-board test 實驗用)。ICR 雄性小鼠，體重 22~24 公克(舉臂型十字迷宮實驗用)。

二、 實驗試藥

1.Diazepam 購自 Siu Guan Chemical Work。

2.N-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-N-(2-pyridiny)Cy colhexane carboxamide (WAY-100635)

選購自 Sigma chemical Company (St.Louis MO, U.S.A.)。 3. 8-Hydroxy-2-(di-n-propylamino)tetralin(8-OH DPAT)

選購自 Sigma chemical Company (St.Louis MO, U.S.A.)。 4. 1-(2,5-dimethoxy-4-iodophenyl)-2-aminopropane (DOI)

選購自 Sigma chemical Company (St.Louis MO, U.S.A.)。 5.4-(2´-methoxy-phenyl)-1-[2´-(n-2"-pyridinyl)-p-iodobenzamido]-et

hyl-piperazine HCl(p-MPPI)

選購自 Sigma chemical Company (St. Louis MO, U.S.A.)。 6. Ritanserin(RIT), Buspirone HCl （BUS）, norepinephrine HCl

（NE）, dopamine HCl（DA）, 5-hydroxytryptamine HCl （serotonin,5-HT）, vanilly-mandelic acid （VMA）, homovanillic aci（HVA）, 5-hydroxy-indole3-acetic acid （5-HIAA）選購自 Sigma chemical Company (St. Louis MO, U.S.A.)。

第二節 實驗方法 一、 抗焦慮實驗： 1. 夜交藤 70%乙醇粗抽物及大黃素對孔洞實驗(hole-board test) 誘發焦慮之影響： 分別口服給予大、小鼠一次不同劑量夜交藤乙醇粗抽 物（0.1, 0.5, 1.0 g/kg）及大黃素（1, 10, 15 mg/kg）；60 分鐘 後，將大鼠單獨放置於實驗箱中央，大鼠頭部背朝觀察者， 開始記錄5min 內的下述行為指標，動物兩眼消失在洞中為

一次點頭(a head-dip) ，記錄 5min 的點頭次數及點頭持續 時間，並測其水平走動之活動量的變化。。

本實驗以diazepam（1.0 mg/kg, i.p.）及 buspirone（2.0

mg/kg, i.p.）作為正對照組，於給藥 30 分鐘後進行試驗。每 隻動物測試5 分鐘，並於每隻動物測試完後將地板擦拭乾 淨。實驗進行時間從下午一點至五點。 2. 夜交藤 70%乙醇粗抽物及大黃素對舉臂型十字迷宮誘發焦慮之 影響： 分別口服給予小鼠不同劑量夜交藤乙醇水粗抽物（0.1, 0.5, 1.0 g/kg）及大黃素（1, 10, 15 mg/kg）；60 分鍾後，將小 鼠放入正方形中間，連續測定5 分鐘，以進入開放臂及封閉

臂之次數及滯留開放臂及封閉臂之時間為評估標準，並測其

水平走動之活動量的變化。本實驗以diazepam（1.0 mg/kg,

i.p.）及 buspirone（2.0 mg/kg, i.p.）作為正對照組，於給藥 30 分鐘後進行試驗。實驗時間從下午一點至五點。 二、 大黃素抗焦慮作用機轉之探討： (一) 對小鼠腦內單胺濃度及其代謝物濃度的影響 1.腦組織前處理 口服給予大黃素（10, 15 mg/kg）、buspirone 及對照組給予 vehicle，共 4 組每組 10 隻，60 分鐘後，將小鼠斷頭取腦，分 成紋狀體(striatum)、海馬迴(hippocampus)、皮質(cortex)區域， 均質離心(14000 rpm；30min；4 )℃ ；保存於-80℃的冰箱中，待 需要時解凍離心(10000 rpm ；5min；4 )℃ ，取上清液使用。 2.移動相(mobile phase)配置 分別秤取 HAS(1-庚烷磺酸納,Sodium 1-heptanesutate) 1.75 g Na4EDTA 0.1 g TEA(三乙胺) 3.5 mL PA (磷酸) 4.0 mL

將上述試藥加水至1,000 mL，以 H3PO4校正至 pH=2.8。以 0.22μm 之 membrane filter 抽氣過濾後，即可上線使用。 3.標準品溶液配置 標準品易變質，秤取配置動作要快；一定要避光儲存，上線使 用前再行配置並小心配置。 分別秤取 NE、DA、5-HT、VMA、HVA 及 5-HIAA 0.02g 於 小燒杯中，加入 50 ml LC 級純水，混合均勻；取前述溶液上 液 2ml，加入 100 ml LC 級純水，及取得標準品溶液。 4. 單胺測定(monoamine level) 以上分離所得鼠腦單胺(NE、DA、5-HT)及其代謝物(VMA、 HVA、5-HIAA)濃度，使用高速液相層析儀(HPLC Waters)測定， 分離管柱（廠牌 MERCK，型號 LICHROCART 125-4mm

LICHROSPHER RP-18e），流速為 1.0ml/min，樣品注入量為 10μl。UV Detector 之測定波長使用 280nm。實驗結果以 Waters 2487 紫外光/可見光偵測器記錄。

(二) 併用影響中樞 GABAergic 及 serotonergic system 之藥物大黃素 抗焦慮作用之影響：

大黃素（10 mg/kg）口服給予小鼠 60 分鐘後，再與影響

中樞GABAergic 及 serotonergic system 之藥物分別併用，依前

法（舉臂型十字迷宮實驗），進行實驗。

使用藥物如下：

(1) Diazepam（0.5 mg/kg, i.p.）30 分鐘前給予(109)。

(2) Buspirone（5-HT 1A receptor partial agonist(110)；0.05 mg/kg,

i.p.）30 分鐘前給予。

(3) WAY-100635（5-HT1A selective antagonist；0.3 mg/kg, s.c.）30

分鐘前給予(111)。

(4) 8-OH DPAT（5-HT1A selective anonist；0.75 mg/kg, i.p.）30 分

鐘前給予(112)。

(5) P-MPPI（5-HT1A selective antagonist；0.5 mg/kg, i.p.）30 分鐘

前給予(113)。

(6) DOI（5-HT2 selective anonist；1.5 mg/kg, i.p. ）30 分鐘前給

予(114)。

三、統計方法

本研究使用SAS for windows 統計軟體，實驗所得之數據先以

One-way ANOVA 分析其變異數，藥物組和對照組顯著性檢驗採用 Tukey test 檢定其間差異之顯著性；凡 p 值小於 0.05 以下時，則認為 有統計意義。

第四章 實 驗 結 果

一、對舉臂型十字迷宮誘發焦慮之影響： (一)、夜交藤乙醇水粗抽物對舉臂型十字迷宮誘發焦慮之影響： Table 1 結果顯示，口服 0.5,1g/kg 劑量夜交藤乙醇水粗抽物 對小鼠的舉臂型十字迷宮開放臂進入次數及時間均有增加 的作用，封閉臂進入次數及時間則有減少的作用。

Table 1. Effects of ethanol extract of Polygoni Multiflori Caulis

(PMCEtOH

)

on the arms entries and the time spent in the closed

arms and open arms of the elevated plus-maze test during a 5-min test in mice.

PMCEtOH (g/kg )

Control Diazepam Buspirone

0.1 0.5 1.0 封閉臂進入 次數 36.2±3.4 23.4±0.6*** _20.3±1.1*** _{35.8±1.5 26.9±2.7}*** _15.9±1.5*** 封閉臂進入 時間 179.7±31.7 219.4±1 211.5±0.5 197.2±30.7 173.4±18.2 133.1±14.6*** 開放臂進入 次數 7.7±1.8 15±0.5*** _14.7±0.4*** _{9.3±1.8 17.6±2.1}*** _28.3±2.6*** 開放臂進入 時間 9.7±1.9 18.7±0.7*** _21.5±0.5*** _{11.5±2.9 19.9±2.3}*** _33.7±3.8***

Data represented as Mean±STD (N=10). ***P-Value＜0.001 as compared with the control group.

(二) 大黃素對舉臂型十字迷宮誘發焦慮之影響：

Table 2 結果顯示，口服 10,15 mg/kg 劑量大黃素對小鼠的 舉臂型十字迷宮開放臂進入次數及時間均有增加的作用，封閉 臂進入次數及時間則有減少的作用。

Table 2. Effects of emodin on the arms entries and the time spent in the closed arms and open arms of the elevated plus-maze test during a 5-min test in mice.

Data represented as Mean±STD (N=10). ***P-Value＜0.001 as compared with the control group.

Emodin (g/kg) Control _{Diazepam Buspirone}

1 10 15 封閉臂進入 次數 38.7±2.4 23.4±0.6*** _20.3±1.1*** _{36.5±1.8 26.6±2.7}*** _14.5±2.0*** 封閉臂進入 時間 186.6±34.1 219.4±1 211.5±0.5 196.8±33.1 168.9±24.2 156.2±14.7*** 開放臂進入 次數 6.9±1.9 15±0.5*** _14.7±0.4*** _{8.5±2.0 18.7±1.4}*** _31.0±2.6*** 開放臂進入 時間 8.9±2.0 18.7±0.7*** _21.5±0.5*** _{10.6±2.8 19.1±2.3}*** _31.2±8.6***

二、對孔洞實驗誘發焦慮之影響：

Table 3 結果顯示，口服夜交藤乙醇水粗抽物（0.5,1.0 g/kg）及大 黃素(10,15 mg/kg)劑量下對大鼠的孔洞實驗點頭次數(Head-dip counts) 及點頭持續時間(Head-dip duration) 均有增加的作用，而第一次點頭 (Head-dip latency (s))的時間則有減少的作用。

Table 3. Effects of ethanol extract of Polygoni Multiflori Caulis (PMCEtOH

)

and emodin on thehead-dip counts,head-dip

duration and head-dip latency in the Hole-board test during a 5-min test in rat.

Drug Dose Head-dip

latency (s) Head-dip counts

Head-dip duration C 131.7±7.1 3.4±0.4 5.8±0.5 0.1 91.6±3.7 4.8±0.4 10.8±0.4 0.5 60.2±2.8*** 6.6±0.4*** 17.8±0.8*** PMC_EtOH(g/kg) 1 35.6±1.1*** 12.1±0.4*** 27.2±0.5*** Drug Dose Head-dip

latency (s) Head-dip counts Head-dip duration C 125.6±5.9 4.0±0.4 5.0±0.6 1 86.3±3.4 4.8±0.4 11.1±0.4 10 64.4±2.8*** 7.0±0.4*** 19.1±0.8*** Emodin (mg/kg) 15 32.9±1.1*** 10.0±0.4*** 27.3±0.6*** Data represented as Mean±STD (N=10). ***P-Value＜0.001 as compared with the control group.

三、對大、小鼠運動量之影響： (一) 舉臂型十字迷宮 1.夜交藤 70%乙醇粗抽物對小鼠自發運動量之影響 由Fig 1 結果顯示，口服不同劑量夜交藤乙醇水粗抽物 （0.1，0.5，1.0 g/kg）對小鼠移動距離無明顯變化。

Fig 1. Effect of ethanol extract of Polygoni Multiflori Caulis (PMCEttOH) on the

travel distance in mice. Data represented as Mean±STD (N=10). 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 C 0.1g/kg 0.5g/kg 1g/kg PMCEtOH 移 動 距 離 mm

2.大黃素對小鼠自發運動量之影響

由 Fig 2 結果顯示，口服不同劑量大黃素(1，10，15mg/kg)

對小鼠移動距離無明顯變化。

Fig 2. Effect of emodin on the travel distance in mice. Data represented as Mean±STD (N=10). 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 C 1mg/kg 10 mg/kg 15 mg/kg Emodin 移動距離 ( 豪公分 )

(二)、孔洞實驗 1.夜交藤 70%乙醇粗抽物對大鼠自發運動量之影響 由Fig 3 結果顯示，口服不同劑量夜交藤乙醇水粗抽物 （0.5, 1.0 g/kg）對大鼠運動量有增加作用。

Fig 3. Effect of ethanol extract of Polygoni Multiflori Caulis (PMCEtOH) on the

locomotor activity in rat. Data represented as Mean±STD (N=10). ***P＜0.001 as compared with the control group.

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 C 0.1g/kg 0.5g/kg 1g/kg PMCEtOH 運動量 ( 次數 )

2.大黃素對大鼠自發運動量之影響

由Fig 4 結果顯示，口服不同劑量大黃素(10, 15mg/kg)對大

鼠運動量有增加作用。

Fig 4. Effect of emodin on thelocomotor activity in rat.

Data represented as Mean±STD (N=10). ***P＜0.001 as compared with the control group. 0 5 10 15 20 25 C 1mg/kg 10mg/kg 15mg/kg Emodin 運動量 ( 次數 )

四、與影響中樞GABAergic 及 serotonergic system 之藥物分別併用， 進行舉臂型十字迷宮實驗來探討大黃素抗焦慮作用之機轉： 如Table 4 結果所示，口服大黃素在 15mg/kg 劑量時，顯著減少 小鼠在封閉臂進入次數與滯留時間及增加開放臂進入次數及滯留時 間； diazepam 在 0.5mg/kg 劑量下並不影響小鼠在封閉臂及開放臂 之進入次數與滯留時間，於並用大黃素後亦不影響diazepam 誘發之 封閉臂及開放臂之進入次數與滯留時間。 5-HT1A 之部份致效劑 buspirone 於 0.05mg/kg 劑量下並不影響 小鼠在封閉臂及開放臂之進入次數與滯留時間，但併用大黃素後則可 縮短誘發之封閉臂進入次數與滯留時間、延長誘發之開放臂進入次數

與滯留時間。並且縮短5-HT1A selective antagonist WAY-100635 於

0.3mg/kg 所增加之封閉臂進入次數與滯留時間及延長所減少之開放 臂進入次數與滯留時間。

5-HT1A selective antagonist P-MPPI 於 0.5mg/kg 劑量下並不影響

小鼠在封閉臂及開放臂之進入次數與滯留時間，但並用大黃素後則可 縮短誘發之封閉臂進入次數與滯留時間及延長誘發之開放臂進入次

數與滯留時間、並且縮短5-HT1A selective antagonist 8-OH DPAT 於

0.75mg/kg 所增加之封閉臂進入次數與滯留時間及延長所減少之開放 臂進入次數與滯留時間。

5-HT2 拮抗劑 ritanserin 於 0.01mg/kg 劑量下並不影響小鼠在封 閉臂及開放臂之進入次數與滯留時間，但併用大黃素後則可縮短誘發 之封閉臂進入次數與滯留時間及延長誘發之開放臂進入次數與滯留 時間。而5-HT2A 致效劑DOI 於 1.5mg/kg 劑量下，可增加小鼠在封閉 臂之進入次數與滯留時間並減少小鼠在開放臂進入次數與滯留時 間，但併用大黃素後則可縮短所增加之封閉臂進入次數與滯留時間及 延長所減少之開放臂進入次數與滯留時間。

Table 4. Effect of emodin(EMO) on DIZ-, BUS-, WAY-100635-, 8-OHDPAT-, P-MPPI-, DOI-, RIT-induced time spent ,arm entries in the plus-maze during a 5-min test.

Closed arms Open arms

Arm entries Time spent(sec) Arm entries Time spent(sec) Control 30.2±0.2 226.2±0.5 3.1±0.2 3.9±0.1 EMO 15mg/kg 17.5±0.2 198.4±0.4 14.0±0.1 20.0±0.2 DIZ 23.4±0.6 219.4±1.0 5.0±0.5 3.7±0.7 DIZ+EMO 23.6±0.5 230.9±1.1 16.0±0.7*** 16.5±0.5*** BUS 20.3±1.1 211.5±0.5 4.7±0.4 3.5±0.5 BUS+EMO 19.0±0.6 171.0±1.7* 33.8±0.8*** 35.1±0.6*** WAY100635 33.5±0.5 232.9±1.0 3.9±0.3 6.6±0.3 WAY+EMO 12.5±0.5 *** 157.1±2.0*** 14.2±0.6*** 39.5±0.6*** 8-OH DPAT 39.9±0.9 241.2±1.3 4.0±0.3 7.7±0.3 8-OH DPAT+EMO 10.5±0.5 *** 193.9±1.1** 17.9±0.8*** 35.2±0.9 *** p-MPPI 33.0±0.5 231.0±0.6 9.3±0.5 19.4±0.4 p-MPPI+EMO 14.8±0.3 *** 197.4±2.2** 16.0±1.1*** 35.4±2.0** DOI 42.0±1.7 226.0±1.0 4.5±0.4 6.8±0.7 DOI+EMO 14.5±0.7 *** 174.7±0.8** 24.8±0.7*** 31.2±0.9*** RIT 37.6±1.3 231.7±1.2 4.8±0.4 13.9±0.5 RIT+EMO 15.2±0.6*** 176.9±1.8** 16.5±0.7*** 34.9±1.3*** Data represented as Mean±STD (N=10). *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001 as compared with the DIZ-, BUS-, WAY-100635, 8-OHDPAT-,P-MPPI-,DOI-,RIT- group

五、對小鼠腦內單胺濃度及其代謝物濃度的影響

(一) 大黃素對小鼠腦內紋狀體單胺及其代謝物濃度之影響︰

由Table.5.結果顯示，口服大黃素(10 與 15 mg/kg)對小鼠紋

狀體中NE、DA、5-HT 的濃度有減少之作用，對 VMA、HVA

及5-HIAA 的濃度有增加之作用。

Table. 5. The effect of emodin on the concertration of monoamines and their metabolites in the striatum of mice.

Group 紋狀體 (ng/g tissue)

NE DA 5-HT VMA HVA 5-HIAA Control 113.50±1.80 8280.25±326.35 685.71±9.03 24.43±2.18 812.42±29.66 189.56±8.26 Buspirone 41.75±2.40*** _{3357.36±59.45}*** _221.69±4.75*** _81.61±2.02*** _{1951.87±13.59}*** _621.92±6.79*** Emodin 10mg 102.33±6.32 3631.36±61.02*** _467.45±9.61*** _73.6±5.19*** _{2029.63±24.28}*** _566.41±4.63*** Emodin 15mg 39.87±2.04*** _{3301.24±59.02}*** _211.21±4.94*** _79.22±2.73*** _{2116.37±14.18}*** _611.29±7.86***

Data represented as Mean±STD (N=10). ***P＜0.001 as compared with the control group.

(二) 大黃素對小鼠腦內海馬迴單胺及其代謝物濃度之影響︰

由Table.6.結果顯示，口服大黃素(10 與 15 mg/kg)對小鼠海

馬回中NE、DA、5-HT 的濃度有減少之作用，對 VMA、HVA

及5-HIAA 的濃度有增加之作用。

Table.6. The effect of emodin on the concertration of monoamines and their metabolites in the hippocampus of mice.

海馬迴 (ng/g tissue) Group

NE DA 5-HT VMA HVA 5-HIAA Control 284.48±5.71 18.79±1.81 566.83±11.62 53.01±3.23 13.92±2.01 187.09±4.99 Buspirone 109.91±5.57*** _6.56±0.75*** _170.85±8.71*** _171.39±7.59*** _33.43±2.64*** _611.10±5.32*** Emodin 10mg 254.47±4.76 7.94±1.21*** _398.23±7.23*** _159.45±4.88*** _34.25±2.13*** _560.22±7.85*** Emodin 15mg 99.65±4.52*** _7.56±1.17*** _182.35±7.28*** _166.57±8.11*** _36.78±2.41*** _595.82±6.02***

Data represented as Mean±STD (N=10). ***P＜0.001 as compared with the control group.

(三) 大黃素對小鼠腦內皮質單胺及其代謝物濃度之影響︰

由Table.7.結果顯示，口服大黃素(10 與 15 mg/kg)小鼠皮質

中NE、DA、5-HT 的濃度有減少之作用，對 VMA、HVA 及

5-HIAA 的濃度有增加之作用。

Table.7. The effect of emodin on the concertratoin of monoamines of and their metabolites in the cortex of mice.

皮質 (ng/g tissue) Group

NE DA 5-HT VMA HVA 5-HIAA Control 303.89±8.47 16.02±1.60 458.95±6.04 66.59±2.98 24.09±0.88 100.32±6.39 Buspirone 114.34±8.27*** _6.27±2.09*** _138.49±3.01*** _215.21±9.97*** _64.97±3.18*** _{323.55±11.05}*** Emodin 10mg 276.35±5.04 6.76±1.29*** _321.06±3.84*** _202.38±4.03*** _60.98±4.23*** _287.88±9.43*** Emodin 15mg 106.75±9.11** _6.35±1.31*** _146.60±4.07*** _210.36±7.29*** _64.11±3.96*** _312.22±8.22***

Data represented as Mean±STD (N=10). ***P＜0.001 as compared with the control group.

第五章 討 論

本實驗以舉臂型十字迷宮及孔洞實驗誘發動物的焦慮模式，來探 討夜交藤及其主要成分大黃素的抗焦慮作用，並以常用的抗焦慮藥物 diazepam 及 buspirone 為正對照組，藉以評估其抗焦慮作用之療效。 孔洞實驗誘發大鼠焦慮模式為1962 年 Boissier 和 Simon 首次建 立，其後被廣泛用於藥效研究﹙115﹚。其實驗原理是利用新奇(curiosity) 和恐懼(fear)兩個因素來控制動物在新環境下的行為，用逃避(escapes) 來反應這兩個因素的作用結果而動物的反覆點頭(head-dipping)反映 出其新奇感和對逃避的渴望。 實驗裝置大鼠和小鼠是有所區別。故可利用這些行為的變化程度 作為致焦慮或抗焦慮藥物之評估指標。(116)許多研究報告指出抗焦慮

藥物benzodiazepine 類藥物(如：chlordiazepoxide 及 diazepam)及

buspirone(117)等，在此誘發大鼠焦慮的研究模式中，均可延長大鼠點 頭次數及點頭持續時間，而縮短在第一次點頭時間；此現象與本研究 的正對照組DIZ 及 BUS 實驗結果相同。而口服給予夜交藤 70%乙醇 粗抽物及大黃素於15mg/kg 劑量下點頭次數(Head-dip counts)及點頭 持續時間(Head-dip duration) 均有增加的作用，而第一次點頭的時間 則有減少的作用；可推知夜交藤70%乙醇粗抽物和大黃素對孔洞實驗 誘發大鼠焦慮之實驗模式確具有抗焦慮之作用。

舉臂型十字迷宮此實驗是由Montgomery（1955）的研究發展而 來的，1984 年 Handley 和 Mithani 用來研究個種 α 腎上腺素受體致效 劑及拮抗劑的不同作用，Pellow 通過大量實驗研究，發展成有效評價 大鼠焦慮狀態的動物模型，1987 年經 Lister 進步改進裝置，用於評價 小鼠焦慮也獲得成功。本實驗原理是利用動物對新環境的探究特性和 對高敞開臂的恐慌形成動物的矛盾衝突狀態，而誘發焦慮的產生，本 模式對小鼠及大鼠均有作用，其中常以老鼠在開放臂及封閉臂的進入 次數及滯留時間，當作評估焦慮作業的指標。 國內外研究報告証實diazepam 及 buspirone(118 )可明顯增加小鼠 進入開放臂次數及延長滯留時間；此結果與本實驗的正對照組 diazepam 及 buspirone 的實驗結果一致。而分別口服給予小鼠夜交藤 70%乙醇粗抽物(1g/kg)、大黃素(15mg/kg)，實驗結果顯示均可明顯增 加小鼠之開放臂的進入次數及滯留時間；及減少小鼠之封閉臂的進入 次數及滯留時間；顯示夜交藤70%乙醇粗抽物及大黃素對於舉臂型十 字迷宮誘發小鼠之焦慮模式亦具有抗焦慮作用。 另外，因孔洞實驗及舉臂型十字迷宮誘發老鼠焦慮模式均牽涉所 評估藥物的鎮靜作用之有無，為釐清此作用是否對夜交藤 70%乙醇粗 抽物和大黃素之抗焦慮作用實驗結果有所影響，因此本研究利用動物 的自發運動量測量鎮靜作用模式，進一步探討夜交藤70%乙醇粗抽物

和大黃素對老鼠自發運動量及鎮靜作用之影響。實驗結果顯示，具抗 焦慮作用。 一般而言，許多抗焦慮藥物(如 benzodiazepine 類藥物)在低劑量 下具抗焦慮作用，但在高劑量時亦會呈現鎮靜作用。但在孔洞實驗及 舉臂型十字迷宮中，夜交藤乙醇水粗抽物(1 g/kg)與大黃素(15mg/kg) 口服之較大劑量對老鼠自發運動量有增加作用，顯示在上述二誘發小 鼠焦慮模式中之抗焦慮活性，可排除鎮靜作用所致。綜合上述實驗結 果發現，夜交藤乙醇水粗抽物及大黃素產生抗焦慮作用之劑量大約相 同，推測其原因可能是大黃素為夜交藤抗焦慮作用的主要活性成份之 一，此推測仍有待進一步探討。 大黃素之抗焦慮作用是否涉及GABAergic system，因此我們在舉 臂型十字迷宮試驗併用diazepam 作探討。Diazepam 於 0.5g/kg 劑量下 並不影響小鼠在封閉臂及開放臂之滯留時間及進入次數。併用大黃素 亦不影響DIZ 誘發小鼠進入開放臂及封閉臂之滯留時間及進入次 數。所以推論大黃素之抗焦慮作用可能與GABAergic system 無關。 近年來關於動物行為及治療焦慮症患者的研究顯示，serotonergic system 在恐懼和焦慮情緒行為的調節上扮演一重要之角色。減少腦內 serotonergic system 活性，會產生抗焦慮作用；增加腦內 serotonergic

system 活性則會產生焦慮作用（68,69）

Sanchez 等研究顯示，5-HT 各類型受體與動物焦慮研究模式中誘發焦

慮之行為均有關連(120)，其中以5-HT1A、5-HT1B、5-HT2A/2C幾類受體

與焦慮關係較為密切(70)；因此，本研究併用突觸前 5-HT1A致效劑及

拮抗劑(BUS 和 WAY100635)、突觸後 5-HT1A致效劑及拮抗劑(8-OH

DPAT 和 p–MPPI)、5-HT2致效劑及拮抗劑(DOI 和 RIT)，並以舉臂型

十字迷宮試驗作為誘發小鼠焦慮模式，進一步探討5-HT 受體在大黃

素抗焦慮作用所扮演之角色，進一步闡明大黃素抗焦慮作用之作用機 轉。

雖然5-HT1 receptors 分佈極廣，但主要為存在於腦幹縫核對 dorsal

raphe nucleus)5-HT 細胞體突觸前之 5-HT1A接受體(5-HT1A

presynaptic receptors)，為一種 autoreceptors 或稱為 somatodendritic autoreceptors；5-HT1A突觸後接受體(5-HT1Apostsynaptic receptors)則是

集中在limbic system(包括 hippocampus 和 amygdala)(71)。活化突觸前

5-HT1A autoreceptors 或阻斷突觸後 5-HT1A receptors 都將減少 5-HT 的 神經傳遞延(121)。 已知突處前5-HT1A autoreceptors 及突觸後 5-HT1A receptors 與 5-HT1A部份致效劑或5-HT1拮抗劑結合後，會活化Gi protein，而引 起K＋ 通道打開，促使神經細胞膜過極化，進而降低 5-HT 神經傳導而 產生抗焦慮活性(122)。BUS 為突觸前 5-HT1A之部份致效劑，低劑量時

與5-HT 神經突觸前之 5-HT1A autoreceptors 結合後，會引起 5-HT 神 經傳導減低及降低邊緣區5-HT 神經活性，減少 5-HT 之釋放，而產 生抗焦慮作用(123)。而WAY-100635 則是突觸前 5-HT1A受體拮抗劑， 其致焦慮作用是經由競爭性阻斷突觸前5-HT1A受體原有的抑制性， 而使5-HT 大量釋放，導致焦慮的產生(124)。由於Costall 等研究指出 BUS 於 0.06~2.0mg/kg(i.p.)時具抗焦慮作用；因此，本研究選用不影 響小鼠在開放臂及封閉臂滯留時間與進入次數之劑量之BUS(0.05 mg/kg；i.p.)及引起焦慮劑量之 WAY-100635(0.3 mg/kg；s.c.)與大黃素 (15mg/kg；p.o.)併用；實驗結果發現，大黃素可增加 BUS 在開放臂滯 留時間與進入次數，縮短封閉臂滯留時間與進入次數；且縮短 WAY-100635 增加之封閉臂滯留時間與進入次數，及延長所減少之開 放臂滯留時間與進入次數；顯示大黃素之抗焦慮作用可能與興奮突觸 前5-HT1A autoreceptors 有關。 其次，p–MPPI 為一專一性 5-HT1A受體拮抗劑(125)，具抗焦慮作 用(114)，為目前研究5-HT1A受體與焦慮關係之重要拮抗劑(122)；1997

年，Cao 和 Rodgers 報告指出 p–MPPI 腹腔給予 1.5~4.5 mg/kg 時具抗

焦慮作用(116)，其抗焦慮作用是經由阻斷突觸後5-HT1A受體，減低

5-HT 神經傳遞所致。此外，8-OH DPAT 為 5-HT1A之致效劑其作用機

使用不影響小鼠在孔板實驗滯留時間劑量之 p–MPPI (0.5 mg/kg；i.p.) 及引起焦慮劑量之8-OH DPAT(0.75mg/kg；i.p.)與大黃素(15mg/kg； p.o.)併用；結果顯示，大黃素可增加 p–MPPI 開放臂滯留時間與進入 次數，及縮短封閉臂滯留時間與進入次數；且可縮短8-OH DPAT 所 增加之封閉臂滯留時間與進入次數，延長8-OH DPAT 減少之開放臂 滯留時間與進入次數；顯示大黃素之抗焦慮作用機轉可能與阻斷5-H 神經突觸後5-HT1A受體有關。 突觸後的5-HT2受體(Postsynaptic 5-HT2 receptors)主要存在於皮 質層、下視丘和杏仁核等處。RIT 為 5-HT2之拮抗劑，腹腔給予 1mg/kg 時會延長小鼠在開放臂滯留時間與進入次數而縮短在封閉臂滯留時 間與進入次數(77)；DOI 為 5-HT2之部份致效劑，在腹腔給予1.5mg/kg 時則會產生致焦慮的作用。本研究使用不影響小鼠在封閉臂及開放臂

滯留時間劑量之RIT(0.01 mg/kg；i.p.)及會引起焦慮劑量之 DOI(1.5

mg/kg；i.p.)與大黃素(15mg/kg；p.o.)併用；實驗結果顯示，大黃素可

增強RIT 開放臂滯留時間與進入次數，及縮短封閉臂滯留時間與進入

次數；但可縮短DOI 增加之封閉臂滯留時間與進入次數，延長所減

少之開放臂滯留時間與進入次數。故可推知，大黃素之抗焦慮作用與

據文獻指出5- HT 直接注入腦幹中會誘發焦慮產生，而減低腦幹 中5-HT 之濃度則會產生抗焦慮作用(109)。腦幹中DA 過多或 locus coeruleus 之 NE 神經被活化時亦會引起焦慮之產生(119)。因為控制情 緒的變化與位於腦幹中邊緣系統內的神經化學物質(如 5-HT、NE、 DA 等)及其代謝物的含量有關(127) ，腦幹中5-HT、NE、DA 等單胺神 經傳遞物質與其代謝物濃度之變化在焦慮的產生與治療上扮演一重 要之角色(115)。因此，本研究利用高速液相層析法探討大黃素對實驗 動物腦中單胺及其代謝物濃度變化之影響。實驗結果顯示，口服給予 15mg/kg 大黃素可減少鼠腦紋狀體、海馬迴、皮質 5-HT、NE、DA 之濃度及增加VMA、HVA 和 5-HIAA 之濃度。故可推知，大黃素在 15mg/kg 之抗焦慮作用可能是經由減少腦幹中 5-HT、NE、DA 之濃 度而產生抗焦慮作用。 綜合以上結果顯示，夜交藤乙醇水粗抽物(1g/kg)及大黃素 (15mg/kg)於不論在孔洞實驗或舉臂型十字迷宮誘發小鼠焦慮模式中 均具明顯之抗焦慮作用。而大黃素之抗焦慮作用機轉則可能與活化突 觸前5-HT1A autoreceptors，降低突觸後 5-HT1A及5-HT2受體之活性， 進而減少腦幹中5-HT 之濃度有關。

第六章 結 論

一、本研究以孔洞實驗及舉臂型十字迷宮探討夜交藤之抗焦慮作用， 獲得結果如下：

1. 孔洞實驗誘發焦慮模式：口服夜交藤 70%乙醇粗抽物

（0.5 ,1.0g/kg）及大黃素（5,15mg/kg）對大鼠的孔洞實驗，點 頭次數(Head-dip counts)及點頭持續時間(Head-dip duration) 均 有增加的作用，而第一次點頭(Head-dip latency (s))的時間則有 減少的作用，顯示具有抗焦慮作用。 2. 舉臂型十字迷宮：口服夜交藤 70%乙醇粗抽物（0.5 ,1.0g/kg） 及 大黃素（5,15mg/kg）均可增加小鼠在開放臂滯留時間與進入次 數，及減少小鼠在封閉臂滯留時間與進入次數，顯示具有抗焦 慮作用。 3. 口服夜交藤 70%乙醇粗抽物（0.5 ,1.0g/kg）及大黃素（5,15mg/kg） 對大鼠的運動量有增加，對小鼠移動距離並無顯著影響，顯示 夜交藤的抗焦慮作用與鎮靜作用無關。 三、 本 研 究 以 舉 臂 型 十 字 形 迷 宮 ， 併 用 改 變 GABAergic 及 serotonergic system 神經活性藥物，並測定鼠腦單胺及其代謝 物濃度之變化，以探討大黃素之抗焦慮作用機轉，獲得結果 如下：

1. 大黃素(10, 15 mg/kg)均可減少鼠腦紋狀體(striatum)、海馬回 (hippocampus)、皮質(cortex) NE、DA、5-HT 濃度及增加 VMA、 HVA 和 5-HIAA 之濃度及 NE、DA、5-HT 之 turnover rate。 2. 大黃素並未影響 diazepam 之抗焦慮作用，推論大黃素抗焦慮作 用可能與GABAergic 受體無關。 3. 大黃素可增強突觸前 5-HT1A之部份致效劑 buspirone 及突觸後 5-HT1A受體拮抗劑 p–MPPI 之抗焦慮作用，拮抗突觸前 5-HT1A 受體拮抗劑WAY-100635 及突觸後 5-HT1A受體作用劑 8-OH DPAT 誘發之焦慮作用，顯示大黃素抗焦慮作用與活化突觸前 5-HT1A autoreceptors 及拮抗突觸後 5-HT1A受體有關。 4. 大黃素可增強 5-HT2拮抗劑ritanserin 之抗焦慮作用，而拮抗 5-HT2致效劑 DOI 誘發之焦慮作用，顯示大黃素抗焦慮作用與 拮抗5-HT2受體有關。 綜合以上結果，顯示夜交藤與大黃素不論在孔洞實驗或舉臂型十 字形迷宮誘發大鼠或小鼠焦慮模式中均具明顯之抗焦慮作用，而大黃 素之抗焦慮機轉則可能與活化突觸前 5-HT1A autoreceptors 及降低突 觸後5-HT1A及5-HT2受體之活性，進而減少鼠腦中5-HT 之濃度有關。