第 一 節 、 Ellagic acid 對 血 管 平 滑 肌 細 胞 之 影 響
以MTT 及細胞計數方式評估Ellagic acid 對血管平滑肌細胞毒性之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含1 %胎牛血清的刺 激下，先同步給予不同濃度的Ellagic acid 處理24 小時。經由加入 MTT 反應4 小時後，再加入solubilization solution，經隔夜後測定吸 光值，或以Trypan blue 染色後，再以細胞計數器計算總細胞中存活 的數目或結果顯示(圖8、9)濃度時100 µM的濃度會導致細胞的毒性；
而濃度50 µM則對細胞沒有毒性。
第 二 節 、 同 步 給 予 LDL 與 Ellagic acid 對血管平滑肌細胞之影響 以 MTT方 式 評 估 低 LDL刺 激 平 滑 肌 細 胞 ? 生 之 影 響
平滑肌細胞在經過24小時細胞週期同步化後，在含0.1%胎牛血清的刺 激下，同步給予不同濃度(20、60、100和200 µg / ml) 的LDL處理24 小時，經由加入MTT 反應4 小時後，再加入solubilization solution，
經隔夜後測定吸光值。由於細胞還原MTT的能力代表細胞粒線體的活 性，因此可以做為細胞存活率的一個指標數目，最後換算出經不同 LDL濃度處理後之細胞存活率。結果顯示(圖10)隨著濃度的增加細胞 存活率呈現劑量依附性（dose dependent）。
以細胞計數方式觀察不同時間點給予 Ellagic acid 對於抑制 LDL 刺 激 血 管 平 滑 肌 細 胞 增 生 之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含 0.1﹪胎牛血清 及LDL100 µg/ml的刺激下，同步給予濃度 50 µM的Ellagic acid；或先 給予濃度50 µM的Ellagic acid 處理24小時，再給予LDL100 µg/ml刺激 24小時；或先給予LDL100 µg/ml刺激24小時，再給予濃度50 µM的 Ellagic acid 24小時。以Trypan blue 染色後再以細胞計數器計算總細 胞中存活的數目。結果顯示(圖11)，同步給予LDL及Ellagic acid 組 別，比較其他組別與單獨給予LDL刺激之組別，有明顯的抑制細胞存 活率之表現。
以 MTT 的 方 式 評 估 LDL100µg/ ml 同步加入 Ellagic acid 對血管平 滑 肌 細 胞 數 之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含0.1﹪胎牛血清及 LDL100 µg/ml的刺激下，同步給予濃度50 µM的Ellagic acid 處理經過 24 小時，經由加入MTT 反應4 小時後再加入solubilization solution，
經隔夜後測定吸光值。結果顯示(圖12) 與LDL組別比較同步加入 Ellagic acid 50 µM 組別有的抑制細胞數之表現但統計上無顯著差異。
LDL 對 血 管 平 滑 肌 細 胞 立 即 性 早 期 磷 酸 化 ErK 1/2 蛋白之影響 平滑肌細胞在經過 24 小時細胞週期同步化後，在含 0.1﹪胎牛血清
及低密度脂蛋白 100 µg/ ml 的刺激下於不同時間點(分別為 5、10、15、
20、30 分鐘)後收取細胞抽取蛋白質，以西方墨點法分析不同時間 點，細胞中磷酸化 Erk1/2 的表現變化。實驗結果顯示(圖 13)細胞中 的磷酸化 Erk 1/2 在 LDL 刺激後 5 分鐘後明顯表現並持續至 30分鐘。
LDL100 µg/ml 同步加入 Ellagic acid 對血管平滑肌細胞立即性早期 磷 酸 化 ErK 1/2 蛋 白 之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含0.1%胎牛血 清及LDL100 µg/ml的刺激下同步給予50 µM的Ellagic acid，處理24 小 時，以西方墨點法分析Ellagic acid，對於細胞中磷酸化Erk 1/2 表現 變化。實驗結果顯示(圖14)LDL組比較，同步加入Ellagic acid會抑制 細胞中磷酸化Erk1/2 的表現。
LDL100µg/ml 同 步 Ellagic acid 對血管平滑肌細胞 ERK 1/2 蛋白之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含0.1%胎牛血 清及LDL100 µg/ml的刺激下同步給予50 µM的Ellagic acid，處理24 小 時，以西方墨點法分析 Ellagic acid，對於細胞中Erk 1/2 表現變化。
實驗結果顯示(圖15) 與LDL比較，同步給予Ellagic acid對未磷酸化 Erk1/2 並沒有抑制作用的表現。
LDL100 µg/ml 同步加入 Ellagic acid 對血管平滑肌細胞 PCNA 蛋白
之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含0.1%胎牛血 清及LDL100 µg/ml的刺激下同步給予50 µM的Ellagic acid，處理24 小 時，以西方墨點法分析Ellagic acid，對於細胞中PCNA表現變化。實 驗結果顯示(圖16)與LDL組比較，同步加入Ellagic acid 會抑制細胞中 PCNA 的表現。
第三節、同步給予 ox-LDL 及 Ellagic acid 對血管平滑肌細胞增生之 影 響
ox-LDL 對 平 滑 肌 細 胞 增 生 之 影 響
平滑肌細胞在經過 24 小時細胞週期同步化後，在含 1 %胎牛血清的 刺激下，同步給予不同濃度(20、60、100、200 和 300 µg/ml)的 ox-LDL，
處理 24小時候，加入 MTT反應 4小時後再加入 solubilization solution，
經隔夜後測定吸光值。結果顯示(圖 17)在濃度 50、100 µg/ml 時細胞 存活率與 1﹪FBS-DMEM 培養的細胞存活率明顯增加至 161﹪而 300 µg/ml 則有顯著抑制存活率之情形約 71﹪。
以光學顯微鏡、MTT 及細胞計數方式評估 ox-LDL100 µg/ml 同步加 入 Ellagic acid 對 血 管 平 滑 肌 細 胞 數 及 存 活 率 之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含1﹪胎牛血清及 ox-LDL100 µg/ml的刺激下，同步給予濃度50 µM的Ellagic acid， 處
理24小時，以Trypan blue 染色後再以細胞計數器計算總細胞中存活 的數目，或經由加入MTT 反應4 小時後再加入solubilization solution，
經隔夜後測定吸光值。結果顯示(圖18、19、20) 與ox-LDL（100 µg/ml）
組別比較同步加入Ellagic acid 50 µM 組別有明顯的抑制細胞數及存 活率之表現。
Ox-LDL 100 µg/ml 同步加入 Ellagic acid 對血管平滑肌細胞蛋白 Erk 1/2 蛋 白 之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含1%胎牛血 清及ox-LDL100 µg/ml的刺激下同步給予50 µM的Ellagic acid，處理24 小時，以西方墨點法分析Ellagic aicd對於細胞中Erk 1/2 表現變化。
實驗結果顯示(圖21) ox-LDL（100 µg/ml）組比較，同步加入Ellagic acid 會抑制細胞中Erk1/2 的表現。
Ox-LDL100 µg/ml 同步加入 Ellagic acid 對血管平滑肌細胞立即性早 期 磷 酸 化 ErK 1/2 蛋 白 之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含1%胎牛血清及 ox-LDL100 µg/ml的刺激下同步給予50µM的Ellagic acid，處理24 小 時，以西方墨點法分析Ellagic acid對於細胞中磷酸化Erk 1/2 表現變 化。實驗結果顯示(圖22) 與ox-LDL（100 µg/ml）組比較，同步加入 Ellagic acid會抑制細胞中磷酸化Erk1約0.52倍、Erk2約0.49倍的表現。
Ox-LDL100 µg/ml 同步加入 Ellagic acid 對血管平滑肌細胞週期之影 響
將血管平滑肌細胞經過 24 小時無血清培養進行細胞同步化後，置 換為含1 %胎牛血清之培養液，並分別加入ox-LDL 100µg /ml及 Ellagic acid 50 µM或加入DMSO。於第24 小時收集細胞，並經過細胞 酒精固定和PI 染劑染色後，以流式細胞儀進行分析不同濃度藥物處 理，對血管平滑肌細胞之細胞週期S 期比例影響變化。由結果顯示(圖 23、表一）當給予ox-LDL（100 µg /ml）組別細胞週期S 期與1%
FBS-DMEM比較有明顯由6.76%增加到15.42%，而給予ox-LDL（100 µg /ml）並同步加入Ellagic acid 組別則細胞週期S期則降至9.4%且具 有統計上的意義P＜0.005。
100 µg/ml ox-LDL 同 步 加 入 Ellagic acid 對血管平滑肌細胞 PCNA 蛋 白 之 影 響
平滑肌細胞在經過24 小時細胞週期同步化後，在含1%胎牛血 清及ox-LDL100 µg/ml的刺激下同步給予50 µM的Ellagic acid，處理24 小時，以西方墨點法分析Ellagic acid對於細胞中PCNA 表現變化。實 驗結果顯示(圖24) 與ox-LDL（100 µg/ml）組，同步加入Ellagic acid 會抑制細胞中PCNA 的表現。