第一章 前言
乳癌自八十九年女性癌症死因的第五名成長為九十年的第四 名，死亡率成長7%，超越子宮頸癌，成為女性癌症死因的第四位，
至九十三年，仍維持第四名。乳癌死亡率逐年攀升，從 85～93 年間，
死亡率由每10 萬人口 9 人增加到 12 人。
在北美和歐洲，乳癌是婦女最常見的惡性腫瘤[1]。乳癌的危險因 子如：月經初潮年齡早、閉經年齡晚、初產年齡晚、家族史等[2]。日 趨年輕化，是台灣婦女乳癌的另一特徵。在美國，三分之二的乳癌發 生在停經後婦女，台灣則相反，乳癌發生率的高峰一直落在40～50 歲婦女，比歐美年輕了10 歲以上。台灣地區婦女乳癌發生率及死亡 率的急速上升，在近二十年間，大概已上升二至三倍之多，而且這個 趨勢並未有減緩的情形，一般認為和國人的生活習慣西化有十分密切 的關係。西化的生活飲食習慣，包括營養的改善所進一步造成婦女初 經年齡的提前、停經年齡的延後、停經後肥胖人口的增加，均會使得 現代婦女相較於從前有更多的機會暴露在荷爾蒙的影響下，進一步增 加乳癌發生的危險性。
乳癌的治療方式可分手術、化學藥物治療、放射線治療、荷爾 蒙療法、生物製劑療法。其中作為加強輻射線對腫瘤殺傷作用，同時
保護或減少正常組織受到傷害的藥物稱為輻射增敏劑。傳統上使用的 輻射增敏劑包括：metronidazole、misonidazole、halogenated pyrimidine analogue 及化學藥物如 mitomycin、5-FU、cisplatinum、paplitaxel 等
[3]，雖能增強放射敏感性、增加腫瘤控制率提高療效，但因有較大的 毒副作用，故限制其臨床應用。
合併療法於癌症治療上有較好的反應並可減低副作用，應用中藥 輔助輻射治療，一般認為可以提高療效，增強免疫功能，並減輕不良 副作用。從中草藥中尋求低毒高效的輻射增敏劑，正是放射腫瘤學家 研究的重要課題。實驗發現，部分中草藥與輻射聯合有明顯的增敏作 用，且具有減輕輻射的毒性損傷，保護骨髓造血功能和免疫功能。我 們希望能由中草藥中，尋找能增強乳癌細胞毒殺作用的輻射增敏劑，
評估中草藥在乳癌細胞之毒殺作用與其輻射增敏效果，尋找中草藥之 最大有效效價，以期能成為提高放療效果的新藥。
第二章 文獻探討
第一節 乳癌
在北美和歐洲，乳癌是婦女最常見的惡性腫瘤[1]。根據衛生署最 新發佈的國人十大死因統計，癌症仍佔第一位，女性前五大癌症死因 依序為肺癌、肝癌、結腸直腸癌、乳癌及子宮頸癌。其中乳癌自八十 九年的第五名成長為九十年的第四名，死亡率成長7%，超越子宮頸 癌，成為女性癌症死因的第四位，至九十三年仍維持第四位。乳癌死 亡率逐年攀升，從85～93 年間，死亡率由每 10 萬人口 9 人增加到 12 人。
日趨年輕化，是台灣婦女乳癌的另一特徵。在美國，三分之二 的乳癌發生在停經後婦女，台灣則相反，乳癌發生率的高峰一直落在 40～50 歲婦女，比歐美年輕了 10 歲以上。台灣地區婦女乳癌發生率 及死亡率的急速上升，在近二十年間，大概已上升二至三倍之多，而 且這個趨勢並未有減緩的情形，一般認為和國人的生活習慣西化有十 分密切的關係。
乳癌的危險因子如：月經初潮年齡早、閉經年齡晚、初產年齡 晚、家族史等[2]。癌症遺傳學研究顯示，乳癌病人的乳癌抑癌基因 BRCA1、BRCA2 基因所在位置，均有高比率的缺損[4,5]。就乳癌的發
生而言，基因缺損斷裂造成的基因體不穩定是乳癌進展的原動力，但 這種不穩定又是造成每個乳癌都有其特有基因變異型態的主要原 因，這項結果將對人類解釋乳癌及其他癌症的發生及進展，提供關鍵 性的訊息。
乳癌主要致癌機轉是建立在女性荷爾蒙（主要是動情激素）對 乳房細胞（或乳癌細胞）的促進增生作用上，因此西化的生活飲食習 慣，包括營養的改善進一步造成婦女初經年齡的提前、停經年齡的延 後、停經後肥胖人口的增加，均會使得現代婦女相較於從前，有更多 的機會暴露在荷爾蒙的影響下，進一步增加乳癌發生的危險性。
乳癌的治療方式可分手術、化學藥物治療、放射線治療、荷爾蒙 療法、生物製劑療法。放療的副作用可能導致患者嚴重口乾、噁心、
嘔吐、白血球減少、放射性皮膚炎、放射性肺炎、上臂水腫、臂叢神 經炎等症狀，以及免疫功能下降而影響療效，這些副作用可能與自由 基引起的脂質過氧化反應有密切關係。
30 多年前，在世界各地只要遇到罹患乳癌的病人，就進行全乳 房切除手術或乳房根除手術；意即當時在乳癌和全部乳房切除二者之 間劃下等號。全乳房切除手術易導致乳癌病人的心理創傷，藉由乳房 重建可緩和精神創傷。在歐美先進國家，這20 年來乳房保留手術合 併放射線治療已普遍地應用在臨床上，由過去數十年所累積的經驗顯
示，採用乳房保留手術加上手術後輻射治療來治療早期乳癌，其療效 與傳統的改良型根治性乳房切除術（乳房全部切除）的療效是一樣 的，甚至效果還好一點點[6]！最新的統計資料顯示接受這兩種不同治 療方式而存活八年的機率都是接近80%；意即接受這兩種不同的手術 後，每100 人中有 80 人可繼續存活 8 年，當然有些人還可繼續存活 10 年、15 年、20 年或到很年老而自然死亡。National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project 於 1985 年開始追蹤研究，統計資料顯示接受 這兩種不同治療方式,其綜合存活率相類似約 60%[7-10]。
第二節 乳癌的中醫治療
乳癌屬中醫學的“乳岩”、“奶岩”、“乳中結核”、“乳癖”。歷代文 獻對乳癌症狀之描述如下：[11]
(一)乳岩
1. 《瘡瘍經驗全書、乳岩》
「乳岩乃陰極陽衰，血無陽安能散、致血滲于心經即生此疾若未 破可療，已破即難治，捻之內如山岩故名之，早治得生遲則內潰爛，
見五臟而死。」
2. 《婦人良方、乳病證治》
「若初起內結小核或如鱉棋子，不赤不痛，積之歲月，漸大毚岩，
崩破即如熟石榴或內潰深洞，血水滴瀝，此屬肝脾鬱怒，氣血虧損名 曰乳岩，為難療。」
3.《婦人大全良方》
「肝脾鬱怒,氣血虧損,名曰乳岩。」
4.《醫學入門、論證治法》
「乳岩乃鬱怒有傷肝脾，結核如鱉棋子大，不痛不癢，五、七年後 外腫紫黑內漸潰爛名曰乳岩，傷盡氣血方死。」
5.《薛己醫案、癰岩治法》
「乳岩乃七情所傷，肝經血氣枯槁之證，宜補氣血解鬱結來治 之，大抵鬱悶則脾氣阻肝氣逆遂成隱核不痛不癢，人多忽之最難治 療，若一有此，宜戒七情遠厚味解鬱結，更以養血氣之榮治之庶可保 全，否則不治，亦有二三載或五六載方潰陷下者曰乳岩，蓋其形岩凸 似岩穴也最毒，慎之可保中一二也。」
6.《外科正宗、乳岩》
「又憂鬱傷肝，思慮傷脾，積想在心，所願不得志者，致經絡疲憊 聚結成核，初如豆大漸如棋子半年一年，二載三載不疼不癢漸漸而 大，始生疼痛，痛則無解，日後腫如堆栗或如覆碗，色紫氣穢，漸漸 潰爛，深者如岩穴，高者若泛蓮，疼痛連心，出血作臭，其時五臟具 衰，四大不救名曰乳岩，凡犯此者百人百必死。」
7.《醫宗金鑒、外科心法要訣、乳岩》
「乳癌初結核隱疼，肝脾兩損氣鬱凝，核無紅熱身寒熱，速灸養血 免患攻，耽延續發如堆栗，堅硬岩形引腋胸，頂透紫光先腐爛，時流 污水日增疼。潰後翻花怒出血，即成敗證藥不靈。」在此認識到乳癌 晚期可轉移至胸壁和腋窩[12]。
8.《醫宗金鑒、婦科心法、乳岩》
「乳岩之證，初起結核如圍棋子大，不痛不癢，五、七年或十餘 年從內潰破，嵌空玲瓏，洞竅深陷，有如山岩，故名乳岩，皆緣抑鬱 不舒，或性急多怒，損傷肝脾所致，宜速服十六味流氣飲。」
(二)奶岩
《丹溪心法、卷五、乳癰》
「懮怒鬱悶，晰夕積累，脾氣消阻，肝氣橫逆，遂成隱核，如大 棋子，不痛不癢，數十年後，方為瘡陷，名曰乳岩。以其瘡形嵌凹似 岩穴也，不可治矣。若於始生之際，便能消釋病根，使心清神安，然 後施之治法，亦有可安之理。」
(三)乳中結核
1.《外科大成、胸部、乳中結核》
「如梅如李，雖患日淺，亦乳岩之漸也。由肝脾虛者用四君子湯 加芎歸、升麻、柴胡，由郁結傷脾者，用歸脾湯，輕者夢見散。」
2.《醫宗金鑒、外科心法要訣、乳中結核》
「乳中結核梅李形，按之不移色不紅，時時隱痛勞岩漸，證由肝 脾郁結成。」注「此證乳房結核堅硬，小者如梅，大者如李，按之不 移，推之不動，時時隱痛，皮色如常，由肝脾二經氣鬱結滯而成，形 勢雖小不可輕忽，若耽延日久不消，輕成乳勞，重成乳岩，慎之慎之。」
(四)乳癖
1.《瘍科心得集•辨乳癖、乳痰、乳癌論》
「有乳中結核，形如丸卵，不疼痛；不發寒熱，皮色大變，其核 隨喜怒為消長，此名乳癖。」
2.《外科真詮•乳癖》
「乳癖，……遇寒作痛，總由形寒飲冷，加以氣鬱痰飲，流入胃 絡，積聚不散所致。又乳癖，……年少氣盛，患一二載，……可消散；
若年老氣衰，患經數載者不治，宜節飲食，息惱怒，庶免乳癌之變。」
3.《瘍醫大全》
「有左乳內忽大如桃，又不疼，色亦不赤，……為痰氣鬱結，誰 知肝氣不舒乎。夫乳屬陽明，乳腫宜責陽明矣，而余獨謂之肝，不起 世人之疑乎。夫陽明胃土，最畏肝木，肝氣亦不舒矣；治法不必治胃，
但治肝而腫自消矣。」
中醫學認為乳癌的病因病機主要是正氣不足，風寒侵入，七情內
傷，鬱結傷脾，所願不遂，引起體內臟腑功能紊亂，沖任氣血失調，
乃至氣滯血瘀，邪毒蘊內，痰濁交凝，結滯乳部而成乳癌[13]。顧乃強 針對不同類型的乳腺癌提出了不同的治則。他指出單純性乳癌由於氣 鬱痰濁結滯乳中而成，治療上注重疏肝理氣、解鬱化痰;炎性乳癌因 肝火瘀毒互結所致，以清熱解毒為，輔以活血軟堅。對于晚期乳癌，
將扶正固本放在首位，常用益氣健脾、養陰生津及益精養血的藥物
[14]。單敬文將乳癌分為肝氣鬱結型、氣滯痰凝型、熱毒內攻型及氣陰 兩虛型，治療分別用疏肝理氣、化痰軟堅、清熱解毒、益氣養陰等法
[15]。顧伯華認為乳癌的腫塊形成非因寒而瘀凝，乃肝火煎熬津液氣血 而致瘀凝痰結所致，這類腫塊是“真熱假寒”，不能用治流痰陰沮的溫 經散寒方藥，而必須用清熱解毒的方藥治療[16]。余慎初認為，乳癌常 以肝鬱化火和熱毒蘊結為主要病理變化[17]。
乳癌的中醫治療原則如下:
1、扶正固本法：具有調節機體免疫、調節內分泌、改善骨髓造 血機能、改善機體的物質代謝、調節細胞內的 cAMP/cGMP 的比值和 直接抑制腫瘤細胞增殖等方面的作用。扶正固本藥具有提高血象，加 強細胞免疫功能，促進網狀內皮系統的吞噬功能，改善機體免疫狀 態，增強激素調節作用，保護骨髓增強放、化療療效，達到控制復發 和制癌作用[18]。
2、活血化瘀法：活血化瘀藥物能通過調整結締組織的代謝，而 減輕放療導致的組織纖維化。活血化瘀藥還能阻止癌細胞在微循環中 的停留、聚集和種植，從而減少癌瘤轉移發生率，同時還可以改善微 循環，增強血管通透性，改善實體瘤的局部缺氧狀態，提高放、化療 的敏感性，以使更多的致敏淋巴細胞到達腫瘤部位，發揮其抗癌作用。
3、化痰軟堅法：痰為機體水液代謝所產生的病理產物，多由脾 虛運化失調引起。化痰散結藥對局部病灶和轉移淋巴結有消散作用。
4、以毒攻毒法：乳腺癌的發生其本為正氣不足，其標為邪毒內 結，歷代醫家都十分重視峻猛之劑治療癌症，所謂“毒陷邪深，非攻 不克”，在應用時較為慎重，一般用於乳癌晚期，尤其是復發或轉移 的病例。該法與活血化瘀結合應用對疼痛的控制作用較為明顯[12]。
以毒攻毒法中的清熱解毒法，是臨床比較常用的法則，它能解除 熱邪及火毒鬱結所致的病症，屬於八法中之大法。就是說當病邪化熱 潘灼陰液，即用寒涼藥來消除發熱因素，起著瀉火解毒，清熱保津等 作用。如《素問‧至真要大論》說：“治諸勝復……熱者寒之，溫者 輕之。” “熱淫於內，治以鹹寒，佐以甘苦，以酸收之，以苦發之。”
“火淫於內，治以鹹寒，佐以苦辛，以酸收之，以苦發之。”提出了火 熱之邪侵入人體所造成的各種熱性病症，均應用鹹寒、苦寒、甘寒、
酸寒等藥進行治療。熱毒與腫瘤的關係密切，炎症和感染往往是促使
腫瘤惡化和發展的因素之ㄧ，而清熱解毒藥能控制腫瘤周圍炎症和其 他感染，減輕症狀，控制腫瘤的發展[19]。且清熱解毒藥具有較廣的抗 菌譜，能抑制病毒，提高機體的非特異性免疫力，對實驗動物的腫瘤 有一定的抑制率[20]。
依據乳癌的中醫治療原則，所以我們選擇了活血化瘀、軟堅散 結、清熱解毒等三類中草藥，作為篩選範圍。
第三節 合併療法（Combination Therapy）
隨著醫學發展，對乳腺癌治療是應用各種方法的綜合治療,包括手 術、放療、化療、內分泌治療及中醫中藥治療。目前手術治療是乳腺 癌的首選治療，輔以放療、化療及內分泌治療。由於這些治療而出現 一系列毒副反應及腫瘤復發轉移等方面難題，給中醫治療乳腺癌帶來 新的挑戰和機遇，由於乳腺癌首選手術治療，中醫治療作為綜合治療 方法之一，治療乳腺癌的重點是防止癌的復發與轉移，減少因化療、
放療所引起的毒副反應，進而提高術後生活品質，延長生存時間[12]。 中西醫藥並用是當代醫學的重要趨勢，近來合併療法
(combination therapy）於癌症放療或化療配合中藥，發現中藥可扶正 固本，增效減毒。合併療法於癌症治療上有較好的反應，應用中藥輔
助放射治療，一般認為可以提高療效，增強免疫功能，並減輕不良副 作用。
放療與中醫藥結合的方法和目的有幾種：1.是增強對放射線的敏 感性，增強局部效果。2.防治和減輕放療的毒副反應和後遺症。3.放 療後鞏固療效，防止復發和轉移，提高遠期生存率[21]。
第四節 輻射的生物效應
放射線依其特性在生物個體之作用方式，主要可分為游離輻射
（ionizing radiation）和非游離輻射（non-ionizing radiation）兩種，游 離輻射包括X-ray、α-ray、γ-ray 及帶有質量的 β-ray 與熱中子
（thermoneutron）等；非游離輻射則有紫外線（UV light）、無線電波 及微波，有時亦包括紅外線（infrared ray）。X-ray 及 γ-ray 為極短的 電磁波，為電磁（electromagnetic）輻射，是屬於低 LET 放射（low linear energy transfer）；而 β-ray 與熱中子，則為帶有質量的質點，為微粒性 輻射，是屬於高LET 輻射，穿透力強。當離子化放射線碰到有機物 質的大分子時，就會產生兩種不同的反應，一種為直接反應；另一種 為間接反應。在直接反應上，會使核酸DNA 分子螺旋的單股或雙股 破壞，DNA 鹼基置換，二分子聚合作用（dimer formation），分子間
到生物體內的水分子或其它有機分子，就會產生自由基，這些自由基 可進一步作用，引發結構及體內分子包括醣類、蛋白質與脂質過氧化 物的裂解，最後導致細胞溶解，嚴重的甚至造成生物體死亡[22]。游離 輻射線對腫瘤細胞會造成單股或雙股DNA 的斷裂，細胞偵測到此種 DNA 傷害時，會選擇活化 DNA 修補系統，或是讓細胞走上凋亡的途 徑[23]。
第五節 輻射增敏劑
輻射治療在腫瘤治療中占有重要地位，據統計，大約有70%的惡 性腫瘤患者，在病程的某一時期需進行輻射治療。由於瘤體內含有 10～15%對輻射線有抗拒作用的乏氧細胞，輻射治療不能有效的殺滅 癌細胞，而成為放療後腫瘤復發的重要原因之一[24]，也使放療的效果 受到限制。輻射會增加人類大腸癌HT 細胞中胸腺嘧啶磷酸酶的量
[25]。輻射增敏劑的效果可降低乏氧細胞對輻射的抗性，加速放療時腫
瘤的消退，提高放療結束時腫瘤的全消率，減少復發和轉移，提高腫 瘤治愈率[26]。
作為加強輻射線對腫瘤殺傷作用，同時保護或減少正常組織受到 傷害的藥物稱為輻射增敏劑(Radiosensitizer)。所謂增敏，就是使細胞
周期“同步化”過程，亦即將腫瘤的細胞群改造成為步伐更整齊的細胞 群，以便用放射線殺傷，其方法可綜合為物理增敏(如加溫、超短微 波等)和化學增敏(如 metronidazole)。輻射對腫瘤細胞的傷害取決於 pH、營養狀況及氧分壓[27-32]。
乏氧會造成基因不穩定，包括基因放大[33]。在輻射及化學藥物對 腫瘤的控制上，乏氧是最重要的限制因子[34]，在1904 年放射腫瘤學 者首先提到“氧的作用”，直到 1950 年輻射增敏作用的氧分壓研究在 正常及腫瘤組織被完成。氧分壓在20-30 mm Hg 時有充分的輻射增敏 作用，在3 mm Hg 有一半的輻射增敏作用[35]。在動物實驗曾做了許 多乏氧細胞的排除，包括：氧釋放化學品、人工氧攜帶、高壓氧、氧 消耗的抑制劑，高LET 輻射的使用及輻射增敏劑[36]。在1955 年 Churchill-Davidson 在臨床輻射治療介紹高壓氧，高壓氧顯然會增加 氧化作用、促進血管新生(angiogenesis)，而導致血流的增加[37-39]。而 血管新生則在異種移植的卵巢癌的老鼠中被發現。在兩個星期的高壓 氧治療後，首先發現血管新生，三個星期後達到最明顯[40]。在頭部和 頸部的腫瘤中，高壓氧有較成功的療效[41-44]。高壓氧的臨床試驗和放 射治療，對於子宮頸癌有很好的療效，除了病人本身有貧血外[45]。高 壓氧對於正常的皮膚、連接性組織和腸會增加輻射傷害和嚴重性、及 複雜的影響[46]。氧化作用受到可用血紅素量的影響，以及氧氣傳輸和
血紅素對於氧氣的親和性[47-50]，對於在頸部、喉部和子宮內膜的腫 瘤，貧血的病人輻射反應較低[50,51]。追溯過去和未來的臨床研究，顯 示如果病人已經達到每100 ml 有 12g 的血紅素，使用輻射治療，可 增加腫瘤的控制速率[52]。若血紅素的濃度從每 100 ml 有 12g 變成 15g，可能降低缺氧組織的體積約 30%，而加強了腫瘤的輻射增敏作 用[53]。輻射增敏劑對於組織的乏氧細胞具有細胞毒性[54]，並且模仿氧 分子在DNA 的作用，減少細胞硫醇的濃度，排除競爭的修復反應[55]。
輻射增敏劑對腫瘤有1.5～2 倍的治療增強比例(therapeutic
enhancement ratio)。在有氧的腫瘤中未發現輻射增敏的可能性。理想 的組織乏氧細胞致敏物質，應該使腫瘤細胞對於輻射有增敏作用，而 不是一般正常的細胞[56]。
第六節 西藥輻射增敏劑
傳統上使用的輻射增敏劑 (Radiosensitizers)其作用機制多為增加 DNA 的損傷或是抑制 DNA 的修補系統[57,58]，包括：metronidazole、
misonidazole、halogenated pyrimidine analogue 及化學藥物如
mitomycin、5-FU、cisplatinum、paplitaxel 等[59]，雖能增強放射敏感 性、增加腫瘤控制率提高療效，但因有較大的毒副作用，故限制其臨
床應用。
最好的輻射增敏試劑是Nitroimidazoles，包括Metronidazole (the trichomonacide, Flagyl) 和 Misonidazole (Ro-07-0582) 。Metronidazole 作用機制為轉移電子，使受放射損傷於target molecule 所產生的自由 基，不能重新獲得電子而被修復。但misonidazole 只作用於腫瘤之乏 氧細胞，且只對頭頸部腫瘤比較有療效Metronidazole 和 misonidazole 在動物和人類都有許多臨床試驗，有較強的放射增敏作用，但臨床試 驗發現有很嚴重的神經毒性，而限制了可使用劑量[60,61]。
維他命C 本身對於腫瘤細胞具有細胞毒性[62]，而且可加強
misonidazole 的細胞毒性[63]。和單純的輻射治療比較，對多型性神經
膠母細胞瘤的病人，在輻射治療同時給予Metronidazole 或
misonidazole，可讓這些病人多活幾個月[64]，Misonidazole 已經應用於 子宮頸癌的臨床試驗。
有一個與misonidazole 構造相似、毒性較低之化合物，ethanidazole
（SR2508 ）， 正 在 發 展 中[65]。不 論 結 果 如 何 ，ethanidazole 和 misonidazole 一樣，作用點只限於腫瘤中的乏氧細胞。某些 halogenated pyrimidines，如 5 – iododeoxyurdine 及 5 – bromodeoxyurdine，也有 腫瘤輻敏效果，不過對正常組織也會造成大的傷害[66]。
對於直腸、肛門、食道、胰臟和喉部的惡性腫瘤病人，使用 5-fluorouracil和放射治療來做治療，可增加局部腫瘤的控制[67,68]。 Fluoropyrimidines (5-fluorouracil 和 fluorodeoxyuridine)在輻射前和輻 射期間給藥，可增加輻射的敏感性，其作用機制主要在造成S 期檢查 點的調節障礙[25]、S 期的停滯[69,70]或抑制胸腺嘧啶合成酶[71]。
Gemcitabine於輻射前24小時給藥可達到最大的增強效果，在重新 分配進入S期和去氧核醣磷酸化特別是dATP的消耗[72-75]，可達到最大 的增敏效果，所以可能可以作為輻射增敏劑。許多證據顯示核醣核酸 還原酶的抑制是增敏的關鍵步驟[73,76]。Gemcitabine的作用可能是和 DNA修復途徑，例如降低同質性末端接合(homologous recombination) 能力(同質性末端接合是S期和G2期的主要修復機制)[77]及凋亡有關，
但尚待證實。和正常組織比較，癌細胞S期檢查點的缺失，或許可提 供作為殺死癌細胞的分子機制。在動物實驗也證實Gemcitabine每週給 藥2次加上輻射，比每週給藥1次加上輻射，對腫瘤細胞有明顯的生長 延遲作用[78]。
Cisplatin有多種作用：例如adduct的形成、抑制DNA損傷的修補，
但是否選擇性的對抗癌細胞，而對正常組織沒有傷害則不確定[79]。 Platinum analogs，如cis-diamminoplatinum (II) (cisplatin)，
cis-diammine-1，1-cyclobutane dicarboxylatoplatinum(II) (carboplatin)、
及最近的 cis-[(1R,2R)-1,2-cyclohexanediamine-N,N_]
[oxalato(2-)-O,O_] platinum (oxaliplatin)，在輻射前後給藥，可增加輻 射導致的自由基增加[29]、抑制DNA損傷的修補[80]、細胞週期的停止
[81,82]。Oxaliplatin是最新發展的第三代Cisplatin類似物，對DNA合成的
抑制有較好的作用[83,84]。
Roscovitine屬於olomoucine相關的purine，也是CDK的選擇性抑制
劑[85,86]，可抑制DNA合成，引發細胞死亡[87]。同時可抑制人類乳腺上
皮細胞的增殖[88]，及抑制cdc2/cyclin B、cdk2/cyclin A、cdk2/cyclin E 複合體的激酶活性[89]，少量的Roscovitine可造成哺乳動物細胞週期 G1-S和G2-M檢查點的停留[90,91]。在此論文中，我們選擇Roscovitine 作為從中草藥中篩選輻射增敏劑試驗中之陽性對照組。
近年來輻射增敏劑之發展轉而向天然物質中尋找，一個頗受注 目的例子是由Western Yen 分出的 paclitaxel（taxol）[92]。Taxol 屬 diterpene 類化合物，含有一個 texane ring 結構。Taxol 可結合 microtubles 之 tublin 次單位，會在細胞週期將細胞阻斷在 G2-M 期
[93,94]。因為G2-M 在細胞循環中是輻射敏感度較高之生長期，taxol
才被考慮拿來作輻射增敏劑之研發。Tishler 報導說 taxol 對人類 astrocytoma 細胞株有輻射增敏作用[95]。不過，Liebmann 則認為 taxol 對某些人類腫瘤細胞只有中度之輻射增敏效果[96]，另有些腫瘤細胞並
沒有因taxol 導致輻射增敏反應。另外一方面，Hei 發現 taxol 會促進 老鼠細胞株的輻射癌化[97]。因此，taxol 作為輻射增敏劑仍有待一步 研究與評估。
第七節 中藥輻射增敏劑
已知中藥的輻射增敏作用之研究如:薑黃中的薑黃素(curcumin) 對許多腫瘤有生長抑制作用，薑黃素2 μM 和 4 μM 加上輻射比單獨 輻射有較明顯的細胞群落抑制及凋亡；薑黃素加上輻射可増加 cytochrome C、caspase-9、和 caspase-3 的活性[98]。苦楝油(Neem oil) 是一種印度植物(Azadirachta indica)種子萃取出來的油，在輻射前後 給予Neem oil，可縮短 G2-M 期。Neem oil 可增強細胞的輻射敏感 性，使次致死傷害轉化成致死傷害，且能抑制DNA 雙股斷裂修復，
縮短G2 期[99]。冬凌草甲素(Oridonin)在輻射時，0.01 mM oridonin 加 上1 mM misonidazole 對乏氧細胞有 1.92 倍的增強比例，oridonin 加 輻射 和 misonrdazole 加輻射個別也有 1.16 和 1.59 倍的增強比例，
oridonin 對有氧細胞沒有增敏效果[100]。
馬藺子素是從馬藺子中抽取的有效成分，為一種新型醌類結構化 合物。馬藺子素對乏氧細胞有放射增敏作用，而對有氧細胞作用不 大。其機理主要是增加乏氧細胞氧含量，減少其GSH 量，抑制細胞
致死損傷修復[101]。馬藺子素不增加放射治療的皮膚黏膜反應，對造 血功能亦無影響。
鶴草酚(Agrimophol)主要存在於仙鶴草根部，經放射線照射後可
迅速氧化，並釋放出H2O2、O2–•和•OH 等毒性物質，其中•OH 可以 直接攻擊腫瘤細胞的DNA 核苷酸、核苷和鹼基以及膜結構等，造成 腫瘤細胞的不可逆性損傷，從而增加了放射線對腫瘤細胞的放射性殺 傷效應。史紀蘭的結果顯示，鶴草酚與放射治療合併應用後，對人肺 腺癌細胞株luyepa 的殺傷率，比單純應用放射治療者可提高 25.1
%[102]。青蒿琥酯(Artemisinin)是青蒿素的衍生物，其為二氫青蒿素的
12-α-琥珀酸酯鈉。抗瘧機理:青蒿琥酯的化學結構含有過氧橋，在代 謝過程中可產生自由基，使紅血球的O2和 H2O2活性氧濃度升高。青 蒿琥酯分子中含有過氧橋結構，在與癌細胞接觸時，可能使氧釋放，
發生了模擬氧作用，從而增加 HeLa 細胞對放射敏感性的作用。藥理 活性及臨床療效：抗瘧疾、抗焦虫、抗血吸虫、抗腫瘤。青蒿琥酯對 小鼠P388 細胞、人宮頸癌 HeLa 細胞、人肝癌 SMMC-7721 細胞及裸 鼠移殖人鼻咽癌都有抑制作用[103]。
枸杞多糖對常態和急性乏氧Lewis 肺癌，均有較明顯的放射增敏 效應，而且無明顯毒性反應，有在臨床推廣試驗觀察及做更深入基礎 研究的價值[104]。
薏苡仁酯(coixenolide, CXL)是從中藥薏苡仁提取的有效成，具有 抗癌和免疫調節作用。以前的研究觀察到CXL 能抑制人鼻咽癌細胞 的生長，然而鼻咽癌以放射治療為主，故值得研究CXL 和放射線的 相互作用。薏苡仁配合放療治療晚期鼻咽癌已取得較好的近期和遠期 效果，提示該中藥能提高鼻咽癌的輻射敏感性。低劑量的 CXL (未產 生細胞抑制作用)與 γ 射線配合，可使後者的量效曲線向左移。CXL 可使腫瘤細胞對輻射的敏感性上升，加入CXL 10-7～10-6 mol/L,可使 放射劑量減少7.41～17.31%，從而產生明顯的增敏作用。至於 CXL 的放射增敏機理，是否與增加腫瘤細胞的耗氧量有關，以及在缺氧條 件下，CXL 對 CNE 2Z 的放射增敏作用等研究仍在進行中。另外，照 射前後加CXL，兩者的結果無差異，故臨床應用薏苡仁或 CXL 時，
不必受照射時間的限制[105]。
蠍毒(scorpion poison)是抗癌中藥全蠍節毒囊的分泌物，可延長荷 瘤小鼠生存期，具有良好的抗腫瘤效應和熱增敏效果，誘導細胞凋亡 是其抗腫瘤的主要機制。組化實驗表明，蝎毒+熱療、蝎毒+放療都明 顯高於各單獨使用的效果。觀察發現，對照組的凋亡細胞極為少見，
三種單純治療組中較為多見，聯合治療組明顯多於單純治療組，表明 蝎毒、熱療、放療均可誘發細胞凋亡，與文獻報導相符，而聯合治療 的誘發作用更為突出[106]。
欖香烯(Elemene)是從薑科植物莪朮中提取的抗癌有效成分，是以 β-欖香烯為主要成分的蓓萜類化合物，基礎與臨床研究發現，其對多 種腫瘤細胞有殺傷力，能誘導細胞凋亡，阻滯細胞週期，無骨髓抑制 及肝腎功能損害，因而欖香烯被認為是一種低毒性的廣譜抗癌藥物
[107]。
第三章 材料與方法
第一節 材料
壹 儀器
無菌操作台 (Lian Shen, Japan)
細胞培養箱 (Nuaire, USA)
細胞計數器 (Haemocytometer; Boeco, Germany)
光學顯微鏡 (Motic, Japan)
離心機 (BOECO, Germany)
酸鹼值測定計 (C831; Consort, UK)
微量天平 (AB204-S, Switzerland)
去離子水製造機 (Minipore, USA)
超高速離心機（Himac CS 120GX, Japan）
Shaker bath (BT-350; YIH DER, Taiwan)
超音波震盪器Sonicater (Misonix, Farmingdale, NY , USA)
ELISA reader（Anthos-2020, Salzbrug, Austria）
水浴槽 Water bath (TKS, Taipei, Taiwan)
流式細胞儀（FACSCalibur, BD, USA）
螢光顯微鏡（ZEIZZ, Germany）
相機（NIKON, Japan）
直線加速器：（ELEKTA SL-18, England）
貳 材料
細胞培養盤 (TPP, Switzerland)
離心管 (季勗, Taiwan)
Paraffin (American national can,USA)
0.22 μm 濾膜（sartoriu, 縉階）
0.8 μm 濾膜（mdi, 伯森）
冷凍管（Cryovial, Canada）
FALCON 專用管（FALCON, USA）
Slide（FEA, Taiwan）
Cover glass（MARIENFELD, Germany）
參 試劑
HBSS (Sigma, USA)
FBS (Fetal Bovine serum; Gibco, USA)
MTT (3-(4,5-dimethylthibzol-2-yl)-5-(3-carboxyphenyl)-2- (4-sulpophenyl)-2H-tetrazolium ) (Promega, USA )
MTS (3-[4,5-dimethylthiazol-2yl]-5-(3-carboxymethoxymethoxy phenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H- tetrazolium ) (Promega, USA)
CCK-8 (Cell count kit-8) (Promega, USA) Penicillin-Streptomycin (Gibco, USA) PI (Propidium iodide; Sigma, USA) RNase A (Sigma, USA)
Sodium bicarbonate (Merck, USA) Sodium chloride (Scharlau, Spain) Trypsin-EDTA (Gibco, USA) HCl (WAKO, Japan)
Sodium hydroxide (Fisher Chemicals) L-15 medium (Gibco, USA)
DMEM medium (Gibco, USA) HEPES (BIOLOGICAL, Industries)
NEAA (Non-essential amino acid, BIOCHROM AG) Sodium Pyruvate (Sigma, USA)
Insulin (Gibco, USA)
PBS (phosphate buffered saline) (Sigma, USA) Tryphan – Blue (BIOCHROM AG)
DMSO (Dimethyl sulfoxide) (Sigma, USA)
Methanol（TEDIA, USA）
Acetic acid（J.T.Baker, USA）
Crystal violet（Sigma, USA）
Alcohol（島文藥品株式會社, Japan）
Acridine Orange（Sigma, USA）
H2O2（MERCK, Germary）
Normal-saline solution (大塚製藥, Japan)
第二節 方法
壹、細胞培養
(一) 細胞來源
1、MDA-MB-231 侵犯性人類乳癌細胞株 （invasive Human breast adenocarcinoma cell line，ER (estrogen receptor)-negative，AhR (aromatic hydrocarbon receptor)–negative，p53–negative and
Rb-negative )購自新竹食品工業發展研究所菌種保存中心(BCRC 60425)
2、MCF-7 非侵犯性人類乳癌細胞株 (non-invasive Human breast adenocarcinoma cell line，ER-positive，AhR-positive，p53–positive and Rb-positive)購自新竹食品工業發展研究所菌種保存中心
(BCRC 60436)
(二) 細胞培養液之配製
1、HBSS 之配製
HBSS 一罐先溶於約 900 ml Milli-Q 去離子水中，加入 3.7 g 的 NaHCO3，再用 HCl 調整 pH=7.0～7.2 後以 Milli-Q 去離子水添加足 量體積至1 L，在無菌操作下以 0.2 μm 之濾膜過濾，儲存於 4℃備用。
2、Trypsin-EDTA 之配製 0.5% Trypsin-5.3mM EDTA 以 HBSS 稀釋成最後濃度 0.05% Trypsin - 0.53mM EDTA
3、L-15 完全培養液( Complete Medium )之配製
取1 包 L-15 粉末培養基，溶於 700 ml milli-Q 水中，再以 300 ml milli-Q 水沖淨袋內殘留粉末，攪拌使其溶解，配置為培養液。並以 1N HCl 調整 pH 值為 7.6，在無菌操作下以 0.22 μm 無菌過濾膜過濾，
並分裝至已標示之無菌玻璃瓶中，每瓶為450 ml，置於 4℃備用，使 用前加入1% penicillin/streptomycin (P/S)，10% FBS (fetal bovin serum)，1% 1M HEPES。
4、DMEM 完全培養液( Complete Medium )之配製
取1 包 DMEM 粉末培養基，溶於 700 ml milli-Q 水中，再以 300 ml milli-Q 水沖淨袋內殘留粉末，加 3.7 g NaHCO3 ，攪拌使其溶解，
配置為培養液。並以 1 N HCl 調整 pH 值為 7.3，在無菌操作下以 0.22 μm 無菌過濾膜過濾，並分裝至已標示之無菌玻璃瓶中，每瓶為 450 ml，置於 4℃備用，使用前加入 1% of penicillin/streptomycin(P/S)，
10% of FBS (fetal bovin serum)，1% of 1M HEPES，0.1% of
non-essential amino acid (100X)，1% of 100 mM sodium pyruvate，
0.25% of 4mg/ml insulin。
(三) MDA-MB-231 乳癌細胞的培養方法
吸掉舊培養液，用PBS (phosphate buffered saline)洗滌細胞 2 次，
移去PBS，加入 2 ml 0.05% trypsin-0.53mM EDTA 溶液，37 ℃作用 1
～3 分鐘，待細胞自瓶壁脫落後，加入 8 ml 含血清之新鮮培養基，離 心1200 rpm 5 分鐘，除去上清液，計數細胞，將細胞培養在 75T 培 養瓶，置於含有5% CO2的37℃恆溫培養箱內培養，拴緊瓶蓋，2～4 天更換細胞培養液。將細胞維持在對數生長期（log phase），並維持 細胞繁殖一代所需之時間（TD；doubling time ）在正常範圍(30-40 小時)內。
(四) MCF-7 乳癌細胞的培養方法
吸掉舊培養液，用PBS (phosphate-buffered saline)洗滌細胞 2 次，
移去PBS，加入 2 ml 0.05% trypsin-0.53mM EDTA 溶液，37℃作用 1
～3 分鐘，待細胞自瓶壁脫落後，加入 8 ml 含血清之新鮮培養基，離 心1300 rpm 10 分鐘，除去上清液，計數細胞，將細胞培養在 75T 培 養瓶，置於含有5% CO2的37℃恆溫培養箱內培養，2～4 天更換細 胞培養液。將細胞維持在對數生長期（log phase），並維持細胞繁殖 一代所需之時間（TD；doubling time）在正常範圍(30-40 小時)內。
(五) 細胞數目計算
先將培養盤內之培養液吸去，再以約7 ml 的 PBS 小心清洗細胞 兩次後，加入約2 ml 的 0.05% trypsin -0.53mM EDTA ，37℃作用 1
～3 分鐘，待細胞自瓶壁脫落後，加入 8 ml 含血清之新鮮培養基中和 trypsin-EDTA 活性，並用 pipette 以緩慢來回抽吸方式將細胞打散。
離心1200 rpm 5 分鐘，除去上清液，並加入 10 ml 培養液稀釋混勻。
如所含細胞密度過高，則算出的數目誤差較大，需再加入更多的培養 液稀釋。取出100 μl 細胞懸浮液和 10 μl tryphan-blue，在 96-well 內 混合均勻，共取2 次。分別從混合液中各取出 10 μl 的細胞懸浮液放 在細胞計數盤(haemocytometer)上下兩個凹槽上，利用蓋上蓋玻片時 的虹吸作用將細胞均勻平均分散於細胞計數區域。在顯微鏡下計數細 胞數目(細胞顏色較亮者為存活的細胞)並算出細胞計數盤內 9 大格 中2 格(左上角及右上角區域)之活細胞總數(N 值)。N 值除上 4，再 乘上1.1（稀釋倍數）x10（細胞懸浮液總量）x 104 即可得 10 ml 中 的細胞總數目(cells/10 ml)。
貳、細胞株解凍與保存
(一)細胞株解凍
將液態氮保存之細胞冷凍管（cryovial）在 37℃水浴槽中回溫約
9 ml 細胞培養液，充分混合均勻後離心 1200 rpm 5 分鐘，去除上清 液，再加入細胞培養液，並使用pipet 將離心後所剩之 pellet 進行混 合，計數細胞，置於含有5% CO2的 37℃恆溫培養箱內培養。
(二) 細胞株保存
指數期生長( log phase )的細胞離心 1200 rpm 5 分鐘，去除上清液 後，加入含有7%無菌 DMSO 之細胞培養液，使用 pipet 進行混合，
每管放5 x 105～1 x 106 cell，取 1 ml 放入凍乾管中(凍乾管先 lable 細 胞名稱、代數、細胞數目、日期)，迅速放到-80℃冰箱中進行降溫，
24 小時後再移至液態氮桶中保存。
參、中藥之配製
(一) 篩選的中藥
1、清熱解毒類
青蒿(Artemisia apiacea)、蒲公英(Taraxacum mangolicum)、敗醬草 (Patrinia scabiosaefolia)、紫花地丁(Viola yedoensis)、白花蛇舌草 (Hedyotis diffusae)、金銀花(Lonicera japonica)、牡丹皮(Paeonia suffruticosa)、虎杖(Polygonum cuspidatum)、大青葉(Isatis
indigotica)、黃芩(Scutellaria baicalensis)、黃柏(Phellodendron amurense)
2、活血化瘀類
丹參(Savia tatarica)、紅花(Carthamus tinctorius)、三稜(Sparganium stoloniferum)、莪朮(Curcuma zedoaria)、三七(Panxa pseudo-ginseng var.notoginseng)、薑黃(Curcuma longa)、王不留行(Vaccaria pyramidata)
3、其他
甘草(Glycyrrhiza uralensis)、夏枯草(Prunella vulgaris)、茶多酚 (Epigallocatechin gallate)、Baicalin、Baicalein
(二) 中藥的配製
1、中藥 stock 溶液的配製
中藥浸膏由港香蘭藥廠提供。現以牡丹皮浸膏為例：若港香蘭藥 廠標示其含水量為49.63%，即其含藥量為 50.37%，若欲製備濃度為 50 mg/ml 的 stock 溶液，則相當於 10 ml 內含 500 mg 的中藥乾重
50.37%* X= 500 mg → X= 992.7 mg
將含中藥浸膏的試管置於一般水浴槽中回溫，在取量之前須混合均 勻，再以刮杓挖取浸膏，取量(992.7 mg)時，須達到克數後小數點第 三位準確，於15 ml 離心管加 Milli-Q 水至 10ml，用 parafilm 將離心 管口封住，混合均勻，在4℃冰箱 rotating overnight，超音波震盪 2
小時，離心3000 rpm 10 分鐘後，取上清液，再次離心 7500 rpm 10 分鐘後，取上清液，在無菌操作下以0.8 μm 之濾膜過濾，再以 0.22 μm 之濾膜過濾，並儲存於-20℃備用。
2、中藥配製回收率
從-20℃冰箱，取出中藥 stock 溶液於 37℃水浴槽回溫，取 4 個 1.5 ml eppendorf 離心管，先秤 eppendorf 離心管的淨重，分裝 1 ml 中藥stock 溶液至 eppendorf 離心管，分裝時一邊晃動離心管，秤重，
放置冷凍乾燥機，約2-3 天後，收取檢品，秤重＜eppendorf 離心管 + 中藥乾重＞，減掉eppendorf 淨重即為中藥乾重，可得中藥真正的濃 度。
肆、輻射條件
輻射之機型為直線加速器ELEKTA, SL-18 England ，由中國醫藥 大學附設醫院放射腫瘤科提供，使用條件為6 MEV，3～8 Gy/min，
標的物距離為100 cm。
伍、細胞活性分析
1、MTT
以Cell Proliferation Kit-l (MTT) 為受質，測定存活細胞粒腺體中 succinate dehydrogenase 的活性，以測定細胞存活率。在 96 wells 培養
盤中，每well 接種 5.0x104個細胞，待24 小時，吸去培養液，加入 含不同中藥藥物之培養液，培養 24 小時之後，照輻射。在 37℃培養 箱下作用48 小時，除去培養基，加 PBS 洗 1 次，除去 PBS，加培養 基及MTT 試劑(避光)，4 小時後，加入 SDS-0.01 N HCl，在 37℃培 養箱下overnight，以 ELISA reader 在波長 570/650 nm 讀取吸光值。
以加入與藥物等量體積的水處理的細胞之吸光值為陰性對照組。以實 驗組及陰性對照組扣除背景值（只有培養液），之後相除，計算出細 胞之相對存活百分比。
2、MTS.
3-[4,5-dimethylthiazol-2yl]-5-(3-carboxymethoxymethoxyphenyl)-2 -(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) 為受質，測定存活細胞粒腺體 中succinate dehydrogenase 的活性，以測定細胞存活率。在 96 wells 培養盤中，每well 接種 5.0x104個細胞，待24 小時，吸去培養液，
加入含不同中藥藥物之培養液，培養24 小時之後，照輻射。在 37℃
培養箱下作用72 小時，以 ELISA reader 在波長 490/650 nm 讀取吸光 值。以加入與藥物等量體積的水處理的細胞之吸光值為陰性對照組。
以實驗組及陰性對照組扣除背景值（只有培養液），之後相除，計算 出細胞之相對存活百分比。
3.CCK-8
以Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 為受質，測定存活細胞粒腺體中 dehydrogenase 的活性，以測定細胞存活率。在 96 wells 培養盤中，每 well 接種 5.0x104個細胞，待 24 小時，吸去培養液，加入含不同中藥 藥物之培養液，培養24 小時之後，照輻射。在 37℃培養箱下作用 72 小時，以ELISA reader 在波長 450/650 nm 讀取吸光值。以加入與藥 物等量體積的水處理的細胞之吸光值為陰性對照組。以實驗組及陰性 對照組扣除背景值（只有培養液），之後相除，計算出細胞之相對存 活百分比。
陸、細胞群落試驗 (Clonogenic survival assay)
在25T flask 中，每瓶 flask 接種 300 個細胞，待 24 小時，吸去 培養液，並加入含中藥之細胞培養液，經24 小時培養後(37℃，5%
CO2)，照輻射。再經 12～15 天培養，吸去培養液，加 PBS 洗二次，
以2 ml methanol:acetic acid (3:1)之固定液固定 10 分鐘，除去固定液，
加1.5 ml 0.5% crystal violet 染色 10 分鐘。除去染液，以二次水洗三 次，以肉眼計數細胞群落(大於 50 個細胞)生長的數目，再算出細胞存 活率。
柒、流式細胞儀（Flow cytometry）
1、步驟
取 TD 值正常的乳癌細胞，培養在 6 well plate (150000 cells/well) 中24 小時，加入藥物暴露 24 小時後，照輻射。培養 24 小時之後，
以PBS 清洗兩次後，加 0.4 ml 0.05% trypsin -0.53 mM EDTA 將細胞 切下，離心1200 rpm 5 分鐘，去除上清液後，再加入 PBS 1 ml 沖洗，
再度離心，移去上清液，緩緩地震盪，加入70%冰酒精，使細胞固定，
以vortex shake 3 的速度一滴一滴緩慢滴入酒精 2 ml，-20℃冷藏隔天。
2、上機前細胞處理
離心1200 rpm 5 分鐘，倒掉上清液去除酒精，加 1 ml PBS，離 心1200 rpm 5 分鐘，加入 PI 染劑避光，換成 Falcon 專用管，室溫下 incubator 30 分鐘，進行流式細胞儀分析。
3、PI stain 染劑的配製(表 3.1)
表 3.1 PI stain 染劑的配製
組成 最終溶液之濃度 原始溶液之濃度 原始溶液之體積 PI 40 μg/ml 2 mg/ml 1 ml
RNase A 200 μg/ml 10 mg/ml 1 ml
1× PBS - - 48 ml
總體積 50 ml
捌、微核試驗方法(Micronucleus test)
取TD 值正常的乳癌細胞，培養在 6 well plate (150000 cells/well) 中24 小時，加入藥物暴露 24 小時後，照輻射。培養 48 小時後，以 PBS 清洗兩次，去除上清液，以 0.05% trypsin-0.53 mM EDTA 將細胞 切下，離心1200 rpm 5 分鐘，去除上清液，將離心沉澱後的細胞用 pipetment 吸取到乾淨的玻片上，自然風乾，再用甲醇固定 10 分鐘，
用0.2 mg/ml 的 AO(acridine orange)試劑染色，蓋上載玻片，以螢光顯 微鏡觀察，短時間內計數完，計數1000 顆單核細胞內的有微核細胞 數目。
玖、統計分析方法
利用Student’s t-test 方法來分析。Student’s t-test 主要是在分析兩 組間的差異性，p 值小於 0.05 表示有統計上的差異。
第四章 結果
第一節 篩選對乳癌細胞有生長抑制作用的中草藥
壹、中草藥對 MDA-MB-231 乳癌細胞生長的影響
以MTS 分析法觀察 21 味清熱解毒、活血化瘀等中草藥對
MDA-MB-231 細胞生長的影響。由圖 4.1、4.2、4.3、4.4 之結果顯示 與陰性對照組(加等體積的水)比較，在篩選的 21 味中草藥中，可看出 部分的中草藥，例如薑黃、三稜、蒲公英、大青葉對MDA-MB-231 細胞沒有明顯的生長抑制作用。
由圖4.5 之結果顯示與陰性對照組(加等體積的水)比較，5 μg/ml Roscovitine 有明顯的毒性，為 MTS 試驗中的陽性對照組。在 5 μg/ml 的濃度下，其生長抑制率為16.6% (p<0.05)；在 7.5 μg/ml 濃度下，其 生長抑制率為37.3% (p<0.05)，都有統計上差異。
有些中草藥與其生物活性成分對MDA-MB-231 乳癌細胞有明顯 的細胞毒性，例如黃芩、黃柏、王不留行等中藥與其有效成分
Baicalin、Baicalein 對 MDA-MB-231 細胞有明顯的毒性(圖 4.1、4.3)。
在50 μg/ml 的濃度下，其生長抑制率分別是 Baicalein 為 80.9%、黃 柏為70.8%、黃芩為 32.8%。25 μg/ml Baicalin 作用下，其生長抑制
率為77%。其 IC 50 的比較如下：Roscovitine 為 10.3 μg/ml 、Baicalin 為13.8 μg/ml、Baicalein 為 26.0 μg/ml、黃柏為 32.3 μg/ml、王不留行 為36.9 μg/ml、黃芩為 207.7 μg/ml。
貳、中草藥對 MCF-7 乳癌細胞生長的影響
以MTS 分析法觀察 21 味清熱解毒、活血化瘀及其他…等中草 藥對 MCF-7 細胞生長的影響。由圖 4.6、4.7、4.8、4.9 之結果顯示 與陰性對照組(加等體積的水)比較，在篩選的 21 味中草藥中，可看 出大部分的中草藥，例如黃芩、金銀花、夏枯草、甘草、大青葉對 MCF-7 細胞沒有明顯的生長抑制作用。由圖 4.6 之結果顯示與陰性 對照組比較，黃柏會抑制 MCF-7 細胞之生長，黃柏 100 μg/ml 作用 下，其生長抑制率為 14.3% (p<0.05)。
圖4.1 中草藥對 MDA-MB-231 乳癌細胞之細胞毒性研究(MTS 法)
* p<0.05 與 control 組相比較
Roscovitine
0 20 40 60 80 100 120
0 2. 15 2. 5 3. 75 5 7. 5 10
Dose (uM)
Survival (%)
黃芩
0 20 40 60 80 100 120
0 6 12.5 25 50 75
Dose (ug / ml)
Survival (%)
黃柏
0 20 40 60 80 100 120
0 6 12. 5 20 25 30 40 50 75
Dose (ug / ml )
Survival (%)
* *
*
*
* *
* *
*
* * *
*
*
*
*
圖 4.2 中草藥對 MDA-MB-231 乳癌細胞之細胞毒性研究(MTS 法)
* p<0.05 與 control 組相比較
白花蛇舌草
0 20 40 60 80 100 120
0 62. 5 125 250 500 750 1000
Dose ( ug / ml )
Survival (%)
莪朮
0 20 40 60 80 100 120
0 62. 5 125 250 500 750 1000
Dose (ug / ml )
Survival (%)
蒲公英
0 20 40 60 80 100 120
0 100 300 500 700
Dose (ug / ml)
Survival (%)
三稜
0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0
0 1 0 0 3 0 0 5 0 0 7 0 0
Do se ( u g / ml)
Survival (%)
金銀花
0 20 40 60 80 100 120
0 100 300 500 700
Dose (ug / ml )
Survival (%)
夏枯草
0 20 40 60 80 100 120
0 100 300 500 700
Dose (ug / ml )
Survival (%)
* * * * * * *
* *
* * *
* *
圖4.3 中草藥對 MDA-MB-231 乳癌細胞之細胞毒性研究(MTS 法)
* p<0.05 與 control 組相比較
茶多酚
0 20 40 60 80 100 120
0 15 20 25 50 100 150
Dose (ug / ml )
Survival (%)
紫花地丁
0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0
0 1 0 0 1 5 0 2 0 0 3 0 0 5 0 0 7 0 0 Do se ( u g / m l)
Survival (%)
敗醬草
0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0
0 3 0 0 5 0 0 7 0 0 1 0 0 0
Do se ( u g / m l)
Survival (%)
B aicalein
0 20 40 60 80 100 120
0 12. 5 25 50 75 150
Dose (ug / ml )
Survival (%)
B aicalin
0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0
0 1 2 . 5 2 5
Do se ( u g / m l)
Survival (%)
王不留行
0 20 40 60 80 100 120
0 6 12.5 25
Dose (ug / m l)
Survival (%)
* *
* *
* *
*
* *
* *
* *
*
*
* *
* * *
*
*
*
*
圖4.4 中草藥對 MDA-MB-231 乳癌細胞之細胞毒性研究(MTS 法)
* p<0.05 與 control 組相比較
丹皮
0 20 40 60 80 100 120
0 100 300 700
Dose (ug / ml )
Survival (%)
紅花
0 20 40 60 80 100 120
0 100 300 700 1000
Dose (ug / ml )
Survival (%)
甘草
0 20 40 60 80 100 120
0 100 300 500 700
Dose (ug / ml)
Survival (%)
青蒿
0 20 40 60 80 100 120
0 100 200 300
Dose (ug / ml )
Survival (%)
薑黃
0 20 40 60 80 100 120
0 300 500 700
Dose (ug / ml)
Survival (%)
大青葉
0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0
0 3 0 0 5 0 0 7 0 0
Do se ( u g / ml)
Survival (%)
* * * * * * *
* * *
Roscovitine 72HR
0 20 40 60 80 100 120
0 .0 2 .3 2 5 3 . 7 5 5 .0 7 .5 1 0 . 0 Do se ( u g / m l)
Survival (%)
Roscovitine 48HR
0 20 40 60 80 100 120
0. 0 2. 5 5. 0 7. 5 10. 0
Dose ( ug / ml )
Survival (%)
Roscovitine 96HR
0 20 40 60 80 100 120
0 .0 2 . 1 5 3 .7 5 5 .0 Do se ( u g / m l)
Survival (%)
*
*
* *
*
*
*
圖4.5 Roscovitine 對 MDA-MB-231 乳癌細胞之細胞毒性研究(MTS 法)
* p<0.05 與 control 組相比較
圖 4.6 中草藥對 MCF-7 乳癌細胞之細胞毒性研究(MTS 法)
* p<0.05 與 control 組相比較
Roscovitine
0 50 100
0 2.15 2.5 3.75 5 7.5 10 15 20
Dose (uM)
Survival (%)
黃芩
0 50 100
0 12.5 25 50 100 150 200 300 500 700
Dose ( ug / m l )
Survival (%)
黃柏
0 50 100
0 100 300 700
Dose (ug / m l)
Survival (%)
* *
*
* * *
圖 4.7 中草藥對 MCF-7 乳癌細胞之細胞毒性研究(MTS 法)
* p<0.05 與 control 組相比較
金銀花
0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0
0 1 0 0 3 0 0 7 0 0
Do se ( u g / m l)
Survival (%)
夏枯草
0 20 40 60 80 100 120 140
0 100 300 700
Dose (ug / ml )
Survival (%)
三七
0 20 40 60 80 100 120 140
0 100 300 700
Dose (ug / ml)
Survival (%)
丹蔘
0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0
0 1 0 0 3 0 0 7 0 0
Do se ( u g / m l)
Survival (%)
Baicalin
0 20 40 60 80 100 120 140
0 12. 5 Dose (ug / ml )25 50 100 150
Survival (%)
Baicalein
0 20 40 60 80 100 120 140
0 25 50 100 150
Dose (ug / ml)
Survival (%)
*
* *
* *
* *
*
*
圖 4.8 中草藥對 MCF-7 乳癌細胞之細胞毒性研究(MTS 法)
* p<0.05 與 control 組相比較
薑黃
0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0
0 1 0 0 3 0 0 7 0 0
Do se ( u g / m l)
Survival (%)
紫花地丁
0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0
0 1 0 0 3 0 0 7 0 0
Do se ( u g / m l)
Survival (%)
青蒿
0 20 40 60 80 100 120
0 100 300 700
Dose (ug / ml)
Survival (%)
三稜
0 20 40 60 80 100 120
0 500 700 1000
Dose (ug / m l)
Survival (%)
茶多酚
0 20 40 60 80 100 120
0 15Dose (ug / ml)20 25
Survival (%)
虎杖
0 20 40 60 80 100 120
0 100 300 700
Dose (ug / ml )
Survival (%)
* * *
*
*
*
* * *
*
