本研究最主要是觀察GBE 在以第二型血管收縮素刺激誘發鼠血 管平滑肌細胞增生中的影響，對於細胞內將造成細胞增生的訊息傳導 路徑上各個有興趣的因子做實驗觀察後進行討論。其主要是以 GBE 對於 ROS、ERK phosphorylation 及 ET-1 個別表現量做探討，最後歸 納出 GBE 對於整體之影響。
第一節、結果討論
從結果顯示出，以MTT assay 實驗出的 Ang II time-course 隨著時
間增長而使鼠血管平滑肌細胞持續增生，故可以知道在此實驗中Ang
II 確實可以使細胞增生(圖 3-1, 3-2)，然而在第 24 小時則有大量的細 胞增生。在不加入Ang II 只單純加入 GBE 於濃度 100 µg/ml 以下時，
而 GBE 在濃度 200 µg/ml 時，細胞數量明顯減少了，顯示出了在此 濃度下 GBE 具有細胞毒殺性(圖 3-3)。為了瞭解 GBE 對於 Ang II 所
造成的鼠血管平滑肌細胞增生作用的影響，各個不同 GBE 的濃度將
加入經過增生作用過後的細胞，而從結果可看出有愈高濃度的 GBE
則能抑制愈多的細胞增生(圖 3-4)。接著為了測量 ROS 在不正常增生 的細胞中的含量，我們以流式細胞儀量測出的結果顯示，在加入 25µg/ml 的 GBE 時就明顯地使 ROS 減少(圖 3-5)，而有愈高濃度的
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GBE 對於 ROS 就有愈大的抗氧化能力，其中原本就是抗氧化劑的 DPI 有最大的抗氧化能力。在磷酸化的 ERK 的結果中可以看出，加 入 GBE 能夠降低其表現程度，可以推知 GBE 可以經由抑制 ROS 而 使訊息無法傳遞到下游並使ERK 無法被磷酸化或者是 ERK 的磷酸化 直接有被GBE 給影響。但似乎並非抑制了愈多的 ROS 就愈能讓 ERK 不被磷酸化，因為從結果顯示，ERK 的磷酸化並無依抗氧化劑濃度 的增加而減少，這可以在 GBE 於 100 µg/ml 時以及 DPI 對於抑制 ROS(圖 3-6)以及 ERK phosphorylation 的結果(圖 3-7)看出。對於此結 果的推論可以歸咎於 GBE 內含有之 quercetin 對於細胞內 ERK phosphorylation 有降低的作用[78]，而或許還有其他途徑會造成 ERK phosphorylation 表現量的改變。在此研究中的訊息路徑裡最後所關心 的ET-1 表現量將由 RT-PCR 實驗來觀察，結果顯示出 ET-1 的基因表 現量在GBE 的濃度增加之下降低，在 GBE 25 µg/ml 時顯著地使 ET-1 的表現量降低。
第二節、其他相關性討論
1. 其他因子對於血管平滑肌細胞增生之作用
對於除了以Ang II 促使血管平滑肌細胞增生的研究之外，以 ET-1 促進血管平滑肌細胞增生的討論亦有不少研究發表[79-81]。由於
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ET-1 所誘發的細胞增生也跟細胞內 ROS 增加並傳導 MAPKs 的訊息 路徑有關，故其扮演的角色與Ang II 相當[82]。除了 ET-1 會促進血 管平滑肌細胞增生之外，血管內皮生長因子(VEGF)亦可以刺激血管 平滑肌細胞。此生長因子據文獻可知其可由血管平滑肌細胞產生，並 又可與細胞上的VEGF 的受體結合誘發 NF-κB 訊息路徑而造成細胞 增生並遷移[83]。另有研究指出血小板衍生生長因子(PDGF)、轉型生 長因子-β(TGF-β)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)也可以刺激細胞並經 由ERK 訊息路徑造成血管平滑肌細胞增生以及遷移[84-88]。事實上 血管平滑肌細胞增生的相關研究除了對於心血管疾病之外，其對於癌 症細胞之研究來說亦是一大主角[89, 90]。因為在腫瘤形成的過程中，
血管的增生對於提供腫瘤細胞的養分是最重要的事件之一，但本研究 只把焦點放在心血管疾病上是因為其好發於國人並較具有威脅性。
2. GBE 對於其他細胞之影響
GBE 對於血管保護、抗氧化、減少高血壓形成、抗發炎、抑制血 清中的血管收縮素轉換酶以及抑制細胞增生的作用已被廣泛地研究 [91]。且除了在鼠主動脈血管平滑肌細胞增生的研究之外，在鼠主動 脈血管內皮細胞、人類主動脈血管平滑肌細胞、胃癌細胞、胰癌細胞、
肝癌細胞、肺癌細胞等皆有在抑制細胞增生之作用上被研究[92-98]。
可見得GBE 對於體內不正常細胞增生的抑制作用是相當具功效的。
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