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第四章 結果

4.2 神經導管接合術實驗

4.2.2 再生組織長過 10 mm 間隙之成功率

4.2.2.1 神經再生成功率

死亡的動物不列入統計,神經管內有白色再生管狀物通過者(表 4.4),視為再生成功。在此定義下,本實驗三組大鼠的再生成功率如表 4.5。

表4.4 三組大鼠神經管內之白色再生管狀物

Silicone 組 ENG 組 CCG 組

表4.5 三組大鼠的再生成功率

組別 代號 成功率

Gelatin + EDC/NHS E 100%

Gelatin + Genipin G 100%

Control (silicone) C 54%

4.2.2.5 再生神經組織切片評估

silicone 組

Silicone 組之再生神經成熟度高,組織已有神經外膜,圍神經膜,

神經內膜等結構。神經內膜中可見多數髓鞘化軸突成形,亦有多數新生 之血管。其周圍無明顯之纖維斑痕組織。圖 4.4、圖 4.5、圖 4.6 分別為 放大40×、100× 及 400×之組織切片圖。

圖 4.4 Silicone 組之再生神經切片,放大倍數 40×,圖中比例尺為 0.5 mm

圖4.5 Silicone 組再生神經切片,放大倍數 100×,圖中比例尺為 0.1 mm

圖 4.6 Silicone 組再生神經切片,放大倍數 400×,圖中比例尺為 0.05 mm

ENG 組

ENG 組之再生神經亦有神經外膜,圍神經膜,神經內膜等結構。

神經內膜中再生單元的型態頗為成熟,Schwann 細胞、未髓鞘化軸突及 髓鞘化軸突分布其中。再生神經周圍有一層纖維化斑痕組織存在(如圖 4.7 之雙箭號所示)。圖4.7、圖 4.8、圖 4.9 分別為放大 40×、100× 及 400×

之組織切片圖。

圖 4.7 ENG 組之再生神經切片,放大倍數 40×,圖中比例尺為 0.5 mm

圖4.8 ENG 組之再生神經切片,放大倍數 100×,圖中比例尺為 0.1 mm

圖4.9 ENG 組之再生神經切片,放大倍數 400×,圖中比例尺為 0.05 mm

GGC 組

GGC 組之再生神經纖維成熟度偏低。G3 及 G8 再生組織仍處於 早 期 階 段 或 神 經 細 胞 未 成 功 再 生 。 沒 有 血 管 組 織 與 神 經 組 織 細 胞 (Schwann 細胞與軸突)形成(如圖 4.10、圖 4.11、圖 4.12 所示);G9 及 G10 向心狀排列的纖維母細胞較為緻密,有將形成神經外膜的趨勢,但 神經外膜、神經內膜界線仍不清楚。核心區仍有許多新生血管,有少許 鬆散 Schwann 細胞柱形成(如圖 4.13、圖 4.14、圖 4.15 所示);G7 及 G12 可以看到大多數為 Schwann 細胞,其具有中度染色的細胞質和一個 卵圓形的細胞核,並可見少數軸突和髓鞘。最早期的髓鞘化已發生。再 生神經周圍也有一層纖維化疤痕組織存在(如圖 4.16、圖 4.17、圖 4.18 所示)。

圖 4.10 GGC 組之再生神經切片,放大倍數 40×,圖中比例尺為 0.5 mm

圖4.11 GGC 組之再生神經切片,放大倍數 100×,圖中比例尺為 0.1 mm

圖4.12 GGC 組之再生神經切片,放大倍數 400×,圖中比例尺為 0.05 mm

圖 4.13 GGC 組之再生神經切片,放大倍數 40×,圖中比例尺為 0.5 mm

圖4.14 GGC 組之再生神經切片,放大倍數 100×,圖中比例尺為 0.1 mm

圖4.15 GGC 組之再生神經切片,放大倍數 400×,圖中比例尺為 0.05 mm

圖 4.16 GGC 組之再生神經切片,放大倍數 40×,圖中比例尺為 0.5 mm

圖4.17 GGC 組之再生神經切片,放大倍數 100×,圖中比例尺為 0.1 mm

圖4.18 GGC 組之再生神經切片,放大倍數 400×,圖中比例尺為 0.05 mm

4.2.3 西方墨點法蛋白質分析

4.2.3.1 Synapsin Ι

Synapsin Ι 表現量 silicone 組最多,ENG 組次之 GGC 組最少。(如圖 4.19)

重複 5 次實驗後將所得結果經電腦軟體量化,以 SPSS 統計軟體進 行 one-way ANOVA 以及 Bonferroni 事後檢定,結果 Synapsin Ι 表現量 silicone 組較 ENG 及 GGC 兩組多,皆達顯著差異;ENG 組及 GGC 組 兩組間的差異則無統計意義。(如表 4.6、圖 4.20)

圖4.19 三種神經導管中再生神經之Synapsin Ι 表現量

表4.6 三種神經導管中再生神經之 Synapsin Ι 表現量比較

Silicone 組 ENG 組 GGC 組 F 值 P 值 事後檢定

平均值a 0.697384 0.143733 0.044831 39.798 0.000 Silicone 組>ENG 組

標準差 0.213119 0.01572 0.03085 Silicone 組>GGC 組

統計方法:one-way ANOVA;事後檢定:Bonferroni;:P<0.05 a:平均值單位為 fold to actin

圖4.20 三種神經導管中再生神經之Synapsin Ι 表現量統計分析

4.2.3.2 GAP-43

GAP-43 表現量 silicone 組最多,ENG 組次之,GGC 組最少。(如 圖4.20)

重複 5 次實驗後將所得結果經電腦軟體量化,以 SPSS 統計軟體進 行 one-way ANOVA 以及 Bonferroni 事後檢定,結果 GAP-43 表現量 silicone 組比 ENG 及 GGC 兩組多,皆達顯著差異;ENG 組及 GGC 組 兩組間的差異則無統計意義。(如表 4.7、圖 4.22)

圖4.21 三種神經導管中再生神經之 GAP-43 表現量

表4.7 三種神經導管中再生神經之 GAP-43 表現量比較

Silicone 組 ENG 組 GGC 組 F 值 P 值 事後檢定

平均值a1.188945 0.254029 0.168214 27.769 0.000 Silicone 組>ENG 組

標準差 0.412553 0.037983 0.038838 Silicone 組>GGC 組

統計方法:one-way ANOVA;事後檢定:Bonferroni;:P<0.05 a:平均值單位為 fold to actin

圖 4.22 三種神經導管中再生神經之 GAP-43 表現量統計分析

4.2.3.2 TGF-β

1

TGF-β1表現量 ENG 組最多,GGC 組次之,silicone 組最少。(如圖 4.21)

重複 5 次實驗後將所得結果經電腦軟體量化,以 SPSS 統計軟體進 行one-way ANOVA 以及 Bonferroni 事後檢定,結果 TGF-β1表現量 ENG 組比GGC 及 silicone 兩組多,皆達顯著差異;GGC 組及 silicone 組兩組 間的差異則無統計意義。(如表4.8、圖 4.24)

圖4.23 三種神經導管中再生神經之 TGF-β1表現量

表4.8 三種神經導管中再生神經之TGF-β1表現量比較

Silicone 組 ENG 組 GGC 組 F 值 P 值 事後檢定

平均值a0.43316 1.697749 0.581192 87.500 0.000 ENG 組>Silicone 組

標準差 0.139405 0.218101 0.122208 ENG 組>GGC 組

統計方法:one-way ANOVA;事後檢定:Bonferroni;:P<0.05 a:平均值單位為 fold to actin

圖4.24 三種神經導管中再生神經之TGF-β1表現量統計分析

第五章 討論