實驗二：人體尿液中肌酸酐濃度的定量分析

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基礎儀器分析實驗－實驗二：人體尿液中肌酸酐濃度的定量分析 一、臨床意義：

肌酸酐（Creatinine）測定資料用於診斷和治療腎臟疾病、監控腎透析，以及作為其他尿分析物測定的資料計算基礎。

尿液（男性）：800 – 2000 mg/24 小時；7.1 – 17.7 mmoL/24 小時 尿液（女性）：600 – 1800 mg/24 小時；5.3 – 15.9 mmoL/24 小時 尿液濃度：約在 171 至 3915 ppm 範圍內

二、方法學：

1.採用 Jaff’s 法測定肌酸酐濃度；在反應中，肌酸酐與苦味酸（Picric acid）在鹼性溶液（pH>13.3）中，結合成肌酸酐 -苦味酸複合物（橘紅色）。

2.測定波長為 500 奈米（nm）。

3.吸光度（Absorbance，簡寫 A）與樣品中的肌酸酐濃度成正比，可依此計算出肌酸酐濃度。應選擇新採集的尿液作樣本。

三、反應試劑之製備：

1. 0.04M 苦味酸：稱取 9.3g 之苦味酸溶於約 80℃之 500mL 水中，溶解冷卻後，加入幾滴酚酞指示劑，以 0.1 N 之 NaOH 滴定 至紅色，加蒸餾水稀釋到 1L。

2.0.75N 之 NaOH：稱取 30g 之 NaOH，加蒸餾水稀釋至 1L。

3.肌酸酐儲存標準液（1000ppm）：稱取 0.100g 之肌酸酐溶於 100mL 之 0.1N HCl，冷藏保存之。

4. 肌酸酐實驗標準液（20ppm）：取 3.之儲存標準液 2mL，以蒸餾水稀釋到 100mL（即稀釋 50 倍），用於檢測實驗。

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四、實驗步驟：

1.分別取 2 mL 苦味酸加入試管 a（尿液樣品肌酸酐濃度測定用）、試管 B（Blank，空白試驗，儀器歸零用）、試管 c（本試 管及以下 3 支試管均用於決定與繪製肌酸酐濃度檢量線）、試管 d、試管 e、試管 f，及試管 g 中。

2.於試管 a（未知濃度）中,再加入尿液樣品體積 2mL，以蒸餾水稀釋到 100mL（即稀釋25 倍），用於檢測實驗;

於試管 B（0ppm）中，再加入5.00 mL蒸餾水後;

於試管 c（4ppm）中，再加入肌酸酐標準液1.0mL及4.00 mL 蒸餾水；

於試管 d（8ppm）中，再加入肌酸酐標準液2.0mL及3.00 mL 蒸餾水；

於試管 e（12ppm）中，再加入肌酸酐標準液3.0mL及 2.00 mL蒸餾水；

於試管 f（16ppm）中，再加入肌酸酐標準液4.0mL及 1.00 mL蒸餾水；

於試管 g（20ppm）中，再加入加入肌酸酐標準液 5.0mL及 0.00 mL蒸餾水。

3.分別取 2 mL 0.75N 之 NaOH 溶液，每隔 1 分鐘，輪流加入試管 a、試管 B、試管 c、試管 d、試管 e、試管 f，及試管 g 中；

請注意，在 NaOH 溶液加入各試管的時候，即開始計時；之後，各試管並需均勻振盪攪拌 10 秒鐘。

4.各試管置放 15 分，固定波長於500nm，以空白試管（試管 B）為對照，測定每個吸光度（即 Aa、AB＝0.000、Ac、Ad、Ae、

Af、Ag）之值。

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五、結果

（1）表 1：檢量線數據 濃度（ppm） ^未知濃度

尿液 0 4 8 12 16 20

吸光度 Ai 0.000

（2）圖 1：檢量線圖形

2.0 Ai

1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0

0 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22

濃度（ppm）

尿液濃度＝╴╴╴╴╴╴ ppm 六、討論

七、結論：

八、資料來源: （請將報告張貼在網頁上，即算交報告）