二、 環島運動試驗：九十七年一月二十七日至二月二日（共 7 天）

第參章 研究方法與步驟

本章將分為以下六節說明：第一節、研究對象；第二節、實驗設計；

第三節、實驗日期；第四節、實驗地點；第五節、實驗方法與步驟；第六 節、資料處理分析。

第一節 研究對象

本研究以 9 名長期從事直排輪溜冰訓練之男性大學生為研究對象。實驗 前需簽署受試者須知、受試者同意書，並填寫健康情況調查表，以保障雙 方權益。

第二節 實驗設計

本研究主要探討直排輪環島運動對白血球數目及免疫球蛋白的影 響，因此實驗配合環島活動，設計 7 個時間點採血進行分析：環出發前一 天、第一天環島結束後、第四天出發前、第七天出發前、第七天環島結束 後、環島後 36 小時、環島後 10 天，進行白血球數目、免疫球蛋白…等不 同指標之測量。另外，讓受試者紀錄環島前六個月內、環島前一個月內、

環島前一週內、環島一週內、環島後一週內，此五個不同分期的上呼吸道 感染率。將數據輸入軟體進行統計分析比較，觀察各變項間的差異，並做 進一步探討。

第三節 實驗日期

本研究於中華民國九十七年一月十九日起進行相關試驗。

一、 前測：九十七年一月十九、二十日。

二、 環島運動試驗：九十七年一月二十七日至二月二日（共 7 天）。

三、 後測：九十七年二月四日、二月十二日。

四、 免疫球蛋白分析：九十七年二月十三日起至完成。

第四節 實驗地點

本研究前後測、免疫球蛋白分析，於國立臺灣師範大學公館校區體育 館一樓生理學實驗室進行試驗。

環島運動於台灣本島進行，環島路線：由中壢出發，向北經頭城、花蓮、

台東、枋寮、台南、彰化，最後返回中壢，總計約 953 公里，共 7 天。

第五節 實驗方法與步驟 一、 實驗流程圖：

圖3-5-1 實驗流程圖 環島出發前 實驗室運動前測

環島運動試驗

環島運動後 10 天 採血

環島運動後 36 小時 採血

招募受試者 及安排受試時間

血液生化分析

資料統整與分析

採血點：

環島出發前

第一天環島結束後 第四天出發前 第七天出發前 第七天環島結束後

受試者報到

填寫相關表格

休息 5 分鐘

配戴心率錶

＆

最大攝氧量偵測儀

衰竭運動測試前採血

衰竭運動測驗 生理值測量 (身高、身體組成）

二、 實驗室中及環島運動試驗流程圖：

圖 3-5-2 實驗室中運動試驗流程圖 圖 3-5-3 環島運動試驗流程圖

收集各項生理數值：身體組成、最大攝氧量、心率…等。

並於研究所設計的七個採血點，進行靜脈採血約 5 ml。

受試者集合

環島出發前採血 (第一、四、七天)

佩戴心率錶

當天環島結束 進行環島運動

(連續七天) 身體組成測量

環島結束後採血 (第一、七天)

三、 實驗器材：

1. 身體組成測量儀，AEROSPORT，InBody 2.0，USA。

2. 原地跑步機（treadmill），Quinyon 65，USA。

3. 新陳代謝分析儀，SENSORMEDICS，VMAX 29，USA。

4. 無線心率監測錶，POLAR，810i，UK。

5. 化學分析及免疫酵素全自動分析儀，AWARENESS，ChemWell 2910，

USA。

6. 微量吸取器，GILSON，P5、P100、P200、P1000，France。

前、後測之身體組成測量在運動生理實驗室及環島過程中，以 Karada Scan 體組成計測量；在實驗室中進行最大攝氧量之試驗，配合 使用treadmill 原地跑步機以 VMAX 29 做測量；心率變化則隨著受試者 從事實驗室運動、環島運動時，同時配戴 Polar 進行監測；血中免疫球 蛋白濃度則在試驗完成後，利用ChemWell 進行分析。

四、 實驗步驟：

（一） 實驗室運動試驗

1、 在約定時間受試者報到後，對其說明實驗的整個流程及其權益，

並要求簽署受試者須知、受試者同意書，以及健康調查表。

2、 休息五分鐘，待受試者覺得呼吸心跳恢復平靜後，採靜脈血液。

3、 生理值測量（身高、身體組成）：

測量身高後，以InBody 2.0 版的機器進行測量，待輸入受試者身 高、性別以及年齡資料後，請受試者手持感應握把、靜止站在儀 器感應區上，約3 分鐘後即可測量出身體 BMI 指數，以及水分、

肌肉、脂肪的比例含量。

4、 佩掛 Polar：

在完成上述檢測後，我們將為每位受試者進行 Polar 心率錶的佩 帶，讓受試者對儀器有初步接觸，並嘗試做輕微的運動，以避免 運動檢測時，儀器滑動而收不到心率訊號，造成檢測數據的偏差。

5、 戴上面罩：

替每一位受試者選擇大小合適的面罩，避免實驗過程中有漏氣現 象，造成收集呼吸交換之氣體之遺失。

6、 進行最大攝氧量測驗

運動測試採Bruce 法，搭配原地跑步機進行衰竭跑步運動測試，

隨時間經過而增加的方法，測驗前先讓受試者在熟悉跑步機上的 運動方式，及注意事項。強度負荷設定詳見下表3-5-1。　

表3-5-1 強度負荷設定表

階段 速度(mile/hr) 坡度(%) 時間(min)

1 1.7 10 3 2 2.5 12 3 3 3.4 14 3 4 4.2 16 3 5 5.0 18 3 6 5.5 20 3 7 6.0 20 3

7、 本測驗依據下列五項標準作為最大攝氧量之判定（林正常，

1996），若受試者達到其中三項，判定已達個人之最大攝氧量：

A. 主觀疲勞衰竭和無法繼續運動測驗。

B. 呼吸交換率在 1.0 或 1.1 以上。

C. 運動量增加時，攝氧量並無明顯增加。

D. 心跳率在最大預測值±10 次/分。

E. 每分鐘換氣量超過 100 升。

（二） 環島運動試驗

1、 受試者共同集合出發，在出發前採靜脈血液做生化分析。（環島 運動中的第一、四、七天）

2、 身體組成測量：每一天早晨以 Karada Scan 體組成計測量身體組 成，約一分鐘左右，可量測身體 BMI 指數，以及肌肉、脂肪的 比例。

3、 在進行當天環島行程之前，為其配掛心率錶（全程配戴），維持 安靜五分鐘，擷取心率數據。完成擷取後，請受試者稍作休息。

4、 進行當天的環島行程。

5、 心率分析：在獲得環島行程中，每一天收取受試者安靜及運動 中的心跳資料後，輸入軟體中進行分析，觀察受試者運動過程 心率變化，以推估環島運動可能的強度。

6、 受試者完成當天行程，結束後立即採靜脈血液做生化分析。（環 島運動中的第一、七天）

（三） 免疫球蛋白分析（在室溫下操作）

A. coat 捕捉抗體（coat with capture antibody）

1、 決定單一 well 所需的量，標準液、樣本、blank（或 controls）

做二重複，置於微量盤。

2、 每一個 well，coat 上補捉抗體溶液 100μl，將 1μl 的補捉抗 體（型號：IgA-A80-102A、IgG-A80-104A、IgM-A80-100A）

稀釋到 100μl 的 coating buffer 中。

3、 微量盤培養 60 分鐘。

4、 培養後，將每個 well 的捕捉抗體溶液吸出。

5、 以 wash solution 清洗每個 well，步驟如下：

a. 每個 well 裝填 wash solution。

b. 吸出 wash solution。

c. 重複三次。

B. 阻隔液 blocking（即 Postcoat）

1、 每一個 well，加入阻隔液 200μl。

2、 培養 30 分鐘。

3、 培養後，將每個 well 的阻隔液吸出，清洗每個 well 重複三次。

C. 標準液及樣本

1、 檢測不同免疫球蛋白，依照下列表 2~4，用樣本稀釋劑

（sample diluent）稀釋製成標準液 1~7。

表3-5-2 IgA 標準液稀釋倍數表

步驟 濃度（ng/ml） Calibrator 校準液 樣本稀釋劑量

1 500 4μl 9.6 ml

2 250 1 ml 步驟 1 配出的溶液 1 ml 3 125 1 ml 步驟 2 配出的溶液 1 ml 4 62.5 1 ml 步驟 3 配出的溶液 1 ml 5 31.25 1 ml 步驟 4 配出的溶液 1 ml 6 15.625 1 ml 步驟 5 配出的溶液 1 ml 7 7.8 1 ml 步驟 6 配出的溶液 1 ml

表3-5-3 IgG 標準液稀釋倍數表

步驟 濃度（ng/ml） Calibrator 校準液 樣本稀釋劑量

0 1000 2μl 8 ml

1 500 1 ml 步驟 0 配出的溶液 1 ml 2 250 1 ml 步驟 1 配出的溶液 1 ml 3 125 1 ml 步驟 2 配出的溶液 1 ml 4 62.5 1 ml 步驟 3 配出的溶液 1 ml 5 31.25 1 ml 步驟 4 配出的溶液 1 ml 6 15.625 1 ml 步驟 5 配出的溶液 1 ml 7 7.8 1 ml 步驟 6 配出的溶液 1 ml

表3-5-4 IgM 標準液稀釋倍數表

步驟 濃度（ng/ml） Calibrator 校準液 樣本稀釋劑量

1 1000 10 μl 3 ml

2 500 1 ml 步驟 1 配出的溶液 1 ml 3 250 1 ml 步驟 2 配出的溶液 1 ml 4 125 1 ml 步驟 3 配出的溶液 1 ml 5 62.5 1 ml 步驟 4 配出的溶液 1 ml 6 31.25 1 ml 步驟 5 配出的溶液 1 ml 7 15.6 1 ml 步驟 6 配出的溶液 1 ml

2、 以預測被分析物濃度，使之落於標準液溶液濃度範圍值內。

3、 每一個 well，加入 100μl 的標準液或樣本。

4、 培養 60 分鐘。

5、 培養後，將每個 well 的標準液及樣本吸出，清洗每個 well 重複五次。

D. HRP 檢測抗體（HRP detection antibody）

1、 用結合體稀釋液（Conjugate Diluent）稀釋 HRP（IgA：

A80-102P、IgG：A80-104P、IgM：A80-100P），檢測 IgA 建

議稀釋倍數為 1：50000（IgG 為 1：150000、IgM 為 1：60000）。

（注意：稀釋倍數需依照 substrate 的使用、培養的時間、kit 的期限去調整）

2、 每一個 well，加入 100μl 的 HRP 結合體稀釋液。

3、 培養 60 分鐘。

4、 培養後，將每個 well 的 HRP 結合體稀釋液吸出，清洗每個 well 重複五次。

E. 酵素基質呈色反應 Enzyme substrate Reaction 1、 準備製造商建議之基質試劑溶液。

2、 若使用 ELIAS Starter Accessory Kit 內的 TMB 呈色劑，混和 等體積的兩種基質試劑。

3、 每一個 well，加入 100μl 的基質試劑溶液。

4、 培養 20 分鐘。

5、 停止 TMB 的反應，每一個 well，加入 100μl 的 2M，H₂SO₄ 溶液。

F. 微量滴定盤讀取（microtiter plate reader），以450nm 波長分析。

五、 上呼吸道感染簡易問卷（詳見附錄五）

本研究利用問卷，了解9 位受試者上呼吸道感染的狀況，追溯時間由參 與實驗六個月前至環島結束後一週。問卷乃參考陳玉英、方進隆（1994）

針對 25 至 50 歲之健康男性所設計之問卷，並加以修改。上呼吸道感染調 查的內容，包含五個期間的感染次數及罹病天數兩部分，並計算感染率。

公式：感染率 = 感染次數 / 該期間天數 * 100 %

例： A 受試者於環島一週內（7 天）感染上呼吸道 1 次，

該期間感染率為：

1 / 7 * 100 % = 14.29 %

第六節 資料分析與處理

一、 本研究所測得之各項資料，將以SPSS for Windows 15.0 統計套裝軟 體進行資料處理及分析。

二、 以重複量數單因子變異數分析，考驗不同時間點分別所測得的各項 指標之數據的變異，若有顯著差異，則以Tukey 做進一步事後比較。

三、 對於各項免疫指標之單日運動前後之變化百分比，則以成對樣本 t 檢定考驗第一日與第七日間變化量之差異。

四、 以重複量數單因子變異數分析，考驗不同期間其上呼吸道感染率的 差異，若有顯著差異，則以Tukey 做進一步事後比較。。

五、 以上統計考驗力皆以α = .05 為顯著水準。