基因毒性（ Genotoxicity）

依據基因治療製劑的性質，可能會需要進行基因毒性試驗。可藉 由下述之三步驟方法，達成執行這些試驗的目的：

1. 探討是否發生基因體修飾之現象，並偵測後續任何異常的細 胞行為。

2. 評估嵌入性突變所導致的毒性議題，並探討造成這些毒性的 作用機轉；還應評估脫靶修飾（off-target modifications）而 導致的毒性問題。

3. 鑑別並描述基因體嵌入位點之特性，並評估轉殖基因和鄰近 序列可能產生的交互作用。

(一) 嵌入性突變

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基因毒性議題包括嵌入性突變和後續的致癌作用等，應於合適 的體外/體內模式中審慎評估。倘若出現陽性結果，則應在基因 治療製劑首次投予至人體之前，進行額外的測試，以確保此產 品之安全性。應根據擬開發與使用之產品類別，明確說明可達 成上述目標的試驗計畫。

標準的基因毒性試驗一般較不適合用來評估基因治療製劑之 基因毒性風險，但若須釐清特定不純物或產品傳輸系統中成分

（如複合材料）的基因毒性風險疑慮時，仍可能需要執行標準 的基因毒性試驗。需特別注意的是，可能會需進行ICH S2（R1）

中某些類型的基因毒性測試，以利基因治療製劑首次投予至人 體之前，排除任何可能歸因於最終產品配方中可能引發基因毒 性作用之成分。

載體DNA嵌入基因體所導致的嵌入性突變可能會造成多種情 況，例如改變宿主基因的表現（活化/抑制）、使宿主基因失去 活性（破壞了open reading frame, ORF）、活化/抑制鄰近的沉 默/活化基因、或是轉譯出新類型的活性融合蛋白等。嵌入性突 變可能造成多種不同的結果，這可能不會影響細胞生長，也可 能會造成細胞的生長優勢或劣勢。為了探討此類基因修飾所誘 發的任何不良反應，建議可藉由體外及（或）體內試驗探討嵌

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入性突變的影響。應考慮在已建立之細胞株、初代細胞或動物 模式中執行基因毒性試驗，藉此評估基因治療製劑的安全性。

(二) 載體特定的考量

若是載體會嵌入宿主基因體以表現相關之轉殖基因，應探討其 嵌入宿主基因體可能產生之風險，無論是依循預期的嵌入表現 方式〔例如當使用反轉錄病毒/慢病毒（retroviral/lentiviral）載 體時〕，或是預期不會發生嵌入（例如當使用腺病毒、腺相關 病毒或質體載體時），皆應進行研究及討論。

對於具有嵌入宿主DNA能力的基因治療製劑，依據最終產品 的投予方式（局部投予或系統性投予）、標的目標組織/器官，

以及目標細胞的生物狀態，來決定是否需要進行基因毒性試驗。

即使基因治療製劑所含之活性藥物成分預期不會嵌入宿主 DNA，仍須視產品特性決定是否需要進行體內或體外試驗以 偵測嵌入情形之發生，以排除任何安全性的疑慮。例如：若治 療基因的表現會持續很久時間，則應謹慎探討基因治療製劑的 持久性，以及DNA載體嵌入基因體的可能性。如果確定有嵌入 情形，則應確定嵌入之套數和鑑別嵌入位置，並監測後續不良 的生物效應和細胞行為變化。另外，根據所使用的載體特性（例

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如，使用會嵌入人類基因體之載體），在首次投予基因治療製 劑至人體之前，可能需要進行延伸性之體外及體內試驗，來說 明該產品是否有因嵌入造成腫瘤形成（insertional oncogenesis）

的問題。

僅依據載體的選擇和細胞的嵌入總量（total integration load），

是無法用來預測基因治療製劑的基因毒性風險，需對帶有基因 毒性嵌入風險的細胞是否仍然在體內形成，以及細胞過度增生 是否最終會惡化成腫瘤的所有因素，來做全面通盤瞭解。因此，

必須將有關載體嵌入人類基因體及其可能產生之相關風險列 入考量。

由於微生物不太可能造成DNA轉移和嵌入宿主細胞基因體的 安全問題，因此針對噬菌體（bacteriophages）和基因修飾之微 生物（genetically modified microorganisms；如乳酸桿菌、沙門 氏菌），可無須考量其是否具有基因毒性。