第三章 結果
3.5 餵食 PCP 於動物氣喘模式試驗
本動物氣喘模式試驗分兩次，第一次於小鼠致敏後測試餵食 PCP 100 µg/day 及 200 µg/day 之免疫反應結果，第二次則測試餵食 PCP 50 µg/day 及 100 µg/day 之結果，每組試驗之 BALB/c 鼠皆有五隻，於氣喘動物模式 (圖十一) 第 30 天採血及犧牲後抽取小鼠的支氣管肺泡灌洗液 (BALF)，以測定 BALF 中嗜 酸性球數、IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ 濃度及血清之 OVA 特異性 IgE 與 IgG2a 含量，並取小鼠肺部做蠟切片及 H & E 染色，以觀察其細胞浸潤、增厚的情形。
3.5.1 BALF 嗜酸性球及 TH2 細胞素
在 BALF 每毫升嗜酸性球數測定結果中，OVA 控制組的嗜酸性球數皆為最 高，表示本次致敏結果正常。而在餵食不同 PCP 濃度的每毫升嗜酸性球數結果 中，由低到高分別為餵食 200 µg/day PCP (1.44×105 cells/mL)、100 µg/day PCP (第 一次試驗 1.46×105 cells/mL 及第二次試驗 1.4×105 cells/mL)、50 µg/day PCP (2.1×105 cells/mL)，但餵食 PCP 200 µg/day 組與 100 µg/day 組的嗜酸性球數無 顯著差異 (圖十二)，因此餵食 PCP 皆可降低嗜酸性球之衍生情形，而每日餵食 至少 100 µg 之 PCP 可減少較多的嗜酸性球數量。
在 BALF 之 TH2 細胞素 IL-4 分泌濃度結果測定中，餵食 50 及 100 µg/day PCP 的 IL-4 濃度無差異 (PCP 50 µg/day：30.7 pg/mL；PCP 100 µg/day：
23.2 pg/mL)，但 PCP 餵食濃度提高至 200 µg/day 後，會使其 BALF 中分泌之 IL-4 濃度抑制情形減少 (圖十三，上)，不過在餵食不同濃度之 PCP 處理組中，
與 OVA 對照組相比皆可減少其 IL-4 的分泌濃度。
於 IL-5 細胞素的 ELISA 結果中，以餵食 PCP 100 µg/day 之組別抑制 IL-5 細胞素分泌效果為佳，餵食 50 µg/day 及 200 µg/day PCP 的 BALF 中 IL-5 分
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泌濃度則與 OVA 組小鼠無顯著差異 (圖十三，中)，由於 TH2 細胞分泌之 IL-5 細胞素與嗜酸性球衍生有相關，但 200 µg/day 之嗜酸性球數卻不像 50 µg/day 那樣高，此結果會於第四章中討論。
而在 IL-13 分泌量上，也是以餵食 PCP 100 µg/day 的抑制效果最好 (圖十 三，下)，餵食 PCP 50 µg/day 也有抑制 IL-13 分泌的結果，但仍以餵食 100 µg/day PCP 之抑制能力為佳，200 µg/day PCP 之 IL-13 濃度則與 OVA 組無顯 著差異。由於 TH2 細胞分泌之 IL-4 及 IL-13 會促使 B 細胞分泌 IgE (Humbert et al., 1999)，故推測餵食 100 µg/day PCP 之 OVA 特異性 IgE 分泌量受到抑制，
其次則為餵食 50 及 200 µg/day PCP 之組別。
3.5.2 BALF TH 1 細胞素
在 BALF 中之 TH1 細胞素 IFN-γ 分泌量上，以每日餵食 100 µg PCP 之小 鼠組別有最高的 IFN-γ 分泌濃度 (約 290 pg/mL)，而餵食 50 µg/day 及 200 µg/day PCP 之 IFN-γ 濃度 (250 pg/mL and 177 pg/mL, respectively) 則與 OVA 對照組的濃度無顯著差異 (圖十四)。由於 IFN-γ 是由 TH1 細胞分化後分泌而來，
故由 BALF 之 TH1 細胞素 IFN-γ 及 TH2 細胞素 IL-4 濃度結果，可知餵食 100 µg/day PCP 的 BALB/c 小鼠 TH1 細胞分化情形較明顯，使體內的免疫反應 被導向 TH1，也較能抑制 TH2 免疫反應發生。
3.5.3 血清 OVA-specific-IgE 及 OVA-specific-IgG2a
BALB/c 小鼠血清皆於使用 blocking buffer 稀釋 100 倍後，使用 ELISA 之 方式 coating OVA 蛋白，測其血清中的 OVA 特異性 IgE (OVA-specific-IgE) 及 IgG2a (OVA-specific-IgG2a) 含量。
小鼠血清 OVA–specific IgE 之 ELISA 結果中，餵食各濃度 PCP 之處理組 的 OVA-specific-IgE 吸光值由低到高為 100 µg/day、50 µg/day、200 µg/day (OD450
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分別為 0.52、0.71、1.19)，且餵食 PCP 200 µg/day 之處理組 OVA-IgE 吸光值與 OVA 對照組吸光值 (OD450=1.0) 無顯著差異 (圖十五 A)。由於 IgE 是 B 細胞 受到 TH2 細胞素刺激後所產生的，因此於三組處理組中，以每日餵食 100 µg PCP 有較好的 IgE 抑制效果。
而在 OVA-specific IgG2a 之結果中，以餵食 PCP 100 µg/day 之吸光值 (OD450=0.83) 最高，餵食 PCP 50 µg/day (OD450=0.53) 及 200 µg/day (OD450=0.46) 處理組吸光值則與 OVA 對照組吸光值 (OD450=0.6) 無顯著差異 (圖十五 B)。因 為 IgG2a 是由 B 細胞受到 IFN-γ 刺激而釋出的免疫球蛋白，故由此可知餵食 PCP 100 µg/day 較能促使 TH1 細胞分化並分泌 IFN-γ，使 B 細胞產生 OVA 特 異性 IgG2a，並抑制了 TH2 細胞之分化及 IL-4 與 IL-13 的分泌，抑制 B 細胞 分泌 IgE 之能力也為最好的，因此證明餵食 PCP 100 µg/day 可藉由提升 TH1 細 胞分化來抑制 TH2 相關的過敏反應。
3.5.4 肺部切片 H&E 染色結果
將小鼠肺部以蠟包膜、切片並進行 H&E 染色，再於顯微鏡下觀察放大 40
倍及 200 倍的肺部組織。與 PBS 對照組的肺部切片染色結果 (圖十六 A) 相比 之下，OVA 正對照組的肺部組織周圍有發炎性細胞聚集，且組織增厚情形相當明 顯 (圖十六 B)，代表發炎性細胞有在呼吸道平滑肌組織周圍增殖，並有細胞浸潤 現象，而在 PCP (100 µg/day) 餵食組則可減少細胞增厚及發炎細胞浸潤情形 (圖 十六 C)，故每日餵食 100 µg PCP 可抑制發炎細胞聚集於致敏小鼠之肺部組織。
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