實驗條件

2.1.6.1 管柱耐壓性測試

管柱尚未填充靜相前進行以下測試實驗：以不鏽鋼管路連接針式 幫浦與管柱，首先將去離子水灌入針式幫浦中，然後填入特製耐高壓 管柱中，待管柱內充滿去離子水後，將管柱另外一端出口密閉，使管 柱內環境形成一密閉空間，然後以定壓操作的方法逐步緩慢地提升管

程中，動相所產生的背壓只要低於此最高耐壓數值以下，玻璃管柱便 不會壞損。

2.1.6.2 比耳定律測試

在一般的分子吸收測量實驗中，物質之吸收訊號強度會遵守比耳 定律：

A abc =

為樣品濃度。由於，在本研究中所使用來計算吸收值的光線其實屬於 擴散反射穿透光線，分析方法並非一般常見的吸收光譜法，故需進行 比耳定律測試實驗，以確保本研究中 WCD 系統所獲得的實驗數據為 可採用之吸收訊號。

將Tartrazine 溶於甲醇：水=1：1（V/V）的溶液中，配製成 10、

50、100、150、200、250、300、350、400、500、750、1000、1500、

2000 mg L^-1的樣品溶液，在注入樣品前先將管柱內打滿甲醇：水=1：

1 的溶液，測量光線穿過管柱後抵達偵測器之光強度 P0，然後再分批 將 Tartrazine 樣品溶液打入管柱內，收集光線通過後之訊號 P，將此

看出，靠近自製管柱上可觀測視窗之兩側的光源訊號較弱較不穩定，

故在此比耳定律測試實驗中，我們選擇第 250-450 個偵測點位置所獲 得的樣品吸收值來做平均，使獲得樣品在管柱內的平均吸收值，再將 樣品濃度與平均吸收值關係作圖，便可得檢量線，以測試本 WCD 系 統所獲得之吸收訊號是否合乎比耳定律。本實驗中，WCD 系統所使 用的濾波片為435 nm 濾波片。

2.1.6.3 WCD 系統再現性測試

為測量機台之穩定性與再現性，將Anthrarufin 溶於丙酮中，配製 成濃度150 mg L^-1的樣品溶液，注入管柱之樣品體積為20 μL，以組 成比例為甲醇：水=93：7（V/V）的動相對樣品進行等位沖堤（isocratic elution），沖堤流速 1 mL min^-1，樣品進樣後立即開啟 WCD 偵測系統 收集樣品於管柱中移動過程之樣品空間分佈訊號，數據取點間距時間 為 1.3 秒，並同時開啟 UV/Vis 偵測器收集樣品流出管柱後的吸收度 訊號（偵測器波長選擇為435 nm），重複 5 次實驗後，選擇樣品移動 至管柱位置約 10.4、11.7、13.0、14.3、15.6 公分處的五組空圖訊號 波形指標 (波高、波峰半高寬、波峰取點時間與波峰面積)來進行再

2.2 實驗結果與討論

2.2.1 管柱耐壓性測試

測試結果是此特殊設計之玻璃管柱能承受至少 200 kg cm^-2 的壓 力而不產生損壞洩漏，甚至以瞬間加壓的方式使管內壓力飆升至200 kg cm^-2 後再瞬間洩壓，都不會對玻璃管柱造成損壞，一般常用的 HPLC 實驗條件中，壓力鮮少超過此限，故確定此特殊設計之玻璃管 柱可進行往後之層析實驗。