第二章 文獻回顧
2.2 金黃色葡萄球菌之固體培養基
2.2.2 選擇性培養基
選擇性培養基（selective medium）為一種於培養基內加入特定抑菌物質，使 某些微生物生長受抑制，而特定微生物穩定生長之培養基，因而有利於特定微生 物之分離。其抑菌因子包含：特殊營養成份、培養條件（如培養溫度與pH值等）、
化學藥劑（如高濃度鹽份）或抗生素。過去S. aureus之空氣採樣研究，曾使用之選 擇性培養基包括：Mannitol Salt Agar（MSA）（Schulz et al. 2011）、Baird-Parker agar
（BPA）（Zhong et al. 2009）、CHROMagar staph aureus（CSA）（Hsiao et al. 2011）
與Chapman Stone Medium（CSM）（Gandara et al. 2006, Perez et al. 2011）。
2011年Schulz等人以AGI-30搭配glycerol-phosphate buffer於雞舍進行30與90分 鐘之採樣，後續培養時即以MSA作為初步分離S. aureus之選擇性培養基(Schulz et al. 2011)。MSA含有7.5%之高濃度鹽類，可抑制Staphylococci以外之其他細菌的生 長。且其含有醣類甘露醇（mannitol），S. aureus醱酵甘露醇後之代謝物，其酸性會 使培養基中之pH指示劑-酚紅（phenol red）轉變成黃色，於其菌落周圍形成黃色環，
而大多數非致病性葡萄球菌無法發酵甘露醇，於MSA上菌落較小，外觀呈粉色或 與MSA相同顏色（紅色）。由於MSA含有酚紅，因此未培養S. aureus前培養基呈現 紅色，若於35 ± 2°C下培養S. aureus 18小時以上，培養基上即會出現金黃色菌落。
BPA曾於2009年為Zhong等人用於Andersen 6-STG內，在雞舍進行1至5分鐘之 S. aureus空氣採樣，目的為以S. aureus作為該環境空氣中微生物分佈之指標細菌，
以觀察雞舍室內外空氣中微生物之分佈（Zhong et al. 2009）。BPA成分中之鋰鹽
（Lithium）與亞碲酸鹽（Tellurite），可抑制Staphylococcus spp.以外之雜菌生長，
且因葡萄球菌可將Tellurite還原成Telluride，其反應產物會使菌落呈現黑色。BPA 所添加之蛋黃液（Egg yolk），使培養基外觀呈現不透明之淡黃色，若於35 ± 2°C下 培養S. aureus於BPA 18小時以上，可觀察到菌落周圍出現不透明之暈環，此為S.
aureus之lecithinase分解蛋黃液中lecithin所造成。
2012年Hsiao等人曾以Andersen 1-STG搭配CSA於醫學中心候診區、小兒病房 與呼吸照護病房等處，進行7分鐘之S. aureus空氣採樣，以了解使用CSA於實際環 境中進行空氣採樣後，對於空氣中S. aureus之鑑定敏感性與特異性（Hsiao et al.
2011）。CSA為一產色性培養基，其特殊產色原（Chromogen）被S. aureus之特定酵 素代謝後，會使S. aureus形成淡紫色菌落。此外，CSA中添加之抑菌物質可抑制革 蘭氏陰性、真菌以及其他非S. aureus之革蘭氏陽性球菌，因此非S. aureus之細菌除 無法代謝Chromogen外，亦可能被CSA中所含抑菌物質所抑制，而達到篩選出S.
aureus之目的。CSA於37°C下培養S. aureus 18小時以上，即可觀察到淡紫色菌落。
CSM則是透過高鹽分（5.5%）篩選出S. aureus之培養基。2006年Gandara等人 以Andersen 2-STG搭配TSA，於一般住家環境進行10與15分鐘之S. aureus空氣採樣，
接著將TSA於35°C下培養24至48小時後，再將培養出來之菌落接種至CSM，進行 後續生化測試以鑑定出S. aureus（Gandara et al. 2006）。另外，2011年Perez等人亦 以Andersen 1-STG搭配Nutrient agar（NA）進行3分鐘之S. aureus空氣採樣，接著將 NA置於36°C下培養48小時，再將培養出來之菌落接種至CSM，其培養出來之菌落 再進行後續生化鑑定（Perez et al. 2011）（後續鑑定流程如表 2所示），以上兩次研 究目的皆為了解一般住家環境空氣中非抗藥性與具抗藥性之S. aureus的分佈情形。
CSM培養基本身呈半透明之琥珀色，成份中含有甘露醇（mannitol），S. aureus可發 酵mannitol後產酸。CSM於30°C下培養S. aureus 18至48小時後，可觀察到黃色菌落。
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表 2 Staphylococcus aureus之空氣採樣培養基
採樣器 培養介質 鑑定流程 觀察上下限值或檢出率 Ref.
Andersen 1-STG
Nutrient Agar 48hr at 36℃→Chapman Stone Medium→48hr at 36℃→NA→48hr at 36℃→Coagulase
plasma test→Antibiotic Susceptibility Test→48 hr at 36℃
S. aureus/Total Bacteria = 98%
MRSA/Total Bacteria = 56%
Perez et al.
2011
CHROMagar staph aureus
20-24hr at 37℃→Gram stain→Hemolysis test→24hr 37℃→Catalase test→Slide coagulase test→real time PCR
（nuc）→Antibiotic Susceptibility Test
SA：8（CFU/m3） Hsiao et al. 2011
Andersen 2-STG
Tryptic Soy Agar 24-48hr at 35℃→Chapman Stone Medium →
48hr at 35℃→Coagulase test→Antibiotic Susceptibility Test→48 hr at 35℃
24hr at 37℃→KOH reaction→24hr at 37℃ in BPA→
API 20 Steph
SA：137（CFU/m3） Zhong et al. 2009 AGI-30 Glycerol-phosphate
buffer
MSA→24–48hr at 36℃→blood agar basis plates 24-36hr at 36℃→Gram stain→ Morphology →Motility→Catalase test→Oxidase test→ Lysostaphin susceptibility→Clumping factor test→16S–23S rDNA intergenic spacer PCR
- Schulz et
al. 2011
表 2 Staphylococcus aureus之空氣採樣培養基（續）
採樣器 培養介質 鑑定流程 觀察上下限值或檢出率 Ref.
Andersen 1-STG
TSA Gram stain→catalase test→tube coagulase test→Dnase test→
fermentation of mannitol→PCR（femA） 3.1-14.2% Mirzaii et al.2012
Andersen 1-STG
TSA GEN III Biolog method 5-15% Huang et
al. 2013
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2.2.3 金黃色葡萄球菌鑑定