（一）紫外光-可見光吸收光譜分析
將麴酸以純水為溶劑測得之紫外光-可見光光譜圖，如圖四十九所 示，其明顯較大的吸收波長為 216 nm 及 269 nm。分別對 216 nm 及 269 nm 兩波長，作麴酸濃度與吸光值的關係圖，如圖五十、五十 一，均顯示良好的線性（r2＞0.999）。表示兩種波長均適用，麴酸在 研究中之高效液相分析採 269 nm 為檢測波長。
（二）分析方法及確效 1. 移動相的組成
尋找有效的分析方法與適和的移動相，需建立一套移動相中 Methanol 含量與麴酸容積因子（k’）的關係以及移動相 pH 值與 Tf的關係。利用此關係發現到移動相中 Methanol 含量越高，容 積因子越高，最適合的有機相比例為 Methanol 2.5% ~ 5%之間，
如圖五十二所示。移動相中 pH 值越高，則拖尾現象越嚴重，相 對的 pH 值越低，層析峰越尖越對稱，如圖五十三所示，但對滯 留時間影響不大。利用有機相比例與 pH 值作調整，所得最佳條 件為 Methanol：H2O = 4：96（V/V），pH = 2.04。
2. 標準曲線的建立
利用已確立之層析系統進行分析，將麴酸調配成 1.5625~25 µg/ml 之濃度範圍內，進行標準曲線之製備，如圖五十四所示。
其回歸方程式為 Y=56558X+13031，相關係數大於 0.999，顯示 線性關係良好。
3. 準確度、同日、異日精密度變異性的測定
於 25、6.25 及 1.5625 µg/ml 濃度下，其準確度以（相對誤 relative error）表示之，分別為-0.58%、0.12%及-0.44%。
於同日，各製備高、中、低三種濃度（25、6.25、1.5625 µg/ml）
之樣品，依已確立之分析方法進行同日內（intra-day）精密度之 測定。將濃度高、中、低之樣品，分別於早、中、晚各測定三次，
以考驗本分析法之同日變異性。結果如表二十三所示，C.V.%分 別是 0.94%、1.54%和 1.46%。
於不同日，各製備高、中、低三種濃度（25、6.25、1.5625 µg/ml）之樣品，依已確立之分析方法進行異日（inter-day）精密 度之測定，每種濃度試樣於早、中、晚各測定三次，進行分析三 個不同日期，以考驗本分析法之異日變異性。其結果如表二十四 所示，C.V.%分別是 1.83%、3.07%和 1.78%。
4. 最低檢測濃度（LOD）與最低定量濃度（LOQ）試驗
最低檢測濃度試驗（Limit of Detection，LOD）是不斷地稀 釋麴酸至三種濃度 0.0625、0.125、0.25 µg/ml，以 HPLC 分析 求得曲線下面積，依此法重複作三次，分別將此曲線下面積作線 性回歸，可得三個截距，如圖五十五。求出截距的標準差（σ），
並採用標準曲線的斜率（S），參照 ICH 內容計算。
回歸方程式為 Y=56558X + 13031
斜率為 56558 截距的標準差（σ）= 58.643
LOD（3.3 × σ / S）=3.3 × 58.643 / 56558 = 0.003422
LOQ（10 × σ / S）=10 × 58.643 / 56558 = 0.010369
1. 層析法之系統適用性（System suitability test）之訂定
以室溫下、不加酸鹼之檢品進行系統適用性，計算各測試值如下：
（1） 容積因子（Capacity factor，k’）
3.131
採用 Hitachi-7455 二極體陣列檢測器，監測系統可以將結果設定 為 Normalized 的形式，作為評估層析峰的純度。若已分離的麴酸試 樣，其中層析峰內含有任何不純的物質時，不同滯留時間之 UV 光譜 很有可能會改變，經由 Normalized 後就無法重疊，以此方法確定此 層析條件是否能完全將麴酸及其分解產物完全分離。
二極體陣列檢測監測系統會對所存的資料自行比對，並顯示其層 析峰純度的程度。驗證結果若層析峰的純度高時，電腦會給予最高的 評估值 1；評估值越小，則表示檢品層析峰純度愈低。
本研究採酸、鹼及不同溫度下分解檢品進行二極體陣列檢測，就 60℃下，降解率大於 50%的檢品，結果如圖五十六~圖五十八所示，
皆達 0.990 以上之評估值，且經由 Normalized 後的圖形幾乎是重疊 的情形，經電腦評估為高純度的層析峰。
分析方法經二極體陣列檢測器驗證及系統評估，本研究之分析方 法，可確定麴酸與其分解產物有良好的分離效果。此分析方法不僅適 用於麴酸之研究，亦可適用於製劑之品質管制。
3. 麴酸之化學安定性
藥物之安定性會因為環境不同（溫度、pH 值）而改變，藥物的安 定與否，會影響藥物的利用價值。本實驗旨在瞭解麴酸於酸、鹼及純 水中，反應速率受溫度影響的情形。
麴酸在 0.05 N 稀鹽酸、0.05 N 氫氧化鉀及純水之溶液中，分別置 於 25、40、60℃三種溫度下，實驗結果顯示，60℃降解的情形明顯 比 25℃及 40℃快，由此可知麴酸的分解速率會因溫度增加而變快。
本研究採用 25、40、60℃三種不同反應溫度，將麴酸剩餘濃度之 自然對數（Ln C%）數值對時間作圖，如圖五十九~圖六十一所示。
圖中可見其分解反應皆遵循擬一次反應的模式。
圖四十九 麴酸之紫外光-可見光光譜圖
圖五十 波長 216 nm 下，以紫外光光譜儀所製備之麴酸標準曲線
圖五十一 波長 269 nm 下，以紫外光光譜儀所製備之麴酸標準曲線 Concentration ( µg/ml )
0 10 20 30 40
Abs (A)
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0
Y=0.0886X+0.0849 R2=0.9996
Concentration ( µg/ml )
0 10 20 30 40
Abs (A)
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
Y=0.059X+0.0373 R2=0.9999
圖五十二 HPLC 層析法移動相中 Methanol 含量與麴酸的容積因子
（k’）之關係圖
Methanol (%)
2.50% 5% 7.50% 15%
Ln k'
0 1 2 3 4
Y=10.873X+1.1337 R2=0.9978
圖五十三 移動相中 pH 值與 Tf之關係圖
pH value
1 2 3 4 5 6
T
f0 1 2 3 4 5 6 7 8
Concentration ( µg/ml )
0 5 10 15 20 25 30
Peak area
0.0 2.0e+5 4.0e+5 6.0e+5 8.0e+5 1.0e+6 1.2e+6 1.4e+6 1.6e+6
Y=56558X+13031 R2=0.9992
圖五十四 麴酸高效液相層析法之標準曲線
表二十三 麴酸高效液相層析法之同日內精密度試驗 Conc.
（µg/ml） 25 µg/ml 6.25 µg/ml 1.5625 µg/ml
1 1411013 376632 98264
2 1405620 371907 98503
3 1386305 371885 98435
4 1374339 368254 96171
5 1384269 364623 96092
6 1382631 363128 95339
7 1399458 363542 96257
8 1408744 358680 95800
9 1399758 363839 94748
Mean 1394681.889 366943.3333 96623.22222 SD 13087.80992 5635.551348 1412.995734 CV（%） 0.938408251 1.535809711 1.462376954
表二十四 麴酸高效液相層析法之異日內精密度試驗 Conc.
（µg/ml） 25 µg/ml 6.25 µg/ml 1.5625 µg/ml
1411013 376632 98264
1405620 371907 98503
1386305 371885 98435
1374339 368254 96171
1384269 364623 96092
1382631 363128 95339
1399458 363542 96257
1408744 358680 95800
Day 1
1399758 363839 94748
1417888 390955 95703
1434412 395899 95995
1429873 387241 96907
1436324 378970 95302
1418215 397541 95160
1439535 382768 95854
1447861 372318 96703
1452212 375819 95370
Day 2
1440113 372650 96472
1446503 387102 98840
1396562 385065 97919
1393365 379124 98514
1363631 387218 99054
1384453 390212 102786
1429394 393946 98843
1385054 384726 98613
1407111 399877 97874
Day 3
1385707 385477 98277
Mean 1409642.593 379607.3333 97177.59259 SD 25173.29825 11654.50157 1779.342365 CV（%） 1.785792965 3.070146583 1.831021244
圖五十五 低濃度下麴酸之 HPLC 標準曲線圖
Concentration ( µ g/ml )
0.0 0.1 0.2 0.3
Peak area
0 5000 10000 15000
Y=52120X-338.5 R2=0.9997 Y=50097X-265.5 R2=0.9969 Y=51219X-381.5 R2=0.9979 Plot 1 Regr
圖五十六 麴酸於純水中及 60℃下，層析峰純度圖
圖五十七 麴酸於 0.05 N HCl 中及 60℃下，層析峰純度圖
圖五十八 麴酸於 0.05 N KOH 中及 60℃下，層析峰純度圖
圖五十九 麴酸 25 µg/ml 於純水中，不同溫度之分解動力圖
Time (hr)
0 100 200 300 400 500
Ln C%
0 1 2 3 4 5 6
Milli-Q - RT Milli-Q - 40oC Milli-Q - 60oC
圖六十 麴酸 12.5 µg/ml 於 0.05 N HCl 下，不同溫度之分解動力圖
Time (hr)
0 100 200 300 400 500
Ln C%
0 1 2 3 4 5
0.05 N HCl - RT 0.05 N HCl - 40oC 0.05 N HCl - 60oC
圖六十一 麴酸 12.5 µg/ml 於 0.05 N KOH 下，不同溫度之分解動力 圖
Time (hr)
0 100 200 300 400 500
Ln C%
0 1 2 3 4 5 6
0.05 N KOH - RT 0.05 N KOH - 40oC 0.05 N KOH - 60oC
表二十五 麴酸在酸、鹼及不同溫度下之反應速率常數 反應速率常數 K (hr-1)
25℃ 40℃ 60℃
Normal 1.486E-04 5.164E-04 7.548E-03
（0.841） （0.913） （0.988）
0.2 N HCl 4.127E-04 5.164E-04 3.388E-03
（0.857） （0.949） （0.987）
0.2 N KOH 3.170E-04 3.489E-04 4.439E-03
（0.862） （0.994） （0.992）
註：反應 12.5 µg/ml 麴酸，於 0.05 N HCl、0.05 N KOH 中
（）內的數值代表分解反應以一級反應模式回歸所得之相關係數
將每個分解動力圖作線性回歸，求得在各特定 pH 值與各溫度下之反 應速率常數及其相關係數，如表二十五所示。