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第一節、Ang II 誘導鼠血管平滑肌細胞增生之時間反應

鼠血管平滑肌細胞(VSMCs)在加入 Ang II 0.1µM 培養後,Ang II 在1、6、12、24 小時後拍照,如圖 3-1,可得知平滑肌細胞隨時間而 增加,MTT assay 如圖 3-2 所顯示 Ang II 所誘導第 1 和第 6 小時就血 管平滑肌細胞增生效果,其在第12 和 24 小時 Ang II 所誘導之鼠血管

平滑肌細胞更為明顯地增生,而在第 24 小時的時候細胞則有大量增

生的情況。此部分實驗證明了Ang II 確實可以造成鼠血管平滑肌細胞 的增生。

第二節、銀杏萃取物(GBE)對鼠血管平滑肌細胞之劑量反應

由圖 3-3 觀察出單純以 GBE 12.5~100µg/ml 對鼠血管平滑肌細胞 明顯降低並沒有顯著影響,而GBE 200µg/ml 時細胞數量明顯降。依 此推測當GBE 濃度為 200µg/ml 時對細胞有毒殺作用。因此下列實驗 作用的GBE 劑量為 12.5~100µg/ml。

第三節、GBE 於對於 Ang II 所誘發之鼠血管平滑肌細胞增生之影響

由圖 3-4 可知,Ang II 0.1µM 可明顯增加血管平滑肌細胞數量,

而此上升被GBE 所抑制,且其 GBE 為低濃度就有抑制效果,並且其

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抑制效果會隨劑量增加而上升,NAC 及 DPI 為已知之抗氧化劑。從 圖 3-4 結果顯示當完全沒有加入 GBE 時細胞數量大增,而在其於濃 度反應後之GBE 及 NAC、DPI 皆具有抑制細胞增生的作用,故證明 了GBE 在整個細胞層級上的確可以抑制細胞增生的作用。

第四節、GBE 對於以 Ang II 所誘導之鼠血管平滑肌細胞增生中活性 氧分子含量之影響

由圖 3-5 可得知流式細胞儀測量細胞中的活性氧分子(ROS)含量 之實驗結果,Ang II 0.1µM 可以看出 ROS 的含量明顯地增加。隨著 GBE 濃度愈高所抑制的 ROS 之含量就愈多。而其 GBE 濃度為 100µg/ml 所以抑制 ROS 之含量效果相當於此抗氧化劑。DPI 10 µM 所能抑制的ROS 含量也比 NAC 4 µM 來得多。從圖 3-6 之量化圖可 以看出 ROS 的量隨著 GBE 濃度增加而減少,此實驗確實地證明了 GBE 具有減少 ROS 在細胞中含量的功能。

第 五 節 、 GBE 對 於 以 Ang II 誘 導 鼠 血 管 平 滑 肌 細 胞 增 生 中 extracellular signal-regulated kinase phosphorylation 表現量 之影響

從圖 3-7 之 western blot 實驗結果看出 ERK phosphorylation 的表

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現量,Ang II 0.1µM 刺激 ERK 有大量被磷酸化的現象,在 GBE 濃度 為25 µg/ml 下,可以顯著地抑制較多的 ERK 被磷酸化。在此實驗結 果中顯示ERK phosphorylation 的表現量並非有愈高濃度的 GBE 就能 抑制愈多的 ERK 被磷酸化,而從 NAC 及 DPI 兩組實驗上亦可看出 DPI 10 µM 抑制 ERK 被磷酸化效果比 NAC 4 µM 稍差些。在此實驗 結果中雖說沒有愈高的GBE 濃度即能抑制愈多的 ERK 被磷酸化,但 相對照於有 Ang II 所誘導的細胞增生中,GBE 確實可以減少 ERK phosphorylation,尤其是在 GBE 濃度為 25 µg/ml 就有明顯的表現量 減少。

第 六 節 、 GBE 對 於 以 Ang II 誘 導 鼠 血 管 平 滑 肌 細 胞 增 生 中 endothelin-1 表現量之影響

在圖 3- 8 中看出以 Ang II 所誘發的細胞增生中,從實驗結果就可 以很明顯地可以看出第一型內皮素 endothelin-1(ET-1)的含量在完全

沒有任何抗氧化劑下有大量的表現。而其表現量依加入的 GBE 濃度

增加呈現一梯度的降低,且在 GBE 濃度為 25 µg/ml 下則有顯著的抑 制效果。NAC 以及 DPI 亦可抑制其表現量並達到差不多的效果。對

於此實驗結果可得知於 GBE 及其他抗氧化劑的鼠血管平滑肌細胞中

ET-1 其含量能有明顯地減少。

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