第五章、 討論
5.8 結論
台灣農業生產成本高，因此必需重視種源權之保護，使本身站穩在蘭 花產業上游的地位，以育種質量保持在國際市場中的競爭力。在美國，以 人為方法所改變製造培育出來的植物新品種是可以取得專利。基於避免壟 斷，影響農業之正常經營與運作之考量，我國對於植物新品種尚不給予專 利保護。但為鼓勵重點研發，我國對於某些特定植物之新品種給予植物種
苗法之保護。通常保護期間是十五年，權利人除享有使用權，尚有推廣銷 售之權利與義務(梁和謝，2003)。但目前在植物品種認證工作上，往往還是
停留在以外在表現型為主的判斷，此法雖行之有年，但讓人詬病的地方還 是很多。 所以建立一套客觀且具公信力之植物品種認證系統(附錄一)是刻 不容緩的。本實驗利用核苷酸排列組合的多樣性，來代表植物品種所有者 等資料，設計之 DNA 標誌序列去除前後限制酶切位之序列外，尚有 21 個 鹼基可以進行排列組合，故有421種組合輔以數字即可成為基因認證代碼，
配合適當政策即可建立蘭花專屬的品系登記與註冊系統(附錄二)。將設計好 之分子標誌經由生物鎵低壓基因槍轉殖入植物基因組中，穩定遺傳到其有 性或無性增殖子代。因此，該植物品種的量產子代可以非常具體的以聚合 酶鏈鎖反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)、生物晶片(Biochip)或 DNA 定 序(DNA sequencing)等方式，讀出其 DNA 序列所代表的品種所有者資料，
藉以完全保護品種所有者之品種權。對於植物產品、育種、智慧財產權和 糾紛的仲裁，以及整個農業生產體系的各個環節、進出口市場和植物品種 國家法令政策，得以明確完整的保護，確保我國政府及民間業者長久以來 累積的品種資源和實力，免於國內外業者以生物技術無償量產分生苗低價 回銷自有品種及混亂市場的威脅，亦增加品種所有者之收益，促進育種者 育種之意願提升國家整體之種源實力。本研究不僅成功地將分子標誌轉殖 至妖精蘭，更是首次成功地將低壓基因槍應用在植物轉殖試驗上。
第六章、參考文獻
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Zygopetalum mackayi(Orchidaceae). Agric. Biol. Chem. 52 (6) ：1599-
1600.0 0
表三、BioWare 低壓基因槍與 Bio-Rad 基因槍之比較 Particle 配置較容易省去 cartridge
的製作直接以溶液狀使用無須使
圖1. Biolistic PDS-1000/He 粒子撞擊基因傳送系統
(圖片摘自 Biolistic PDS-1000/He Particle Delivery System 中文簡易操作手冊)
各種內徑之槍管 氣體壓力調節閥
樣品注入孔
套筒 氣體連通管
槍體 扳機
A 快速接頭
B C
D
圖2. BioWare 低壓基因槍簡介(生物鎵公司網站資料) A：BioWare 低壓基因槍各項零件
B：槍擊後粒子散怖之情形 C：槍擊後粒子散怖之情形近照 D：槍擊時粒子霧化之情形
GAT CCT TTT TTC GGT GCC CCC TTT TTG AGG GGG CAA AGA AAA AAG。以5個A代表亞洲地區之代碼；5個G代表台灣之代 碼；5個鹼基之排列組合代表品種所有者之註冊代碼；最後以6個A代表蘭花品種 之代碼。將設計好之分子標誌接在pCAMBIA1301之右端與左端之間，包括右端(RB, right border)；左端(LB, left border)；35S啟動子(35S P, 35S promoter)；抗高黴素的基因 (HPT, hygromycin phosphotransferase)；GUS報導基因(GUS,β-glucuronidase)。
圖4. pCAMBIA1301 之圖譜(CAMBIA網站的資料)
圖5. pGEM®-T Easy Vector circle 之圖譜(Promega 網站的資料)
M 1301 1301B M 1301A 1301
2810bp 3444bp 5583bp 8393bp
8000bp
5000bp 3444bp
3000bp 2000bp
圖6. 構築質體利用 KpnⅠ/NheⅠ酵素切割確認之電泳分析圖 Lane01：1kb DNA梯度標誌(M)
Lane02：經由KpnⅠ/NheⅠ酵素切割的1301A
Lane03：經由KpnⅠ/NheⅠ酵素切割的1301做為對照組 Lane04：1kb DNA梯度標誌(M)
Lane05：經由KpnⅠ/NheⅠ酵素切割的1301做為對照組 Lane06：經由KpnⅠ/NheⅠ酵素切割的1301B
30psi 3cm 10μl
70psi 3cm 10μl
50psi 6cm 10μl
50psi 3cm 10μl
A B
C D
30psi 3cm 10μl 50psi 6cm 10μl
A B
C D
70psi 3cm 10μl 50psi 3cm 10μl
圖7. 低壓基因槍在不同條件下槍擊濾紙之情形 A：氦氣壓力30psi；距離3cm；DAN注入量10μl B：氦氣壓力50psi；距離6cm；DAN注入量10μl C：氦氣壓力70psi；距離3cm；DAN注入量10μl D：氦氣壓力50psi；距離3cm；DAN注入量10μl
A B
C D
A B
C D
A B
圖8. 低壓基因槍槍擊玉米糊粉層 GUS 暫時性表達 A：未轉殖玉米的糊粉層經X-GlucA染色作為對照組
圖8. 低壓基因槍槍擊玉米糊粉層 GUS 暫時性表達 A：未轉殖玉米的糊粉層經X-GlucA染色作為對照組