利用wound healing 觀察粒線體移植改變細胞移動力

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(1)實驗利用wound healing 觀察粒線體移植改變細胞移動力材料: 1. 胃癌AGS細胞株 2. 血管內皮EAhy細胞株 3. 細胞培養基以及胎牛血清(FBS) 4. 細胞收取緩衝液(PBS buffer) 5. 粒線體萃取試劑.

(2) 什麼是細胞株 (cell line)?  細胞能持續生長，可以來自癌組織，也可以基因工程加入不死化基因，使細胞可以持續生長。  初代細胞(primary cell)---從組織分離的細胞，僅能培養數代。例如人類臍帶靜脈血管的內皮細胞(HUVEC)  AGS與Eahy都可以在廠商網路資訊查到基本資訊喔~.

(3) 培養皿學問大 --- 務必專心抄寫下來  細胞培養皿與培養細菌或是操作切除組織. 的差別在哪裡?  Matrix的種類有哪些?  利用機械力可以知道哪一些matrix可幫助細胞延展與貼附  化學的matri外，還有別的方式?.

(4) Wound healing 實驗 1. 以塑膠Tip在長滿細胞的培養皿上刮一道空隙.  測試物或是物理刺激等，觀察細胞向中間癒合的速度 2. 癒合速度代表”細胞分裂”與”細胞爬行”二大指標 3. 另有ibid矽膠塊的方式，但實際執行上有些卡卡…….因此目前仍是以傳統的刮除方式.

(5) 細胞培養箱 (incubator)  溫度與CO2會因為不同實驗而設定不同  人體細胞37℃且需要CO2 (5%)  細菌(如大腸桿菌E.coli)37℃，但不需調節CO2  土壤菌 28 ℃，依樣不需調節CO2.  厭氧菌85% N2, 10% H2, 5% CO2.  人體細胞低氧(hypoxia)實驗:5% CO2，O2為12%.

(6) 顯微鏡觀察及拍照  光學顯微鏡10 x 10 及足夠觀察細胞群  如要觀察到單一顆細胞需用共軛焦顯微鏡  如要觀察到單一顆粒線體需要用到電子顯微鏡.  拍照: 顯微鏡連接的相機早期是底片，因此要將裡面刻度做校正。現在為數位即時影像，不用擔心焦距亮度不均等問題。除了confocal以及電子顯微鏡，其餘的幾乎可以用手機取代了…….. 對, 手機直接對著目鏡拍，不過仍需要小小訓練一下.

(7) 上課流程  上課前助教先準備好粒線體，現場立刻刮除一道gap，. 細胞加入粒線體後置入培養箱(確保可觀察到差異)  上午: 每組拿到一盤Eahy細胞  收細胞  高速離心分離粒線體  每位同學將AGS細胞刮出一道gap  加入粒線體  拍照  下午: 上課  再拍照，比對上午的照片，分析細胞癒合能力。  課程結束前: 真度結果進行開放式腦力激盪.

(8) 用動畫顯示外加粒線體被吃入細胞的現象.

(9) 歡迎各位加入. 我要當科學家夢幻隊伍~~~.

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