以 DNA 電泳評估抑制羥基自由基

第四章結果

四、以 DNA 電泳評估抑制羥基自由基

本實驗係以兩種 DNA 為標記：pUC 119 DNA 與 Marker DNA

（λ-Hin d III digest）。以（1）正常 DNA、（2）照射 UVB、（3）添加過氧化氫、（4）同時添加過氧化氫以及照射 UVB、（5）添加過氧化氫再以 UV 處理後加入萃取物，做為比較，發現同時添加過氧化氫以及照射 UVB 會使 DNA 斷裂，藉由此條件，添加萃取物於 DNA 溶液中，比較保護 DNA 的結果。其電泳膠片，經 UV 燈箱拍照，以 KODAK 1D 軟體分析其 DNA 的亮度，進而對照添加萃取物之濃度，可算出 SC₅₀。在 pUC 119 DNA 的保護上，計算出之保護 DNA 免於羥基自由基與 UVB 傷害之自由基抑制率及SC₅₀如表4-5 所示：CWC, 2.97 mg/mL、CAC, 0.052 mg/mL、BAC, 4.39 mg/mL、RAC, 3.79mg/mL、CWW, 4.8 mg/mL、

CAW, 2.48 mg/mL、BAW, 1.33mg/mL、RAW, 1.94mg/mL、CWE, 1.35mg/mL、CAE, 0.88mg/mL、BAE, 1.11mg/mL、RAE, 0.93mg/mL；

其中最好的是 CAE 與 RE（SC₅₀分別為0.88 及 0.93 mg/mL）；而 Marker DNA 方面，因要讓 Marker DNA 斷裂之 UVB 劑量較高，所以萃取物在抑制 Marker DNA 效果上，由計算出之 IC₅₀，較比較不出來優劣，唯獨 EA 層效用較高，可由軟體推算出 SC₅₀，如表4-6 所示：CWE 為 7.68 mg/mL，CAE 為 5.34 mg/mL，BAE 為 3.72 mg/mL，RAE 為 0.026 mg/mL，

其餘則推算不出SC₅₀的濃度，只能用原始圖檔評估判斷其保護能力。

而圖 4-10 至圖 4-21 為萃取物對 pUC119 DNA 保護之電泳膠片原始圖

圖4-10 蔓越莓水粗萃（CWC）－保護 pUC DNA 電泳圖

圖 4-11 蔓越莓乙醇粗萃（CAC）－保護 pUC119 DNA 電泳圖

圖4-12 藍莓乙醇粗萃（BAC）－保護 pUC119 DNA 電泳圖

圖4-13 覆盆子乙醇粗萃（RAC）－保護 pUC119 DNA 電泳圖 4.5 3 1.5 0.3 0.15 (mg/mL)

6 4.5 3 1.5 0.3 0.15 (mg/mL)

Liner form Liner form

Liner form Supercoil form

Supercoil form

untreated H2O2 UVB H2O2+UVB

untreated H2O2 UVB H2O2+UVB 6 4.5 3 1.5 0.75 0.3 0.15 0.03 (mg/mL)

untreated H2O2 UVB H2O2+UVB 6 4.5 3 1.5 0.3 0.15 (mg/mL)

untreated H2O2 UVB H2O2+UVB

Liner form Supercoil form

圖 4-14 蔓越莓水萃水層（CWW）－保護 pUC119 DNA 電泳圖

圖4-15 蔓越莓乙醇萃水層（CAW）－保護 pUC119 DNA 電泳圖

圖4-16 藍莓水層（BAW）－保護 pUC119 DNA 電泳圖

圖4-17 覆盆子水層（RAW）－保護 pUC119 DNA 電泳圖

Liner form

Liner form Supercoil form

Supercoil form

untreated H2O2 UVB H2O2+UVB 6 4.5 3 1.5 0.3 0.15 (mg/mL)

圖4-18 蔓越莓水萃 EA 層（CWE）－保護 pUC119 DNA 電泳圖

圖4-19 蔓越莓乙醇萃 EA 層（CAE）－保護 pPUC119 DNA 電泳圖

圖4-20 藍莓 EA 層（BAE）－保護 pUC119 DNA 電泳圖

圖4-21 覆盆子 EA 層（RAE）－保護 pUC119 DNA 電泳圖

Liner form

Liner form Supercoil form

Supercoil form Supercoil form

Supercoil form