中國醫藥大學機構典藏 China Medical University Repository, Taiwan:Item 310903500/41248

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(1)中國醫藥大學藥學院中國藥學暨中藥資源學系博士論文編號：ICPS-D76. 指導教授：張永勳. 教授. 共同指導教授：周鳳英. 教授. I.中藥材何首烏之輻射滅菌劑量研究 Studies on the Gamma Radiation Antiseptic Dose of Polygoni Multiflori Radix II.台灣蒲公英及其誤用品之分子鑑定研究 Studies on Molecular Identification of Taraxacum formosanum and Distinguishing from Its Adulterants. 研究生：江瑩真 Chiang, Ying-Chen. 中華民國一百年七月.

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(3) 目. 錄. 目錄……………………………………………………..………..…. I. 圖目錄………………………………………………………………. VII. 表目錄…………………………………………………………….…. X. 縮寫表…………………………………………………………….…. XII. 中文摘要…………………………………………………………….. XV. 英文摘要………………………………………………………….… XVII 壹、中藥材何首烏之輻射滅菌劑量研究………………..………….. 1. 第一章緒論 …………………………………………….….……... 1. 第二章總論 …………………………………...………….….….... 6. 第一節何首烏之文獻考察 ………………….……………….... 6. 一、何首烏之本草考察 ……………..……………………... 6. ………………….……….... 9. 三、何首烏之化學成分考察…………..……………………. 15. 第二節輻射滅菌之文獻考察 ………………………………..... 17. 一、輻射的介紹 ………………………………….……….... 17. 二、中藥輻射滅菌的原理和安全評價 ………………….... 20. 三、中藥材的輻射滅菌應用……………………………....... 24. 二、何首烏之植物學考察. I.

(4) 60 四、中藥材及中成藥 Co γ 射線輻射滅菌方面的研究....... 40. 五、中草藥輻射滅菌申請合法化必備之條件……………... 45. 第三章材料與方法 …………………………….…….……..….... 47. 第一節何首烏藥材之滅菌輻射劑量實驗……………………... 47. 一、實驗材料與儀器 ……………………………………..... 47. 二、實驗方法………………………………………………... 48. 第二節何首烏藥材輻射滅菌前後之抗氧化實驗…………….. 51. 一、化學試劑 …………………………………………….... 51. 二、實驗儀器 …………………………………………….... 51. 三、實驗方法 ……………….…………………….………... 52. 第三節加馬射線不同劑量照射前後之指標成分變化比較…... 56. 一、實驗材料與儀器 ………….………………………...…. 56. 二、實驗方法 ……………………….…………….………... 56. ………………………………………………. 58. 第一節何首烏輻射滅菌前後測定結果………………………... 58. 一、外觀差異 ……………………………………………..... 58. 二、何首烏輻射滅菌前後微生物之菌數測定結果………... 58. 第二節何首烏藥材之抗氧化實驗……………………………... 60. 一、抗氧化活性結果 ……………………………………... 60. 第四章實驗結果. II.

(5) 二、抗氧化成分之結果 ……………………………...…….. 64. 三、不同劑量加馬射線照射前後之指標成分變化比較…... 65. 第五章討論 …………………………………………….……….. 66. 第六章結論 …………………………….……………………….. 71. 第七章參考文獻 ………………………………………………... 73. III.

(6) 貳、台灣蒲公英及其誤用品之分子鑑定研究……….….………... 84. 第一章緒論 …………………………………………….….……... 84. 第二章總論 …………………………………...………….….….... 90. 第一節蒲公英之文獻考察 ………………….……………........ 90. 一、蒲公英之本草考察 ……………..……………………... 90. 二、臺灣蒲公英及其誤混用之植物學考察 …………….... 95. 第二節分子鑑定之文獻考察 ………………………………..... 102. 一、以分子雜交技術為核心的分子鑑定技術 …………...... 102. 二、以聚合酶連鎖反應技術為核心的分子鑑定技術 ….... 102. 三、以 DNA 序列比對為核心的分子鑑定…………………. 103. 四、運用基因晶片技術在中草藥分子鑑定研究…………... 104. 第三章材料與方法 …………………………….…………..….... 108. 第一節材料與儀器……………………………………………... 108. ……………………………………......... 108. 二、儀器與化學品 ………………………………………..... 108. 第二節實驗方法………………………………………………... 110. 一、台灣蒲公英 ITS 之序列鑑定…………………………... 110. 二、恆溫圈環式核酸擴增法鑑定 ……………………….... 114. ………………………………………………. 117. 一、實驗材料. 第四章實驗結果. IV.

(7) 第一節蒲公英與易混用藥材及市售品之植物形態比較……... 117. 一、蒲公英及其易混用藥材之植物型態比較……………... 117. 二、市售品之植物型態比較……………………………....... 120. 第二節台灣蒲公英之分子鑑定及其易誤、混用藥材的鑑別... 122. 一、分光光度計測定值估算 DNA 的濃度…………………. 122. 二、台灣蒲公英及其易誤、混用藥材之 ITS 序列比對…... 122. 三、利用聚合酶連鎖反應鑑別台灣蒲公英正品藥材……... 123. 四、利用聚合酶連鎖反應鑑別市售台灣蒲公英藥材……... 128. 第三節建立恆溫圈環式核酸擴增法(LAMP)快速鑑定台灣蒲公英藥材………………………………………………... 129. 一、恆溫圈環式核酸擴增法之引子設計與反應性測試 …. 129. 二、 LAMP 引子的專一性測試…………………………….... 131. 三、 LAMP 引子的靈敏性測試…………………………….... 132. 四. 恆溫圈環式核酸擴增法與 PCR 方法鑑別市售台灣蒲公英藥材…………………………………………….….. 134. 第五章討論 ………………………………………………….….. 136. 第六章結論 …………………………….……………………….. 139. 第七章參考文獻 ………………………………………………... 141. 附錄一博士班期間發表之期刊論文…………………………….. 151. V.

(8) 附錄二博士班期間參與之壁報論文…………………………….. 153. 附錄三發表之期刊論 2 篇……………………………………….. 157. VI.

(9) 圖目錄圖 1-1. 游離輻射分類………………………………………………….. 17. 圖 1-2. 電磁輻射分類………………………………………………….. 18. 圖 1-3. 何首烏藥材之飲片…………………………………………….. 47. 圖 1-4. 輻射照射前後之何首烏中藥材照片………………………….. 58. 圖 1-5. 加馬輻射劑量還原力之試驗比較…………………………….. 63. 圖 1-6. 不同劑量加馬射線照射前後之指標成分 THSG 之含量結果. 65. 圖 2-1. 臺灣蒲公英植物形態圖……………………………………….. 96. 圖 2-2. 臺灣蒲公英植物外觀圖………………………………………. 96. 圖 2-3. 西洋蒲公英植物形態圖………………………………………. 96. 圖 2-4. 西洋蒲公英植物及瘦果外觀………………………………….. 96. 圖 2-5. 刀傷草植物形態圖…………………………………………….. 97. 圖 2-6. 刀傷草花的外觀……………………………………………….. 97. 圖 2-7. 刀傷草植物外觀……………………………………………….. 97. 圖 2-8. 黃鵪菜植物形態圖…………………………………………….. 99. 圖 2-9. 黃鵪菜植物外觀……………………………………………….. 99. 圖 2-10 兔兒菜植物形態圖…………………………………………….. 100. 圖 2-11 兔兒菜植物外觀……………………………………………….. 100. VII.

(10) 圖 2-12 紫背草植物外觀………………………………………………. 101. 圖 2-13 LAMP Primer 在特定基因序列上的結合位置………………. 106. 圖 2-14 LAMP primers design…………………………………………. 114. 圖 2-15 台灣蒲公英植物外觀…………………………………………. 117. 圖 2-16 台灣蒲公英瘦果外觀…………………………………………. 117. 圖 2-17 西洋蒲公英植物外觀…………………………………………. 118. 圖 2-18 西洋蒲公英瘦果外觀…………………………………………. 118. 圖 2-19 兔兒菜植物外觀………………………………………………. 118. 圖 2-20 兔兒菜花外觀…………………………………………………. 118. 圖 2-21 黃鵪菜植物外觀………………………………………………. 118. 圖 2-22 黃鵪菜乾燥植物外觀…………………………………………. 118. 圖 2-23 刀傷草乾燥植物外觀…………………………………………. 119. 圖 2-24 刀傷草瘦果外觀………………………………………………. 119. 圖 2-25 紫背草乾燥植物外觀…………………………………………. 119. 圖 2-26 紫背草瘦果外觀………………………………………………. 119. 圖 2-27 十家蒲公英藥材乾品………………………………………….. 121. 圖 2-28 台灣蒲公英引子設計………………………………………….. 123. 圖 2-29 台灣蒲公英引子 PCR 之電泳圖………………………………. 125. 圖 2-30 PCR ITS2 建構質體經 EcoRI 水解後之產物電泳圖…………. 126. VIII.

(11) 圖 2-31 以 F3-TF 及 B3-TF 引子對不同濃度之台灣蒲公英模版 DNA 進行 PCR 反應的結果…………………………………………. 127. 圖 2-32 十家市售台灣蒲公英樣品之 PCR 結果……………………..... 128. 圖 2-33 台灣蒲公英 LAMP 反應產物之檢測…………………………. 130. 圖 2-34 台灣蒲公英 LAMP 反應產物之測試…………………………. 131. 圖 2-35 台灣蒲公英 LAMP 反應的靈敏性測試………………………. 132. 圖 2-36 以 LAMP 外引子 F3 及 B3 對不同濃度之台灣蒲公英模版 DNA 進行 PCR 反應的結果…………………………………... 133. 圖 2-37 LAMP 方法鑑定市售蒲公英藥材之真偽…………………….. 134. 圖 2-38 PCR 方法鑑定市售蒲公英藥材之真偽……………………….. 135. IX.

(12) 表目錄表 1-1. 輻射劑量單位表………………………………………………... 20. 表 1-2. 射質因素表……………………………………………………... 20. 表 1-3. 輻照食品的健全性評價及管理上的國際動態……………….. 24. 表 1-4. 我國食品輻射照射處理標準…………………………………. 26. 表 1-5. 各國核可草藥照射國家………………………………………. 28. 表 1-6. 美國照射食品合法化項目…………………………………….. 29. 表 1-7. 美國 FDA 核可之藥物照射項目……………………………... 30. 表 1-8. 歐洲核可之藥物照射項目…………………………………….. 31. 表 1-9. 中國大陸核可之中藥照射項目及劑量……………………….. 32. 表 1-10 台灣規範中藥載菌量要求-中藥碎片劑型之製劑………….... 35. 表 1-11 台灣規範中藥載菌量要求-中藥濃縮製劑加味逍遙散等 10 個處方含微生物限量…………………………………………... 35. 表 1-12 各國藥典、法規微生物限量標準…………………………….. 36. 表 1-13 歐洲藥典之草藥微生物限量標準 (cfu/g 或 mL)…………….. 37. 表 1-14 英國藥典 (1998)對口服製劑的微生物限量標準(cfu 或 mL)... 37. 表 1-15 日本藥典對部份藥品的微生物限量(cfu/或 mL)……………... 38. 表 1-16 各種滅菌法的優劣點表………. ………………………………. 39. X.

(13) 表 1-17 何首烏輻射滅菌前後微生物之菌數………………………….. 59. 表 1-18 加馬輻射劑量對 TEAC 值比較………………………………... 61. 表 1-19 加馬輻射劑量對 DPPH 自由基清除作用 IC50 值比較………. 62. 表 1-20 總多酚類、總類黃酮及總黃酮醇之含量分析結果……………. 64. 表 2-1. LAMP primers………………………………………………….. 114. 表 2-2. 蒲公英市售品收集店家………………………………………... 120. 表 2-3. DNA 估算的濃度………………………………………………. 122. 表 2-4. LAMP 引子序列表……………………………………………... 129. XI.

(14) 縮寫表縮. 寫. 全. 文. ABS. absorbance. ABTS. 2,2-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline)-6-sulphonic acid. BHT. Butylate hydroxyltoluene. DMACA. p-dimethylaminocinnamaldehyde. DPPH. 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl. FRAP. ferric reducing antioxidant power. GSH. glutathione. IC50. concentration with 50% inhibition. NADPH. nicotinamide adenine diphosphate. PCA. plate count agar. PDA. potato dextrose agar. TCA. trichloroacetic acid. TEAC. trolox equivalent antioxidant capacity. THSG. 2,3,5,4'-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside. VRBGA. violet red bile glucose agar. XII.

(15) AFLP. Amplified fragment length polymorphisms. AP-PCR. Arbitrarily-primed polymerase chains reaction. ARMS. Amplification Refractory Mutation System. CMC. Chemistry, Manufacture and Control. DALP. Direct amplification of length polymorphism. DAMD. Directed amplification of minisatellite-region DNA. DNA. Deoxyribonucleic acid. ETS. external transcription spacer. FDA. Food and Drug Administration. GMP. Good Manufacturing Practices. IGS. internal genetic spacer. ISSR. inter-Simplesequence repeats. ITS. internal transcribed spacer. LAMP. Loop Mediated Isothermal Amplification. NASBA. Nucleic acid sequence-based amplification. NCBI. National Center for Biotechnology Information. PCR. polymerase chain reaction. PCR-RFLP. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism. RAPD. Randomly amplified polymorphic DNA. RFLP. Restriction fragment length polymorphism. XIII.

(16) SCAR. Specific sequence characterized amplified region. SRB. Strategy Review Board. WHO. World Health Organization. SSR. Self-sustained sequence replification. XIV.

(17) 中藥材何首烏之輻射滅菌劑量研究江瑩真中國醫藥大學中國藥學暨中藥資源學系. 摘. 要. 本研究目的為探討何首烏中藥材輻射照射滅菌最適條件及分析輻射照射後中藥材抗氧化活性、抗氧化成分及指標成分變化情形，找出達到最佳輻射滅菌效果的最小吸收劑量，建立何首烏中藥材輻射照射滅菌的最適劑量。何首烏中藥材分別以 2 kGy、4 kGy、6 kGy、8 kGy 和 10 kGy 照射之實驗結果顯示，輻射照射 2 kGy 即可消滅腸內菌，4 kGy 能抑制真菌及酵母菌的生長，在 6 kGy 的輻射照射後黴菌和真菌即完全滅菌；菌數方面，隨著輻射劑量的增加而減少，8 kGy 照射可達到徹底滅菌的效果。在抗氧化活性實驗及指標成分比較之實驗方面，何首烏藥材分別照射 5 kGy、10 kGy 和 15 kGy 的結果顯示，以照射 5 kGy 有最好的抗氧化活性。抗氧化成及最低對 DPPH 自由基清除率達 50%時的樣品濃度（即 IC50 值）分實驗結果顯示，所含總多酚類、總類黃酮以照射 5 kGy 為最高，照射 15 kGy 最低，而總黃酮醇之含量並無明顯差異。因此，8 kGy 的輻射照射，可以完全滅菌，可作為何首烏中藥材滅菌最適合之劑量，來延長藥材的架儲期，確保何首烏中藥材的品質。 XV.

(18) 台灣蒲公英及其誤用品之分子鑑定研究摘. 要. 藥用植物的基原鑑定是品管的重要環節，本研究藉由比對 GenBank 資料庫上台灣蒲公英與其易混用藥材間的 ITS2 基因序列，找出其中差異較大的區域，作為分子鑑定引子設計的依據。以設計好的一對引子進行台灣蒲公英與其易混用藥材的聚合酶連鎖反應，可擴增到 250 bp 大小的 ITS2 片段反應產物，將產物定序並分析比對 DNA 序列，成功的鑑別出台灣蒲公英與其易混用的 5 種藥材。此外，運用 DNA 分子標誌，針對台灣蒲公英與其混用藥材之 ITS2 基因組，以引子開拓者 V3 軟體設計一組高特異性的恆溫圈環式核酸擴增法鑑定(LAMP)之引子，並找出其最佳化反應條件、分析方法的靈敏度和特異性檢測，評估台灣蒲公英正品及混用藥材的 LAMP 檢測效果。本研究設計之 LMAP 引子可專一地於 65℃的溫度，45 分鐘內放大含台灣蒲公英模板 DNA 的反應溶液，且於核酸濃度 1 pg 下即可進行 LAMP 之反應，其敏感性遠勝過傳統 PCR 法，成功地建立 LAMP 做為台灣蒲公英中藥材基因體鑑別的檢驗系統。. XVI.

(19) Studies on the Gamma Radiation Antiseptic Dose of Polygoni Multiflori Radix Ying-Chen Chiang School of Chinese Pharmaceutical Sciences and Chinese Medicine Resources China Medical University. Abstract Gamma radiation is a physical process commonly used for the eradication of microorganisms distributed in food ingredients, medicinal plants and other bioresearches. The aim of this study was to investigate the effect of radiation dosage on the microbial load, chemical compounds and antioxidative characteristics of Polygoni Multiflori Radix (POMU). Ten commercial POMUs were purchased from different herbal markets and treated with 2 kGy, 4 kGy, 6 kGy, 8 kGy and 10 kGy gamma radiation doses to evaluate the microbial burdens of irradiated and unirradiated POMUs. Our results confirmed that 2 kGy was sufficient for the inactivation of enterobacteria; at 4 kGy, mold and yeast counts were obviously reduced; and at 6 kGy, neither yeasts nor fungi were observed any longer. The antioxidative effects and major antioxidant components of 0 kGy, 5 kGy, 10 kGy and 15 kGy irradiated POMU samples were also examined. Our results confirmed that 5 kGy irradiated POMU had both the highest XVII.

(20) antioxidative activity and lowest value in IC50 of DPPH radical-scavenging activity. The content of total phenols had no statistically significant changes. Therefore gamma irradiation at 8 kGy could be a potential method for decontaminate the microbial load of POMU to prolong shelf life and to improve hygienic quality.. XVIII.

(21) Studies on Molecular Identification of Taraxacum formosanum and Distinguishing from Its Adulterants. Abstract Original identification of medicinal plants is important for quality control. In this study, the internal transcribed spacer 2 (ITS2) nuclear ribosomal DNA served as a DNA barcode and was amplified by allele-specific sequence-primed PCR; this approach was exploited to differentiate Taraxacum formosanum from five related adulterants. Using a set of designed PCR primers, a highly specific 250 bp PCR product of Taraxacum formosanum was successfully amplified by PCR. However, no product was amplified from any of the adulterants. This indicates that our allele specific primers have high specificity and can accurately discriminate Taraxacum formosanum from other 5 adulterant plants. We also established a rapid, sensitive and specific loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for authenticating Taraxacum formosanum. A set of four specific LAMP primers was designed ba sed on the nucleotide sequence of the internal transcribed spacer 2 (ITS2) nuclear ribosomal DNA (nrDNA) of TF. LAMP amplicons were successfully amplified and detected when genomic of. TF was added in the LAMP reaction under XIX.

(22) isothermal condition (65℃) within 45 min. This specific LAMP primers have high specificity and can accurately discriminate Taraxacum formosanum from other adulterant plants; 1 pg of genomic DNA was determined to be the minimum concentration limit of the LAMP assay.. XX.

(23) 壹、中藥材何首烏之輻射滅菌劑量研究第一章. 緒論. 台灣中藥材多產自中國大陸，輸入臺灣後，經加工或其他處理再轉銷國內、日本、韓國、東南亞、歐美各地(1)。藥材一般含有大量的細菌，真菌和導致有機體損壞的物質(2)，常見的細菌是有氧孢子形成菌，例如桿菌和沙門氏菌等種類(3-5)，中藥能否安全貯存之重要關鍵為其中的微生物含量，在台灣高溫多濕的環境中，利於中藥材中之微生物生長，將破壞中藥材的成分、降低療效，甚至可能產生有害物質，危害服用者之健康，造成醫療保健上的問題(6)。滅菌主要使用的方法有三種：蒸氣滅菌、藥物燻蒸 (氧化乙烯和丙烯氧化物) 和輻射滅菌(7)，然而，蒸汽滅菌過程會破壞葉類藥材，應用於根莖類藥材時常無法達到滅菌效果(7-10)；至於燻蒸氧化乙烯氣體的滅菌方法業已在歐盟和許多其他國家被禁用(11)。因為氧化乙烯後的禁用，3 到 10 kGy 劑量之輻射滅菌陸續被證明能夠達到藥材滅菌的品質標準(2，12-14)。輻射滅菌具有下列優點︰ (1) 輻射滅菌徹底，無污染和殘毒，也不會產生放射性殘留。 (2) 輻射滅菌在常溫下進行，即「冷滅菌」，較不影響中藥成分。 (3) 產品可以在包裝後輻射滅菌，沒有二次染菌問題，只要包裝不透菌，. 1.

(24) 可以長期保證品質。 (4) 適合量化連續作業，節約能源，成本低廉(6)。鑑於中國大陸在中藥材品質控制上，一直未建立有效制度，故有蟲蛀、發霉等問題，而世界各國對藥材安全衛生的要求，日益提升，故問題值得關切。世界許多先進國家已合法使用輻射照射來處理藥草(herb)，臺灣目前在食品照射合法化上已有多項公告，但至今尚無中藥草照射合法之公告項目(1)。由於國內大眾生活品質與醫療品質的日益提昇，臺灣在中西醫治療人口比例上，約有五分之一的病患選擇中醫為其治病方法，政府對中醫診所及科學中藥已有健保給付，人們對中草藥的品質亦有更高的要求，加上近年來健康食品市場的蓬勃發展，其市場規模不論在國內、國外都已超出藥品市場很多，故中草藥的開發及品質的提昇，能即時滿足並供應國內外市場為目前相當重要的任務，輻射滅菌若能合法化則對中草藥品質的提升與開發將有其必要性及迫切性(1)。行政院衛生署中醫藥委員會八十八年度起即開始探討中藥輻射滅菌之可行性評估，委託清華大學、原子能委員會核能研究所等進行中藥輻射滅菌相關的研究，並於 1999 年 1 月 22 日假桃園龍潭原子能委員會核能研究所舉辦「原子能科技於中醫藥研討會」，討論中藥輻射滅菌相關之主題；國立清華大學周鳳英教授、原子能委員會核能研究陳家杰博士、中台醫護技 2.

(25) 術學院姚俊旭教授、財團法人製藥工業技術發展中心吳孝芸博士、國立宜蘭大學馮臨惠教授等亦先後進行劑輻射滅菌劑量、輻射滅菌對中藥材貯存條件、療效指標成分、品質及包裝材料性質之影響進行研究。歷年來，國立清華大學周鳳英教授已完成 48 種常用中藥材及 5 種中藥方劑輻射滅菌劑量之評估(15,16)；姚俊旭教授評估 48 種藥材之無菌劑量研究 (17,18). ；陳家杰博士評估 4 種中藥材研究(19)；吳孝芸博士評估 3 種中藥材之. 適當包裝方式(20) 等，行政院衛生署中醫藥委員會將歷年來進行中藥材輻射滅菌及品質之評估成果，舉辦產官學專家會議及多場次的宣導，希望藉此取得共識，研訂我國中藥材輻射滅菌法規，確保中藥的衛生安全，使中藥材輻射滅菌有法規可供遵循，解決微生物污染之問題，得以提高中藥之品質，確保民眾使用中藥的安全。輻射照射已是國內外許多國家通行的草藥等食品處理法，輻射滅菌是歐美日中各國正式的藥物滅菌方法，且都已編入藥典中，並與蒸氣高壓滅菌法、毒氣滅菌法等並列(1-21)，美英等國已有抗生素、眼藥膏等藥品利用輻射滅菌法消毒；中國大陸 20 世紀 70 年代中期由國家科委組織科研、教學、生產和檢驗等部門進行 60Co 輻射滅菌中藥的實驗研究，也於 1997 年發佈「60 鈷輻照中藥滅菌劑量標準」(內部試行)的通知(22)，對中藥成品及原料進行品管的照射殺蟲滅菌處理，而國內西藥方面已有多家使用輻射滅菌法來消毒抗生素、眼藥膏等，可知輻射滅菌在國內外的使用相當普遍。 3.

(26) 大陸目前用於輻射加工的鈷源裝置有100多座，台灣則有台中工業區之中國生化、新竹的核能研究所和清華大學輻射加工的鈷源裝置。除了中藥滅菌外，還用於輻射滅菌食品滅菌殺蟲和保鮮、醫療器械滅菌、玩具滅菌、輻射化工、材料改性以及寶石改色等項目(6)。大量的研究報導顯示，60Co-γ 射線輻射滅菌是安全、可靠、高效滅菌的一種有效方法，但對具體品種達到滅菌效果的吸收劑量還需要進一步進行實驗研究；本實驗選取中國大陸亦尚未核可的中藥材何首烏項目，進行不同劑量照射，探討其輻射達到滅菌效果的吸收劑量及輻射前後對抗氧化效果及成分的分析，找出達到最佳輻射滅菌效果的最小吸收劑量，建立何首烏中藥材輻射照射滅菌的最適劑量。何首烏中藥材分別以2 kGy、4 kGy、6 kGy、8 kGy和10 kGy照射之實驗結果顯示，輻射照射2 kGy即可消滅腸內菌，4 kGy能抑制真菌及酵母菌的生長，6 kGy黴菌和真菌即完全滅菌，8 kGy照射可達到徹底滅菌的效果。在抗氧化活性及成分實驗及指標成分比較之實驗方面，何首烏藥材分別照射5 kGy、10 kGy和15 kGy的結果顯示，以照射5 kGy有最好的抗氧化活。抗氧性及最低劑量對DPPH自由基清除率達50%時的樣品濃度（即IC50值）化成分實驗結果顯示，所含總多酚類、總類黃酮以照射5 kGy為最高，照射 15 kGy最低，而總黃酮醇之含量並無明顯差異。在利用高效液相層析方法中，以2,3,5,4'-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside (THSG)作為指標成分 4.

(27) 比較，輻射照射過之含量變化隨著輻射劑量增加其含量降低。. 5.

(28) 第二章總論第一節何首烏之文獻考察一、何首烏之本草考察何首烏 Polygoni Multiflori Radix ( Fleeceflower Root)，為蓼科植物何首烏 Polygonum multiflorum Thunb. 的乾燥塊根(23)。始載於《日華子》，如《證類本草》引《日華子》:「味甘。久服令人有子。治腹藏宿疾，一切冷氣及腸風。此藥有雌雄。雄者苗葉黃白，雌者赤黃色。凡修合藥須雌雄相合吃，有驗。其藥本草無名，因何首烏見藤夜交，便即採食有功，因以採人為名耳(24)。」「何首烏」作為本品正名始載於《開寶本草》，如《證類本草》引《開寶本草》曰：「何首烏，味苦、澀，微溫，無毒。主瘰癧，消癰腫，療頭面風瘡，五痔，止心痛，益血氣，黑髭鬢，悅顏色。久服長筋骨，益精髓，延年不老(24)。」其後本草大多即沿用《開寶本草》記載，以「何首烏」為正名，如宋，蘇頌《本草圖經》(25)、唐慎微《證類本草》(24)、寇宗爽《本草衍義》(26)；元，忽思慧《飲膳正要》(27)；明，蘭茂《滇南本草》(28)、劉文泰《本草品匯精要》(29)、陳嘉謨《本草蒙荃》(30)、李時珍《本草綱目》(31)、杜文燮《藥鑑》(32)、繆希雍《炮炙大法》(33)、李中梓《雷公炮製藥性解》(34)、李中梓《本草征要》(35)、盧之頤《本草乘雅半偈》(36)、陳士鐸《本草新編》 6.

(29) (37). ；清，稻宣義《炮炙全書》(38)、汪昂《本草易讀》(39)、汪昂《本草備要》. (40). 、張璐《本經逢原》(41)、葉桂《本草經解》(42)、陳念祖《神農本草經讀》. (43). 、姚瀾《本草分經》(44)、楊時泰《本草述鉤元》(45)、蔣居祉《本草擇要. 綱目》(46)、嚴西亭《得配本草》(47)、凌奐《本草害利》(48)、陳其瑞《本草撮要》(49)、張秉成《本草便讀》(50)、周岩《本草思辨錄》(51)等皆以「何首烏」為正名。此外，宋，佚名《增廣太平和劑圖經本草藥性總論》(52)；清，沈金鰲《要藥分劑》(53)等也以「何首烏」為正名記載本品。古代著作記載的本品異名尚有「野苗」、「交藤」、「夜合」、「地精」、「首烏」《何首鳥傳》(31)，「陳知白」《開寶本草》(24)，「桃柳藤」《日華子》(24)，、「九真藤」《鬥門方》(31)，「馬肝石」、「紅內消」《外科精要》(31)，「赤葛」「瘡帚」、「山奴」、「山哥」、「山伯」、「山翁」、「山精」《本草綱目》(31)。《開寶本草》(24)：主瘰，消癰腫，療頭面風瘡，治五痔，止心痛，益血氣，悅顏色，久服長筋骨，益精髓，延年不老；亦治婦人產後及帶下諸疾。」《本草綱目》(31)：此物氣溫味苦澀，苦補腎，溫補肝，澀能收斂精氣，所以能養血益肝，固精益腎，健筋骨，烏髮，為滋補良藥。不寒不燥，功在地黃、天門冬諸藥之上。《本草衍義》(26)：何首烏……與蘿蔔相惡，令人髭髮早白。 7.

(30) 《中華本草》(54)：［原植物］多年生纏繞藤本。根細長，末端成肥大的塊根，外表紅褐色至暗褐色；莖基部略呈木質，中空。葉互生，具長柄，托葉鞘膜質，褐色，葉片狹卵形或心形，長 4-8 cm，寬 2.5-5 cm，先端漸尖，基部心型或箭形，全緣或微帶波狀，上面深綠色，下面淺綠色，兩面均光滑無毛。圓錐花序。小花梗具節，基部具膜質苞片；花小，花被綠白色，5 裂，大小不等；雄蕊 8，雌蕊 1；瘦果橢圓形，有 3 棱，黑色，光亮。花期 8-10 月，果期 9-11 月。生於草坡、路旁、山坡石隙及灌木叢中。分布於華中、中南及河北、山西、陜西、甘肅、台灣、四川、貴州、雲南等地。［採收加工］在秋季落葉後或早春萌發前採挖。除去藤莖，將根挖出，洗淨泥土，大的切成 2 cm 左右的厚片，小的不切，曬乾或烘乾即成。［藥材鑑別］性狀鑑別：塊根紡錘形或團塊狀，一般略彎曲；長 5-15 cm，直徑 4-10 cm；表面紅棕色或紅褐色，凹凸不平；質堅硬，不易折斷，斷面淡黃棕色或淡紅棕色，粉性，皮部有類圓形的異形維管束作環狀排列，形成「雲錦花紋」，中央木部較大，有的成木心。氣微，味苦而甘澀。［功能與主治］養血滋陰，潤腸通便，截瘧，祛風，解毒。主治血虛頭昏目眩、心悸、失眠，肝腎陰虛之腰膝痠軟、髮鬚早白、耳鳴、遺精、腸燥便秘，久瘧體虛，風疹搔癢，瘡癰，痔瘡。 8.

(31) 二、何首烏之植物學考察 1998 版的《中國植物誌》(55)將何首烏定為何首烏屬，而一般文獻大多將其定為蓼屬，中華中藥典及中華人民共和國藥典何首烏的基原仍為 Polygonum multiflorum Thunb. (21,23). 蓼科 Polygonaceae(56) 蓼科全世界約 50 屬 1150 種，主產於北溫帶。大陸原產及引種的約有 13 屬 235 種 37 變種，全國均有分布。草本，有時亞灌木或稍木質藤本，經常於節部膨大，葉互生、對生或輪生，單葉，全緣；托葉常膜質，鞘狀或葉狀，包莖或貫莖；花小，通常兩性，有時單性，排成穗狀、總狀或頭狀等各式聚繖花序；花被片 3-5，整齊複瓦狀排列成一輪或二輪，或 6 片重複瓦狀排列，分離或合生，宿存；雄蕊多為 6-9，與花被片對生，花盤環狀分裂成圓形；子房上位，具 2-4 (多為 3) 心皮，1 室，兩側壓扁或三棱形，花柱 2-4，分離或基部合生，柱頭增大或頭狀或裂為絲狀或流蘇狀，胚珠 1，直生於基部。瘦果雙凸鏡形，三棱形或近圓形，全部或部分包藏於宿存的花萼內。《中國植物誌》(55)將何首烏定為何首烏屬，而一般文獻大多將其定為蓼屬廣義蓼屬，包括何首烏(Polygonum multiflorum Thunb.)、虎杖、蕎麥等等；1998 版的《中國植物誌》將何首烏、虎杖、蕎麥獨立成屬，即何首烏 9.

(32) 屬、虎杖屬和蕎麥屬。根據 1998 版《中國植物誌》採用的系統，以花被片的排列分為 2 個亞科，蓼亞科 Polygonideae (花被片不排成 2 輪)和酸模亞科 Rumicoideae (花被片排成 2 輪)。蓼亞科含 13 屬，如:蓼屬 Polygonum L.，何首烏屬 Fallopia Adans.，虎杖屬 Reynoutria Houtt.，金錢草屬 Antenoron Rofin.，參麥屬 Fagopyrum Mill.等。酸模亞科含 3 屬，如大黃屬 Rheum L.，酸模屬 Rumex L.等。. 常見的屬檢索表(56) 1.花被片 5 2.花被片果時不增大 3.瘦果具 3 棱，明顯比宿存花被長…………………蕎麥 Fagopyrum Mill. 3.瘦果具 3 棱或雙凸鏡狀，比宿存花被短…………..…蓼屬 Polygonum L. 2.花被片果時增大 4.花柱 2 果時伸長，硬化，頂端鈎狀………...…金錢草屬 Antenoron Rafin. 4.花柱 3， 5.莖纏繞，花兩性，柱頭頭狀…………………何首烏屬 Fallopia Adans. 5.莖直立，花單性，柱頭流蘇狀……………..虎杖屬 Reynoutria Houtt. 1.花被片 6 6.瘦果具翅，柱頭頭狀或近頭狀……………………………大黃屬 Rheum L. 6.瘦果無翅，柱頭畫筆狀……………………………………酸模屬 Rumex L. 10.

(33) 首烏屬(57)Fallopia Adanson 一年生草本，很少半灌木。莖纏繞。單葉，互生，具葉柄；葉片卵形或心形，邊緣全緣；托葉鞘管狀，先端偏斜或截形。花序總狀的或圓錐狀。花兩性，花被宿存，5 深裂；外部 3 花被片更大，龍骨狀的或具翅。雄蕊 8。花柱極短；柱頭頭狀瘦果三棱，卵圓形。. 分種檢索表(55) 1.一年生草本；花序總狀。 2.花被片外面 3 片背部具龍骨狀突起或狹翅，果時稍增大……………… …………………………………………..…… 1.卷莖蓼 F. convolvulus (L.) 2.花被片外面 3 片背部具翅，果時增大。 3.花被片的翅邊緣具齒，瘦果密被小顆粒，微有光澤…………………… ……………………………2.齒翅蓼 F. dentato-alata (F. Schm.) Holub 3.花被片的翅邊緣全緣，瘦果密被小顆粒平滑，有光澤。 4.花梗中下部具關節，花排列緊密…3a 篙蓼 F. dumetorum (L.) Holub 4.花梗中下部具關節，花排列稀疏……………………………………… 3b 疏花篙蓼 F. dumetorum (L.) Holub var. pauciflora (Maxim) A.J.Li 1.多年生草本或半灌木；花序圓錐狀。 5.半灌木；葉通常簇生…………...……4 木藤蓼 F. aubertii (L. Henry) Holub 5. 多年生草本；葉單生。 11.

(34) 6.花被片外面 3 片背部具翅，果時增大。 7.葉下面無小突起.……………………………………............................. …………..…...5a 何首烏 F. multiflora (Thunb.) Harald. var. multiflora 7.葉下面沿葉脈具小突起.……………………………………................. 5b 毛脉蓼 F. multiflora (Thunb.) Harald. var. ciliinerve (Nakai) A. J. Li 6.花被片背部具無翅，果時不增大。 8.莖無毛，疏生小突起；葉卵狀三角形；邊緣具淺波狀齒或近全緣，花被片長 3-4 mm……............6.齒葉蓼 F. denticulate (Huang) A. J. Li 8.莖密被褐色短柔毛及稀疏的倒生長硬毛；葉寬心形，葉邊全緣；花被片長 1.5-2 mm。 9.葉下面密被褐色長柔毛…………………………………………..… …..7a.牛皮消蓼 F. cynanchoides (Hemsl.) Harald. var. cynanahoides 9.葉下面沿葉脈被短糙伏毛或無毛……………….………….……… 7b.光葉牛皮消蓼 F. cynanchoides (Hemsl.) Harald. var. glabriuscula (A. J. Li) A. J. Li. 何首烏 Fallopia multiflora (Thunb.) Harald (55) Fallopia multiflora (Thunb.) Harald in Symb. Bot. Upsl. 22(2): 77. 1978. Polygonum muliiflorum Thunb. Fl. Jap. 169. 1784; Forb. et Hemsl. in Journ. Linn. Soc. Bot. 26: 342.1891; Stew. in Contr. Gray Herb. 88: 96. 1930: Kung in 12.

(35) Fl. Ill. N. Chine 5: 57. Pl. 24. 1936; 秦嶺植物志 1(2)：156. 1974；湖北植物志 1：246. 1976. - P. hypoleucum Ohwi in Acta Phytotax. Geobot. 7: 130. 1938. - P. multiflorum Thunb var. hypoleucum(Ohwi) Liu et al. in Fl. Taiwan 2: 274. 1976. syn. nov. - P. multiflorum Thunb. var. angulatum S. Y. Liu in Acta Bot. Yunnan. 13(4): 390. 1991. syn. nov. - Pleuropterus cordatus Turcz. in Bull. Soc. Nat. Mosc. 21: 587. 1848.. 何首烏(原變種) Fallopia multiflora (Thunb.) Harald(55) 多年生草本，塊根肥厚，長橢圓形，黑褐色。莖纏繞，長 2-4 m，多分枝，具縱棱，無毛，微粗糙，下部木質化。葉卵形或長卵形，長 3-97 cm，宽 2-5 cm，頂端渐尖，基部心形或近心形，兩面粗糙，邊緣全缘，葉柄長 1.5-3 cm；托叶鞘膜質，偏斜，無毛，長 3-5 cm。花序圓錐狀，頂生或腋生，長 10-20 mm，分枝開展，具細縱棱，沿棱密被小突起；苞片三角狀卵形，具小突起，頂端尖，每苞片具 2-4 花；花梗細弱，長 2-3 cm，下部具關節，果時延長；花被 5 深裂，白色或淡綠色，花被片橢圓形，大小不相等，外面三片較大背部具翅，果時增大，花被果時外形近圓形，直徑 6-7 cm；雄蕊 8，花絲下部較寬；花柱 3，極短，柱頭頭狀。瘦果卵形，具 3 棱，長 2.5-3 cm，黑褐色，有光澤，包與宿存花被內。花期 8-9 月，果期 9-10 月。產陝西南部、甘肅南部、華東、華中、華南、四川、雲南及貴州。生山谷灌處，山坡林下，溝邊石隙，海拔 200-3000 m，日本也有。 13.

(36) 塊根入藥，安神、養血、活絡。產於台灣的台灣何首烏 Polygonum mutliflora Thunb. var. hypoleucum (Ohwi) Liu et al.的台灣標本，其花被果實增大，直徑 5-6 cm；葉片長圓狀卵形等，這些特徵與產於大陸的何首烏 Fallopia multiflora (Thunb.) Harald. 十分相似，故合併(55)。. 14.

(37) 三、何首烏之化學成分考察(58-65) (一)、蒽醌類成分：蒽醌衍生物約 1.1%。含有大黃酚(chrysophanol)、大黃酚蒽酮(chrysophanol anthrone)、大黃酸 (rhein)、大黃素(emadin)、大黃素甲醚(physcion)、大黃素-1,6-二甲醚 (emadin-1,6-dimethylether) 、大黃素 -8- 甲醚 (questin) 、 ω- 羥基大黃素 (citreorosein) 、 ω- 羥基大黃素 -8- 甲醚 (questinol) 、 2- 乙酰基大黃素 (2acetylemadin) 、大黃素 -8-O-β-D- 吡喃葡萄糖苷 (emadin-8-O-β-Dglucopyranoside) 、大黃素甲醚 -8-O-β-D- 吡喃葡萄糖苷 (physcion-8O-β-D-glucopyranoside)、大黃酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(chrysophanol-8-O -β-D-glucopyranoside)、2-甲氧基-6-乙酰基-7-甲基胡桃醌(2-methoxy-6acetyl-7-methyljuglone)、大黃素甲醚-8-O-β-D-葡糖苷、大黃素-8-O-β-D葡糖苷、決明蒽酮-8-O-β-D-葡糖苷。其中大黃酚、大黃素最多，其次為大黃酸、大黃素甲醚等。 (二)、黃酮類成分：含苜蓿素(tricin)、槲皮素-3-O-半乳糖苷(quercetin-3-O-galactoside)、槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷(quercetin-3-O-arabinoside)。 (三)、酰胺類成分：含穆坪馬兜鈴酰胺(N-trans-feruloyltyramine)、N-反式阿魏酰基-3-甲基多巴胺(N-trans-feruloyl-3-methyldopamine)。 15.

(38) (四)、葡萄糖苷類成分：含 2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D 葡萄糖苷(2,3,5,4'-Tetrahydroxystilbene -2-O-β-D-glucoside 含量 1.2%，為主要水溶性成分)、2,3,5,4′-四羥基-二苯乙烯-2,3-二-Ｏ-β-Ｄ葡萄糖甙，即何首烏丙素(polygonimitin C)、1,3-二羥基-6,7-二甲基酮-1-O-β-D-葡萄糖甙，即何首烏乙素(polygonimitin B)、 2,3,4,6- 四羥基乙酰苯酮 -3-O-β-D- 葡萄糖甙 (2,3,4,6-Tetrahydroxyacetophenone--3-O-β-D-glucoside)、2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-(2'-O-乙醯基)-β-D-葡糖苷、6-甲氧基-2-乙醯基-3-甲基-1,4-萘醌-8-O-β-D-葡糖苷。 (五)、其他成分：含 β-谷甾醇(β-sitosterol)、胡蘿蔔苷、沒食子酸及微量元素 Zn、Mn、Cu、 Fe、Mg、Si、Ni、V、Al、Co、Sr、Cr、Ti、Ba、Ca、Pb、K、Na。含鐵量是補血藥中最高者，含鋅量高於 48 種補血藥中含鋅量的平均值。此外，含兒茶精、表兒茶精、3-O-沒食子醯兒茶精、3-O-沒食子表兒茶精、 3-O-沒食子醯原矢車菊苷元 B1 (3-O-galloyl procyanidine-B1)及 3,3′-O-雙沒食子醯原矢車菊苷元-B2 (3,3′-O-digalloyl procyanidine-B2)，並含遊離氨基酸類化合物。含卵磷脂(Lecithin)約 3.7%，粗脂肪 3.14%，總氮 1.05%，澱粉 45.15%，鞣質、礦物質等。. 16.

(39) 第二節輻射滅菌之文獻考察一、輻射的介紹輻射，是一種能量，以電磁波如加馬(γ)射線等及高速粒子(如電子等)的形態傳送；依能量的高低或游離物質的能力，分成非游離輻射和游離輻射兩大類：非游離輻射係指能量低無法產生游離的輻射，例如太陽光、燈光、紅外線、微波、無線電波和雷達波等。游離輻射係指能量高，能使物質產生游離作用的輻射。游離輻射又區分為二：(1)電磁波輻射，(2)粒子輻射。一般所謂的輻射或放射線，都是指游離輻射而言. (66). X 射線. 電磁輻射電磁波. γ 射線 ß¯粒子 ß+粒子. 游離輻射荷電粒子. 電子射線 α粒子. 粒子輻射. 質子粒子重離子或介子非荷電粒子圖 1-1 游離輻射分類 (67) 17. 中子. 。.

(40) 電磁輻射依據波長、波數，或是頻率分成好幾類：. 圖 1-2 電磁輻射分類 (68). 輻射能廣泛應用在醫學和工業方面。例如使用 X 光射線於內科和牙科方面來診斷骨折和蛀牙已超過五十年的歷史；應用於癌症治療，使用調整過焦點的輻射線來殺死癌細胞並可避免對鄰近的健康細胞造成太大傷害；亦可經由注射放射性同位素進入體內及應用電腦輻射偵檢造影器，來診斷無法以 X 光直接清晰透視的內臟組織。醫學器材也應用輻射來消毒，例如 18.

(41) 針筒消毒，由於一般高溫的消毒會把藥膏和繃帶的品質破壞，而輻射本身不具高熱，因此輻射消毒滅菌，有廣泛應用之趨勢。放射照相術在工業上的應用技術可用於檢視金屬鑄件或焊接部位的間隙及缺陷，這些隙縫或缺陷通常很難使用其他方法偵測出來，亦可用於度量極微小的厚度，如金屬薄片；此外，放射照相術亦可用於檢視建築物或雕像的結構缺陷。輻射其他之應用，如藝術品鑑定及食物保存方面，利用輻射照射保存食物既不會降低食物原有的天然養分，並且也不會含有放射性。考古學家亦可利用碳-14 的放射衰變計算出史前時期古物的正確時間(69)。有關輻射劑量的單位如下： 1. 輻射強度的單位：Becquevel（貝克 Bq）或 Cuvie（居里 Ci）表示，一秒鐘衰變一個原子核時的輻射強度稱為 1 貝克。3.7 X 1010 Bq = 1 居里。 2. 物質吸收的輻射劑量單位：物質一公斤吸收 1 焦耳能量的輻射線時稱為 1 葛雷。100 雷得＝1 葛雷。Gray（葛雷）或 rad（雷得）(表 1-1) 3. 對生物體的影響測定的輻射等效劑量單位：Sievert（西弗）或 rem（侖目）西弗是考慮對生物體的影響測定的輻射等效劑量單位。當人體是輻射的吸收對象時，等效劑量是侖目，100 侖目＝1 西弗。計算式：雷得×射質因素(表 1-2)＝侖目。. 19.

(42) 表 1-1 輻射劑量單位表單. 位. 說. 明. 貝克‧居里. 輻射強度，1 居里＝370 億貝克（3.7×10^10）. 葛雷‧雷得. 吸收劑量，物質吸收的輻射能量，1 葛雷＝ 100 雷得雷得×射質因素＝侖目。. 西弗‧侖目. 對生物體影響的輻射等效劑量，1 西弗＝100 侖目. 表 1-2 射質因素表種. 類. 性. 質. 射質. 因素. α 射線. 氦原子核的流動，帶正電. 20. β 射線. 電子的流動，帶負電. 1. X、γ 射線. 光的一種，穿透能力強的電磁波. 1. 中子射線. 中子的流動，不帶電. 10. 質子射線. 質子的流動，帶正電. 二、中藥輻射滅菌的原理和安全評價(70,71) (一)、中藥. 射線輻射滅菌的原理. 1.電離輻射：能直接或間接通過初級或次級過程而使物質產生電離效應。輻射源主要是電子加速器產生的高能電子束，放射性同位素 137. Cs 放射出的. 60. Co 或. 射線，電子束能量在 0.5-6 MeV，不會使被照射物產 20.

(43) 生放射性；中藥輻射滅菌大多數採用. 60. Co-γ 射線，因此不會產生放射. 性物質與放射線殘留，為目前最安全的滅菌消毒法。 2. 60Co-γ射線輻射滅菌的生物學過程：高能射線照射物質後會引起物質中的微生物、昆蟲等發生一系列物理、化學和生物效應，來達到殺蟲、滅菌的效果。其相互作用過程大致分為5個階段：物理階段、物理化學階段、化學階段、生物化學階段、生物學階段。利用輻射的生物學效應，破壞生物體的DNA，微生物、害蟲等因生理活動遭到改變而死亡，就可以達到抑制發芽、延緩生理過程、滅菌、殺蟲和防黴等目的。 3.輻射照射劑量與效應的關係：輻射滅菌劑量由中藥所含的細菌種類、初始染菌數、微生物的輻射敏感性以及輻照環境條件決定。實際應用中常用將存活的微生物降低到十分之一時所需要的劑量, 即 LD90 值。如果需要輻射照射的中藥產品初始染菌數為 N 0，照射後要求達到的細菌數為 N，則所需要的輻照劑量 D = KD10 lg N 0 /N， K 值由經驗得出。 (二)、中藥輻射滅菌的安全性評價中藥輻射滅菌一般使用密封型60Co-γ輻射裝置，對被照射的物質，只會引起瞬間的游離反應，進而由正負離子作用產生自由基，自由基再和生物化學物質反應，而破壞細胞內生物之生命化學物質，達到殺蟲滅菌目的。被照射物不接觸放射性核素，不會沾上放射性物質。研究證明，要使組成食品的基本元素，碳、氧、氮、磷、硫等發生核反應需一定的 21.

(44) 臨界能，最低的鈹-9為1.67 MeV，最高的碳-12為18.8 MeV(70)。而60Co-γ 射線的能量為1.33、1.17 MeV , 不同於高能量放射線（高於12 Mev）會引起核反應，故不會使被照射物產生具放射線性質的功用，所以被照射物不會因被照射而變成帶有輻射線(71)。中藥輻照滅菌已經成為食品和藥品生產過程中必不可少的程序。中華人民共和國藥典2005年版中增加輻射滅菌的內容。在美國、英國和歐盟國家都允許輻照中藥，美國已寫入藥典。德國原來在輻照食品方面比較保守，但是隨著歐盟的成立也只好承認輻照食品。目前世界上絕大多數國家都制定了相應的法規，允許輻照食品，也包括植物藥。聯合國糧農組織(FAO )、國際原子能機構( IAEA ) 和世界衛生組織 (WHO ) 多次召開國際輻射食品科學討論會, 評價輻照食品安全性。 1980年10月，由上述3大組織組成的「輻照食品聯合專家委員會」歸納各國30 多年安全性研究結果，確認「為儲存目的，任何食物受到總平均劑量10 kGy 以下的輻照，不再需要進行毒物學方面的檢測，也沒有特殊營養和微生物問題。」大陸 20 世紀 70 年代中期由國家科學委員會組成科研、教學、生產和檢驗等部門進行. 60. Co 輻射滅菌中藥的實驗研究。1997 年衛生部為加. 強中藥品質管理工作，發佈了《60Co 輻射滅菌標準(22)》。標準內容包含： 1.適用範圍 2.標準制定依據 3.輻照裝罝應具備的條件 4.待輻照中藥應 22.

(45) 具備的條件 5.輻照滅菌劑量 6.注意事項；標準之適用範圍包含中藥固體製劑和中藥原料粉，中藥輻照滅菌時的最大吸收劑量應不大於下列數值：散劑：3 kGy；片劑：3 kGy；丸劑：5 kGy；中藥原料粉：6 kGy。允許輻照藥材品種共有艾葉等 198 項，允許低劑量（3kGy）輻照藥材品種共有紫菀等 5 項，不允許輻照藥材品種為秦艽和龍膽 2 項；允許輻照中成藥品種共有安宮牛黃丸等 70 項。含有紫菀、錦燈籠、乳香、天竺黃和補骨脂一種以上（含一種）藥材的中藥輻照滅菌時，最大吸收劑量不得超過 3 kGy，含龍膽苦甙的藥材如秦艽、龍膽及其制品不得輻照滅菌。國外照射廠對草藥的照射，已是例行工作之一，美、澳及歐洲各國也時常從大陸、東亞進口藥材後，直接在該國照射廠進行照射。 IAEA，FAO 及 WHO 等組織收集了全世界之研究數據後，在 1980 年宣布 10 kGy 以下的照射殺蟲滅菌，所有食物不會產生毒性，無安全顧慮，不需進行動物安全實驗。IAEA，FAO 及 WHO 等組織在 1997 年開了一個食物照射檢討會(Geneva，15-20 September 1997)，對照射劑量至 75 kGy 結論依舊是安全的，此次會議結論指出食物照射在安全上沒有劑量上限。輻照食品的健全性評價及管理上的國際動態列表如下：. 23.

(46) 表1-3 輻照食品的健全性評價及管理上的國際動態西元會議名稱. 目的. 地點. 1961 輻照食品的健全性及食品照射管理國際會議. 提出了進行輻照食品健全性評價的必要性. 布魯塞爾. 1964 FAO/IAEA/WHO 輻照食品管理技術標準聯合專家委員會. 討論輻照食品健全性評價方法、食品羅馬添加物的處理. 1969 FAO/IAEA/WHO 輻照食品健全性聯合專家委員會（JECFI）. 指出若是同一食品就沒有品種差異和地域差異. 1970 國際食品照射計畫（IFIP）啟動. 討論健全性試驗研究的方法，提供委卡兒斯託與信息魯厄. 1976 FAO/IAEA/WHO 輻照食品健全性聯合專家委員會（JECFI）. 指出食品照射是物理加工技術，與類日內瓦似食品的健全性相同，是放化知識的合理應用. 1980 FAO/IAEA/WHO 輻照食品健全性聯合專家委員會（JECFI）. 指出10 kGy 以下的輻照食品的健全日內瓦. 1981 國際食品照射計畫完成 1983 FAO/WHO 食品管理委員會 1984 國際食品照射諮詢小組成立（ICGFI）. 日內瓦. 性沒有問題制定《國際輻照食品一般標準》和《國際食品照射實施規範》促進食品照射的應用和輻照食品貿易. 1988 召開有關輻照食品的接受、貿易、管理的國際會議. 日內瓦. 1989 國際食品標準委員會食品標識部門會議. 對輻照食品的標識問題做了結論-輻照食品用語言來表示. 1994 WHO 再次對輻照食品的健全性進行評價. 輻照食品的安全性與營養適應性. 1997 WHO 對高劑量輻照食品的結論. 10 kGy 以上的輻照食品的健全性沒有問題. 渥太華. 三、中藥材的輻射滅菌應用(72) 大陸中藥滅菌實驗是從20世紀70年代開始的，主要實驗包括水洗除 24.

(47) 菌、化學藥劑滅菌、熱滅菌(乾或濕)、輻射滅菌等4種方法。在實驗研究中，輻射滅菌脫穎而出。目前大陸用於輻射加工的鈷源裝置有100 多座。如天津原子能輻照中心(即天津市技術物理研究所)鈷源成立於1986年，近年來，天津市各中藥廠、部分製藥廠、醫院和許多保健藥品的生產廠家都在物理研究所輻射滅菌。產品包括中藥材、中成藥等各種丸、散、片、膠囊及西藥和保健品。輻射滅菌不限定包裝形式，可以為原料、半成品或成品，數量也沒有限制。在食品輻射滅菌的營養衛生評價上，經過各國學者對食品中的主要營養成分如蛋白質、酶、碳水化合物、脂肪和維生素等，進行輻射滅菌前後的變化情況研究，證實對食品中主要的營養成分之影響程度與其他加工方法沒有明顯的區別。中國大陸於 1996 年公布輻照食品衛生管理辦法，採用 10 kGy 為一般限定之照射劑量，針對其國家輻照食品衛生標準中未列入的食品品種（新研製的輻照食品品種），規定研製 10 kGy 以下的輻照食品新品種時，研製單位應當向衛生行政部門提供：感官性狀、營養及微生物等指標之衛生安全性評價資料。若研製 10 kGy 以上的輻照食品新品種，研製單位應向衛生部直接提出申請，並提供感官性狀、營養、微生物、毒理及輻射降解產物等指標之衛生安全性評價資料。行政院衛生署在 1999 年 9 月 29 日重新訂定食品輻射照射處理標準(1)， 25.

(48) 擴大了食品照射在臺灣的利用，目前依法照射的食品有大蒜、食米、乾燥蔬菜、香辛料等項目，可廣銷國內外。我國食品及藥品之照射處理標準如表 1-4。表 1-4 我國食品輻射照射處理標準限用照射限用輻射射源食品品目馬鈴薯、甘藷、電子分蔥、洋蔥、 X 射線或 y 射線大蒜、生薑. 最高輻射線能最高照射劑照射目的量(百萬電子伏) 量千(格雷) 10 0.15 抑制發芽. 木瓜、芒果. 電子 X 射線或 y 射線草莓電子 X 射線或 y 射線豆類電子 X 射線或 y 射線其他生鮮蔬菜電子 X 射線或 y 射線穀類及其碾製品電子 X 射線或 y 射線生鮮冷凍禽肉及電子機械去骨禽肉 X 射線或 y 射線. 10 5 10 5 10 5 10 5 10 5 10 5. 1.5. 生鮮冷藏畜肉. 電子 X 射線或 y 射線. 10 5. 4.5. 生鮮冷凍畜肉. 電子 X 射線或 y 射線. 10 5. 7. 乾燥或脫水的調電子味用植物(包括香草、種子、香 X 射線或 y 射線辛料、茶、蔬菜調味料) 花粉電子 X 射線或 y 射線動物性調味料電子 X 射線或 y 射線. 10. 30. 延長儲存期限；去除病源菌之污染延長儲存期限；控制旋毛蟲之污染延長儲存期限；控制旋毛蟲之污染防治蟲害及殺菌. 8. 延長儲存期限. 10. 延長儲存期限. 5. 2.4. 延長儲存期限；防治蟲害延長儲存期限. 1. 防治蟲害. 1. 延長儲存期限；防治蟲害防治蟲害. 1 5. 5 10 5 10 5 26.

(49) 目前國內外應用輻射滅菌之相關資料，列表如下： 1. 各國核可草藥照射國家如表 1-5(1)。 2. 美國照射食品合法化項目如表1-6(1)。 3. 美國FDA核可之藥物照射項目如表1-7 (1)。 4. 歐洲核可之藥物照射項目如表1-8(1)。 5. 中國大陸核可之中藥照射項目及劑量如表1-9(22)。 6. 台灣規範中藥載菌量要求-中藥碎片劑型之製劑微生物如表1-10 (73)。 7. 台灣規範中藥載菌量要求-中藥濃縮製劑加味逍遙散等10個處方微生物限量如表1-11 (74)。 8. 各國藥典、法規微生物限量標準如表1-12 (1)。 9. 歐洲藥典之草藥微生物限量標準(cfu/g 或 mL)如表 1-13(1)。 10.英國藥典(1998)對口服製劑的微生物限量標準(cfu 或 mL)如表 1-14(1)。 11.日本藥典對部分藥品的微生物限量(cfu 或 mL)如表 1-15(1)。 12.各種滅菌法的優劣點如表 1-16(1)。. 27.

(50) 表 1-5 各國核可草藥照射國家國家. 劑量 (kGy). 目的. 比利時. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 中國大陸. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 加拿大. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 丹麥. 15. Decontamination(殺蟲滅菌). 埃及. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 迦納. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 法國. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 義大利. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 墨西哥. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 荷蘭. 15. Decontamination(殺蟲滅菌). 挪威. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 巴基斯坦. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 波蘭. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 南非. 4.5. Decontamination(殺蟲滅菌). 美國. 30. Decontamination(殺蟲滅菌). 南斯拉夫. 10. Decontamination(殺蟲滅菌). 韓國. 7. 人參照射之劑量. 28.

(51) 表 1-6 美國照射食品合法化項目食品種類. 照射目的. 允許劑量. 香辛料草藥和. 微生物除污. 30kGy. 乾燥蔬菜調味品太空人專用肉類食品滅菌. 至少 44 kGy. 乾燥和脫水酵素原料微生物除污. 10 kGy. 所有食品. 滅除昆蟲. 1 kGy. 新鮮食品. 延遲成長或成熟 1 kGy 期. 禽肉. 控制病源菌. 3 kGy. 紅肉 (牛肉、羊肉、控制腐敗和病源 4.5 kGy (生鮮) 猪肉). 菌. 7 kGy (冷凍). 猪肉. 控制寄生蟲. 1 kGy (至少 0.3 kGy). 新鮮蛋. 控制沙門氏菌. 3 kGy. 發芽用種子. 控制病源菌. 8 kGy. 29.

(52) 表 1-7 美國 FDA 核可之藥物照射項目 __________________________________________________________________ 1.. Antibiotics. 2.. Botanicals. 3.. Chloretetracycline ophthalmic ointment. 4.. Eye drops. 5.. Eye ointments. 6.. Injectables. 7.. Pigments. 8.. Steroids. 9.. Sutilains ointment USP. 1%. 10. Talc 11. Tetracycline ophthalmic ointment. 1%. 12. Veterinary products _____________________________________________________________________. 30.

(53) 表 1-8 歐洲核可之藥物照射項目歐洲核可之藥物照射項目. 核可國家. 1. Atropine sulphate eye ointment 6%. 英國. 2. Chloramphenicol eye ointment. 英國. 3. Chloramphenicol ear ointment. 英國. 4. Chloramphenicol ointment 1%. 挪威. 5. Chloramphenicol burn dressing. 英國. 6. Chlortetracycline eye ointment 1%. 英國. 7. Contact lens saline aerosol. 英國. 8. Corticosteroid ophthalmic ointment Debrisan. 英國. 9. Neomycin ophthalmic ointment. 英國. 10. Sulphacetamide sodium eye ointment 6%. 英國. 11. Tetracycline eye ointment 1%. 英國. 12. Tetracycline ophthalmic oily suspension 1%. 英國. 13. Tetracycline powder for i.m. injection. 英國. 14. Tetracycline powder for i.v. injection. 英國. 15. Tetracycline topical ointment 3%. 英國. 16. Veterinary products. 31.

(54) 表 1-9 中國大陸核可之中藥照射項目及劑量中藥輻照滅菌時的最大吸收劑量應不大於下列數值：散. 劑：3 kGy. 片劑：3 kGy. 丸劑：5 kGy. 中藥原料粉：6 kGy。允許輻照藥材品種共 198 種艾葉. 草烏. 黨參. 花椒. 劉寄奴. 青黛. 安息香. 側柏葉. 地楓皮. 化桔紅. 蘆薈. 青木香. 巴戟天. 柴胡. 地骨皮. 滑石. 馬兜鈴. 青葙子. 八角茴香. 蟾酥. 地黃. 槐花. 麻黃. 拳參. 白扁豆. 陳皮. 地龍. 黃柏. 馬錢子. 人工牛黃. 白附子. 沉香. 地榆. 黃精. 麥冬. 人參. 白芥子. 赤芍. 丁香. 黃蓍. 芒硝. 肉豆蔻. 白頭翁. 赤小豆. 冬虫夏草. 黃芩. 毛薑. 肉桂. 白芷. 川貝母. 豆蔻. 火麻仁. 密蒙花. 三七. 白朮. 川楝子. 獨活. 急性子. 綿萆薢. 砂仁. 百部. 川烏. 杜仲. 架豆. 綿馬貫眾山豆根. 柏子仁. 穿山甲. 鵝不食草. 降香. 沒藥. 山柰. 板藍根. 穿心蓮. 莪朮. 桔梗. 木鱉子. 山楂. 斑蝥. 川芎. 兒茶. 金銀花. 木香. 麝香. 半夏. 椿花. 番瀉葉. 升麻. 五味子. 益母草. 北豆根. 椿皮. 防風. 石菖蒲. 吳茱萸. 淫羊藿. 北沙參. 磁石. 防已. 石膏. 西青果. 玉竹. 檳榔. 大黃. 蜂蜜. 使君子. 西洋參. 遠志. 32.

(55) 冰片. 大青葉. 茯苓. 水牛角. 細辛. 雲木香. 薄荷. 代赭石. 佛手. 水蛭. 仙鶴草. 樟腦. 蒼耳子. 丹皮. 甘草. 蘇合香. 香附. 浙貝母. 蒼朮. 丹參. 乾薑. 蘇木. 小茴香. 珍珠. 草豆蔻. 當歸. 甘遂. 酸棗仁. 辛夷. 知母. 甘松. 荊芥. 南瓜子. 檀香. 雄黃. 枳殼. 藁本. 救必應. 牛蒡子. 天門冬. 徐長卿. 枳實. 葛根. 決明子. 南星. 天麻. 玄參. 梔子. 枸杞子. 菊花. 牛膝. 土茯苓. 血竭. 朱砂. 鈎藤. 苦地丁. 硼砂. 菟絲子. 鴨跖草. 紫草. 瓜萎子. 苦參. 平貝母. 王不留行延胡索. 紫石英. 廣藿香. 苦杏仁. 茜草. 威靈仙. 洋金花. 自然銅. 桂爾通. 款冬花. 千年健. 五倍子. 野菊花. 紅花. 萊菔子. 牽牛子. 蜈蚣. 伊貝母. 厚朴. 茛菪子. 羌活. 五靈脂. 薏苡仁. 槲寄生. 羚羊角. 秦皮. 允許低劑量（3 kGy）輻照藥材品種共 5 種紫菀. 乳香. 補骨脂. 錦燈籠. 不允許輻照藥材品種共 2 種秦艽. 龍膽. 33. 天竺黃.

(56) 允許輻照中成藥品種共 70 種安宮牛黃丸. 藿膽丸. 喉症丸. 偏癱復原丸. 安胃片. 活胃散. 七釐散. 香砂平胃丸. 鼻咽靈片. 九分散. 清肺抑火丸. 香砂枳朮丸. 鼻炎丸. 康氏牛黃清心丸清熱安宮丸. 消栓再造丸. 檳榔四消丸. 咳丸. 清眩丸. 小兒至寶錠. 冰硼散. 潰瘍散. 山藥丸. 小兒齊應丸. 大活絡丹. 理中丸. 上清丸. 小活絡片. 大山楂丸. 羚翹解毒丸. 沈陽紅藥. 哮喘丸. 二陳丸. 六味地黃丸. 十香止痛丸. 熊去氧膽酸片. 二妙丸. 六一散. 戊已丸. 一捻金. 複方丹參片. 六應丸. 舒胸片. 益元散. 附桂理中丸. 綠雪. 天王補心丹. 銀色人丹. 婦女痛經丸. 麻仁潤腸丸. 通宣理肺丸. 鎮腦寧膠囊. 附子理中丸. 麻仁滋脾丸. 胃乃安. 梔子金花丸. 肝得治. 木香檳榔丸. 胃氣止痛丸. 朱砂安神丸. 肝復康密丸. 牛黃解毒片. 烏雞白鳳丸. 壯腰健腎丸. 感冒退熱沖劑. 牛黃解毒丸. 烏鬚黑發丸. 磁朱丸. 冠心蘇合丸. 牛黃清心丸. 34.

(57) 表 1-10 台灣規範中藥載菌量要求-中藥碎片劑型之製劑微生物限量標準如下: 微生物限量標準 102 (cfu /g). 大腸桿菌（Escherichia coli）. 沙門氏桿菌（Salmonella species）不得檢出 107 (cfu/g). 好氧性微生物總數（Total viable aerobic count ）. 104 (cfu /g). 酵母菌與黴菌總數（Yeast & Mould）. 表 1-11 台灣規範中藥載菌量要求-中藥濃縮製劑加味逍遙散等 10 個處方含微生物限量物質名稱. 限量. 適用範圍加味逍遙散、疏經活血湯、葛根湯、. 總生菌數. 105cfu/g. 辛夷清肺湯、川芎茶調散、獨活寄生湯、麻杏甘石湯、小青龍湯、六味地黃丸、龍膽瀉肝湯. 沙門氏菌. 不得檢出. 大腸桿菌. 不得檢出. 35.

(58) 表 1-12 各國藥典、法規微生物限量標準標準. 品目. 不得檢出菌種. 歐洲藥典. 草藥經加熱處. 大腸桿菌. 菌數限量好氧性微生物≦ 1.0×107 cfu /g. 理後服用. 真菌≦105 cfu /g 不經加熱處理. 大腸桿菌. 好氧性微生物≦. 後服用之草藥. 沙門氏菌. 1.0×105 cfu /g 真菌≦10 cfu /g. 澳洲. 經加熱處理後. 大腸桿菌. 好氧性微生物≦. 服用. 沙門氏菌. 1.0×105 cfu /g. 2 金黃色葡萄球菌真菌≦10 cfu /g. 不經加熱處理. 大腸桿菌. 好氧性微生物≦. 後服用. 沙門氏菌. 1.0×104 cfu /g 真菌≦102 cfu /g. WHO. 草藥經加熱處. 大腸桿菌. 好氧性微生物≦. 理後服用. 沙門氏菌. 1.0×107 cfu /g 真菌≦104 cfu /g. 中藥品管. 草藥內服. 大腸桿菌. 好氧性微生物≦. 沙門氏菌. 1.0×105 cfu /g 真菌≦103 cfu /g. 日本藥局方. 草藥經加熱處. 沙門氏菌. 好氧性微生物≦ 1.0×107 cfu /g. 理後服用. 真菌≦104 cfu /g 草藥與製品. 沙門氏菌. 好氧性微生物≦ 1.0×105 cfu /g 真菌≦103 cfu /g. 36.

(59) 表 1-13 歐洲藥典之草藥微生物限量標準 (cfu/g 或 mL) 微生物. 一類. 二類. WHO. 歐洲藥典. WHO. 歐洲藥典. 107. 107. 105. 105. 黴菌和酵母菌 104. 105. 103. 104. 102. 102. 10. 不得檢出. 其他腸道細菌 104. 103. 103. 沙門桿菌. 不得檢出. 不得檢出. 需氧菌數. 大腸桿菌. 不得檢出. 註: 「一類」: 指用前加沸水處理的草藥, 「二類」:指用前不加沸水處理的草藥。. 表 1-14 英國藥典 (1998)對口服製劑的微生物限量標準(cfu 或 mL) 口服製劑. 活菌數(1g. 大腸菌(1g. 沙門菌(10g. 或 1mL). 或 1mL). 或 10mL). 腸桿菌科和某些革蘭氏陽性菌. 青氧化鋁懸浮液. 102. _. 複合一鎂加鋁口. 102. _. 服懸浮液鎂加鋁口服懸浮. 102. _. _. 液標準番瀉葉乾浸. 104. _. 出液萍婆(顆粒). 102. _. 「_ 」: 不得檢出. 37.