台灣產野甘草( Scoparia dulcis L. )之生藥學研究; Pharmacognostical studies on Scoparia dulcis L. in Taiwan

全文

(1)中國醫藥大學. 藥物化學研究所. 碩士論文. 指導教授：邱泰惠. 教. 授. 共同指導教授：李昭瑩. 副教授. 台灣產野甘草( Scoparia dulcis L. )之生藥學研究. Pharmacognostical studies on Scoparia dulcis L. in Taiwan. 研究生：蔡. 仁. 傑. Tsai Jen-Chieh. 中. 華. 民. 國. 九十五. 年. 六. 月.

(2) 目錄略字解 ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥Ⅱ 圖目錄 ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥Ⅲ 表目錄 ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥Ⅴ 中文摘要‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥Ⅵ 英文摘要‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥Ⅶ 謝辭‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥Ⅸ 第一章序言…‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥1 第二章總論‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥3 第一節野甘草屬(Scoparia)植物的本草學考察‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥3 第二節野甘草屬(Scoparia)植物的藥用植物學考察‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥4 第三節台灣產野甘草屬(Scoparia)植物的藥用植物學考察‥‥‥‥‥‥‥8 第四節野甘草屬(Scoparia)植物的生藥學文獻考察‥‥‥‥‥‥‥‥‥13 第五節野甘草屬(Scoparia)植物的化學成分考察…‥‥‥‥‥‥‥‥‥16 第六節野甘草屬(Scoparia)植物的藥理作用考察‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥25 第三章材料與方法‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥31 第一節實驗材料、試藥與儀器‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥31 第二節野甘草(Scoparia dulcis)植物的形態鑑定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥38 第三節野甘草(Scoparia dulcis)植物的生藥組織學研究‥‥‥‥‥‥‥40 第四節野甘草(Scoparia dulcis)植物的成分分離‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥41 第五節野甘草(Scoparia dulcis)植物中木犀草素(luteolin)的定量‥‥49 第六節野甘草(Scoparia dulcis)植物的指紋圖譜研究‥‥‥‥‥‥‥‥55 第四章實驗結果與討論‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥59 第一節野甘草(Scoparia dulcis)植物的形態鑑定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥59 第二節野甘草(Scoparia dulcis)植物的生藥組織學研究‥‥‥‥‥‥‥67 第三節野甘草(Scoparia dulcis)植物的成分分離‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥69 第四節野甘草(Scoparia dulcis)植物中木犀草素(luteolin)的定量‥‥82 第五節野甘草(Scoparia dulcis)植物的指紋圖譜研究‥‥‥‥‥‥‥‥93 第五章結論‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥103 第一節野甘草(Scoparia dulcis)植物的形態鑑定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥103 第二節野甘草(Scoparia dulcis)植物的生藥組織學研究‥‥‥‥‥‥‥103 第三節野甘草(Scoparia dulcis)植物的成分分離‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥104 第四節野甘草(Scoparia dulcis)植物中木犀草素(luteolin)的定量‥‥104 第五節野甘草(Scoparia dulcis)植物的指紋圖譜研究‥‥‥‥‥‥‥‥105 參考文獻‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥107 附錄‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥116. I.

(3) 略字解略號. 中文名. 術語. bf. 韌皮纖維. bast fiber ；phloem fiber. cu. 角質層. cuticular layer. cx. 皮層. cortex. ep. 表皮. epiderims. L.S.. 縱切. longitudinal section. m. 髓部. pith. mr. 髓線；射髓；射線. medullary ray. ph. 篩部. phloem. R.L.S.. 放射性縱切；徑縱切. radial longitudinal section. T.L.S.. 切線性縱切；弦縱切. tangential longitudinal section. TNM. 國立自然科學博物館植物標本館. Herbarium of National Museum of Natural Science. v. 導管. vessel. X.S.. 橫切. cross section. II.

(4) 圖目錄圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖圖. 1：野甘草之手繪形態圖(據 Flora of Taiwan)‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥11 2：S. dulcis 中兩種 chemotype 中時間與細胞生長及 SA 含量之關係‥‥13 3：S. dulcis 中時間與細胞生長及 SDY 含量之關係‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥14 4：SPEt 效果之比較‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ 26 5：正常鼠與實驗鼠不同體重之 SPEt 效果比較‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥26 6：SDB 對 H+,K+- ATP 酶的效果‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27 7：野甘草全草之抽提流程圖 ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥42 8：HPLC 中標準品(luteolin)與內部標準品(piroxicam)位置‥‥‥‥‥‥49 9：Luteolin 標準品之回歸曲線‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥53 10：野甘草萃取物之 HPLC 分析圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥53 11：野甘草之 HPLC 層析圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥55 12：野甘草之各部形態圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥59 13：野甘草葉部放大圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥60 14：野甘草花的放大圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥61 15：野甘草果的形態圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥62 16：野甘草果皮電子顯微鏡觀察圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥63 17：野甘草花粉手繪圖 (據黃增泉，台灣植物花粉圖誌) ‥‥‥‥‥‥‥64 18：野甘草花粉形態圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥65 19：野甘草種子之電子顯微鏡觀測圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥66 20：野甘草之組織切片圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥68 21：Glutinol 結構圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥69 22：Glutinol 質譜斷裂式‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥70 23：Friedelin 結構圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥72 24：Friedelin 質譜斷裂式‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥73 25：Betulinic acid 結構圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥75 26：Betulinic acid 質譜斷裂式‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥76 27：Coixol 結構圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥78 28：Coixol 質譜斷裂式‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥78 29：Luteolin 結構圖 ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥80 30：Luteolin 之 UV 圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥84 31：野甘草之 HPLC 層析圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥85 32：Luteolin 標準品與內部標準品 ( I.S. ) 之 HPLC 層析圖‥‥‥‥‥87 33：24 小時內 luteolin 在 methanol 中的穩定性‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥88 34：野甘草中各部位 luteolin 含量比較‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥92 35：野甘草之 HPLC 指紋圖譜‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥94 36：高等植物 ribosomal DNA 結構圖‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥95 III.

(5) 圖圖圖圖. 37：野甘草之 PCR 引子…‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥95 38：台灣產野甘草之序列‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥96 39：台灣產野甘草與澳洲產野甘草之比對。1.台灣產，2.澳洲產‥‥‥‥97 40：許多高等植物 rDNA 的 ITS1 之序列保留區與野甘草之相對應序列比較‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥102. IV.

(6) 表目錄表 1：SDX 型癒合組織中光照週期影響細胞生長及 SDY 含量之效果‥‥‥‥‥14 表 2：餵食不同劑量之血糖變化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥25 表 3：餵食不同劑量S. dulcis水萃物給予正常與實驗鼠，觀察15天內血糖變化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥25 表 4：提取液對清醒大白鼠動脈血壓之影響‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥29 表 5：採集地點、時間、經緯度、採集編號‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥31 表 6：移動相條件‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥49 表 7：24 小時內穩定性測試‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥50 表 8：回收率試驗‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥51 表 9：Luteolin 之 intraday 分析‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥51 表 10：Luteolin之Interday分析‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥52 表 11：Luteolin 與 I.S.經 HPLC 所得之積分面積‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥52 表 12：化合物 H-1 碳譜數據與文獻碳譜數據比對表‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥71 表 13：化合物 H-2 碳譜數據與文獻碳譜數據比對表‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥74 表 14：化合物 C-3 碳譜數據與文獻碳譜數據比對表‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥77 表 15：化合物 C-4 碳譜數據與文獻碳譜數據比對表‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥79 表 16：化合物 E-5 碳譜數據與文獻碳譜數據比對表‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥81 表 17：不同管柱不同條件下 luteolin 的滯留時間‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥83 表 18：HPLC 不同移動相條件之比較‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥84 表 19：不同內部標準品之滯留時間比較‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥86 表 20：HPLC 移動相之條件‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥87 表 21：Luteolin 積分面積之 RSD 值‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥89 表 22：野甘草植物 luteolin 含量‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥90 表 23：野甘草中各部位每克中 luteolin 含量‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥91 表 24：野甘草各 peak 之滯留時間‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥93 表 25：野甘草在HPLC中各peak高度與 luteolin peak之高度比‥‥‥‥‥‥‥93 表 26：野甘草 ITS 區域中各序列之長度與 G+C 百分比‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥100 表 27：野甘草rDNA之ITS各區長度與G+C百分比及與其他高等植物之比較‥‥101. V.

(7) 中文摘要野甘草屬(Scoparia)，為玄參科(Scrophulariaceae)植物，多生長於熱帶及亞熱帶之低海拔地區。野甘草屬在美洲熱帶地區約有 20 種，而在台灣只有一種，即為野甘草(Scoparia dulcis)，具有清熱解毒、利尿消腫的功效。現代藥理研究亦證明其有抗病毒、抗腫瘤、降血糖及降血壓等作用。但在民間用藥常有誤用情形，故其基原有必要確立。本研究針對台灣產野甘草屬進行其外部形態鑑定 (包含花、葉、果實、種子、花粉等)及其生藥組織切片研究，確定其植物特徵，可作為植物基原鑑定的參考。成分分離部分，野甘草之乾燥全草之甲醇粗抽物經分離純化及結構鑑定後，自野甘草分離出之成分有 glutinol (H-1)、friedelin (H-2)、betulinic acid (C-3) 及 6-Methoxybenzoxazolinone (C-4)、luteolin(E-5)等成分，均為已知成分。針對野甘草所含 luteolin 進行定量研究，發現含量約在 0.00197 ~ 0.00563 % 之間，藥用部位以果實部分所含的 luteolin 含量最高。本實驗所確立的定量方法，其敏感度、重現性、精密度、回收率均好，可作為評價野甘草植物的一種方法。在建構指紋圖譜方面，發現在所選的 10 個波峰的高度比，可以作為野甘草屬鑑定上的參考。在 PCR 研究方面，以聚合酶連鎖反應擴增部份核糖體去氧核糖核酸區域之 ITS1、5.8S 及 ITS2 產物，複製產物長為 821 bp。將此序列送入基因庫進行比對，證實此 DNA 片段為 rDNA 之 ITS 區域，其中有 142 bp 屬於 18S rDNA 基因 3’端，66 bp 屬於 26S rDNA 基因 5’端，真正屬於 ITS 區域的序列有 613 bp，此區包含 ITS1、 5.8S rDNA 基因與 ITS2 等三區，其長度分別為 196、164 及 253 bp， G+C 百分比分別為 56、62 及 65 %，此結果將有助於野甘草屬之植物鑑定。. VI.

(8) Abstract The genus Scoparia (Scrophulariaceae) is distributed in low altitude area of tropics and subtropics and has about 20 species in Americas tropic area, but only has one species in Taiwan.. This species is Scoparia. dulcis L.. According to the reports, It has effects of heat- clearing, clearing away toxin, inducing diuretic and subduing swelling.. Modern. pharmacological studies provides evidence that it can be used to anti-virus, anti-tumor, anti-hypertension and anti- hyperglycemia.. Because it was. often misused, it is a necessary to build up a method to determine its origin. We appraise the morphology (flowers, fruits, seeds and pollens) and histological anatomy (leaves and stems).. This result can provide an useful. method to identify Scoparia plants. The methanolic extract of dry entire plant of S. dulcis was partitioned and separated by chromatographic methods.. Four known compounds were. isolated, included glutinol (H-1), friedelin (H-2), betulinic acid (C-3), 6-Methoxybenzoxazolinone (C-4) and luteolin(E-5). We set up a quantitative method of HPLC to determine the quantity of luteolin . This method has a high degree of sensitivity, reproducibility, precision and recovery rate. The result shows that the luteolin content of S.dulcis is 0.00197 ~ 0.00563 % and is the highest in the fruits than other parts. Analyse the peak height of S. dulcis. described above by HPLC method.. We discovered that the peak height ratio of the chosen 10 peaks, it can distinguish S. dulcis successfully. The entire internal transcribed spacer（ITS）region between 18S and 26S ribosomal DNA of S. dulcis is amplified by polymerase chain reaction VII.

(9) （PCR）.. The length of PCR product was 821 bp.. Comparing the obtained. sequence with the sequence of ITS from other higher plant species showed that the cloned sequence contained 66 bp of 26S rDNA, ITS region, and 142 bp of 18S rDNA. The length of ITS region was 613 bp, including 196 bp of ITS1,164 bp of 5.8S rDNA, and 253 bp of ITS2.. The G+C contents of ITS1,. 5.8S rDNA and ITS2 regions were 56 %, 62 % and 65 %, respectively. It can provide a clear and definite evidence to identify Scoparia species.. VIII.

(10) 謝辭本論文承蒙業師邱泰惠教授及李昭瑩副教授之指導與教誨，方得以順利完成，由衷感謝，永誌難忘。感謝口試委員邱少婷副教授對於論文審查，惠賜寶貴意見，使論文得以更加完善，謹致衷心謝枕。研究期間蒙黃順爵助理教授、黃太鴻助理教授鼎力相助，對於實驗技術及儀器使用，均不吝指導，點滴在心，不勝感激。並感謝廖江川助理教授於植物採集及辨識上的協助。感謝所內黃麗嬌所長、郭盛助教授、陳勝智教授、林宗平副教授、連金城副教授及藥學系陳甘霖副教授於課程上的指導與指教。感謝所內學長姐李健源、黃元照、陳華鑫、劉晉育、廖昌亮、中藥所賴尚志，同學郭瓊文、林慧怡、林昭蓉、劉怡伶、蘇怡芳、葉尚柏、林凱鵬、詹淑玲、黃俊龍、宋秉欣、湯先佑、賴珮妘、曹嘉蕙，以及學弟張肇元、藥學所曾懷慶、陳弘偉、藥學系江俊達，給予實驗上及生活上的協助，在此致上最高謝意。謹以此論文獻給我敬愛的父母親及家人，以及一路支持我的育戎，在我求學過程中，無怨無悔的支持與照顧，讓我無後顧之憂，可以全力以赴，使學業得以順利完成，再次致上十二萬分的感謝。. IX.

(11) 第一章. 序言. 野甘草(Scoparia dulcis L.)，又名甜珠草 1，是玄參科(Scrophulariaceae) 野甘草屬(Scoparia)的植物，多生長於熱帶及亞熱帶之低海拔地區。野甘草屬在美洲熱帶地區約有 20 種，而在台灣只有一種 2。野甘草原產於美洲，現今則廣佈於世界，在台灣則於平原、路旁、耕地及低海拔山坡地皆可發現蹤跡，為常見植物。野甘草為一種民間藥，全草具有清熱解毒，利尿消腫的功效。用於治療肺熱咳嗽、暑熱吐瀉、腳氣浮腫、小兒麻疹、濕疹、熱痱、高血壓和丹毒等。在世界其他地方也是很早就在醫療方面具有重要的價值。在印度，野甘草用於治療牙痛、淋病、糖尿病和胃疾病；在巴拉圭，用於治療胃疾病和肝機能障礙等 3；在巴西，用於治療支氣管炎、腸胃道障礙、昆蟲咬傷和皮膚創傷等 4。 1988 年，日本學者 Masaru Kawasaki5 等，從野甘草中分離出許多化合物，其中也包含一個黃酮類化合物—luteolin，此化合物在許多植物中均有存在，也 6 曾有文獻針對此化合物進行肝臟方面的藥理試驗，發現 luteolin 在體外抑制. 肝星狀細胞增殖及其膠原合成，作用在低濃度即顯著，使得在體內容易達到有效濃度，可能具有預防或治療肝纖維化的作用。因此，此化合物有可能是野甘草治療肝炎的有效成分。為了開發野甘草屬植物的生藥資源，本研究針對台灣產野甘草，進行植物生藥學研究；針對其植物外部形態，利用光學及電子顯微鏡觀察，包括花、果實、種子以及其花粉形態進行鑑定；內部構造的組織切片，確定其內部細胞構造及特徵；另外利用聚合酶連鎖反應( PCR )的技術，將野甘草屬植物 rDNA 的 ITS 區域加以複製，進一步分析及定序，得到其部份 DNA 的序列，整合這些基礎，定能在基原鑑定上有更高的準確度，以提供藥材鑑定及臨床研究之參考，減少誤用情形之發生。另外，在確立其植物基原之後，本研究亦針對台灣產野甘草中，前述文獻所提之肝炎有效成分—luteolin，藉由 HPLC 之方法，進行定量，以確定此化合物. 1.

(12) 在野甘草中的含量，以做為臨床醫療運用之參考。. 2.

(13) 第二章. 總論. 第一節野甘草屬(Scoparia)植物的本草學考察野甘草屬(Scoparia)植物為民間藥，在歷代本草文獻中並無特別記載，但在一些地區性的文獻中有一些報導。整理如下(7,8)：《新華本草綱要》稱為〝葉上珠〞。《全國中草藥匯編》稱之〝米碎草〞，主要用於疏風止癢。治肺熱咳嗽，腸炎，痢疾，外用治痱子，皮膚濕疹。《福建藥物誌》稱之為〝豎枝珠仔草〞、〝萬粒珠〞，可以清熱利尿，治麻疹，感冒中暑，痢疾，咽喉炎，支氣管炎，腳氣，丹毒，跌打損傷。《福建民間草藥》稱為〝珠子草〞、〝香儀〞8，味甘，性平，無毒，可以解熱利尿，調中益肺。《廣西中藥誌》稱為〝假甘草〞、〝土甘草〞、〝假枸杞〞，味甘，性平，可以退熱祛風，解木薯中毒。《閩南民間草藥》稱為〝四時茶〞，《廣東中藥》稱為〝冰糖草〞、《廣西中草藥》稱為〝通花草〞、《福建中草藥》則稱之為〝節節珠〞。 1 在台灣則有〝甜珠子草〞、〝雞骨廣〞、〝金荔枝〞之名稱。. 3.

(14) 第二節野甘草屬(Scoparia)植物的藥用植物學考察一、玄參科的科特徵及分佈. 9. 草木、灌木或少有喬木。葉互生、下部對生而上部互生、或全對生、或輪生，無托葉。花序總狀、穗狀或聚傘狀，常合成圓錐花序，向心或更多離心。花常不整齊，萼片 5，少有 4 基數；花冠 4~5 裂，裂片多少不等或作二唇形；雄蕊常 4 枚，而有一枚退化，少有 2~5 枚或更多，花葯 1~2 室，葯室分離或多少匯合，花盤常存在，環狀、杯狀或小而似腺；子房 2 室，極少僅有一室；花柱簡單，柱頭頭狀或 2 裂或 2 片狀；胚珠多數，少有各室 2 枚，倒生或橫生。果為蒴果，少有漿果狀，具生於 1 游離的中軸上或著生於果片邊緣的胎座上；種子細小，有時具翅或有網狀種皮，臍點側生或在腹面，胚乳肉質或缺少；胚伸直或彎曲。約 200 屬 3000 種，廣佈全球各地。中國玄參科有 56 屬，種類繁多。. 二、中國產玄參科分屬之檢索表. 9. 1. 花冠上方的 2 個裂片或上唇在花蕾中處於外方，包裹下方 3 個裂片或下唇。…………………………1.玄參亞科 Scrophularioideae 2. 葉均互生，花冠無管或僅有極短之管；有性雄蕊 5 枚或 4 枚；花序簡單而向心。……………………………………………………… ………………………………………………………………………1.毛蕊花族 Verbasceae 1.毛蕊花屬 Verbascum L. (Celsia L.) 2. 葉至少下部者對生，極少互生，花冠有明顯之管(在野甘草屬中幾無管)；有性雄蕊 4 枚或 2 枚；花序主要為聚傘狀(離心)，多合為複花序。 3. 蒴果在室背或室間以一直線開裂，其隔膜以蒴果壁上碎落或不規則破裂；花冠不成囊狀，亦無距。 4. 喬木或灌木；萼齒革質而厚，有星毛，柱頭微膨大，端凹陷。……………………………………………… 2.泡桐族 Paulownieae 5. 蒴果室背開裂；萼具 5 齒。 6. 灌木：花葯有鬚毛；花序腋生，無葉，或頂生，或在一種中莖生；花梗有小苞片。…………………………2.來江藤屬 Brandisia 6. 喬木：花葯無鬚毛，花成腋生聚傘，但常因苞葉脫落而成頂生圓錐花序。………………………………………3.泡桐屬 Paulownia 5. 蒴果室間開裂；萼具 3-4 齒。………………………………………………………………………………………… 4.美麗桐屬 Wightia. 4. 草本；萼齒草質或膜質，無星毛。 7. 柱頭結合，多少頭狀；花葯匯合成一室，橫生，葯隔及花絲頂端膨大；退化雄蕊著生於上方 2 個花冠裂片之間；花冠上唇常長於下唇。……………………………………………………………………………………… 3.玄參族 Scrophularieae (Cheloneae) 8. 莖明顯，高超過 10 釐米，花多成聚傘圓錐花序，少有單生，有明顯之梗；花冠筒短。……………5.玄參屬 Scrophularia L. 8. 莖極短，貼地而生，高不超過 10 釐米，花幾無梗，簇升葉腋，筒細長。…………………………………6.藏玄參屬 Oreosolen 7. 柱頭分離，扁平而片狀(7、8、25 等 3 屬除外)，花葯不為上述，退化雄蕊不生於上方 2 個裂片之間；花冠上唇常短於下唇。……… ……………………………………………………………………………………………………………………4.水八角族 Gratioleae 9. 葯室 2，分離，植物有莖 10. 葯室併行，花梗有時具 2 小苞。 11. 花冠輻狀，白色，內方全面密生長毛，其裂片甚長于管部，上方 2 裂片完全結合為一，葯與柱頭遠深花外，蒴果在室間與室背作相等的 4 裂。………………………………………………………………………………………7.野甘草屬 Scoparia L. 11. 花管多少有較長的管，內方非全面有長毛；花葯與柱頭不伸出花外。 12. 葯室靠近；葉無柄，全緣或幾全緣，均對生。 13. 萼基有兩小苞；萼齒不相等，分離；蒴果室背與室間均開裂；葉均發達 14. 雄蕊 5 枚；萼齒很不相等，後方 1 枚最大而心臟型，側方 2 枚最狹而在內。…………………… 8.假馬齒莧屬 Bacopa 14. 雄蕊僅 2 枚發育；萼齒相等或略不同。…………………………………………………………9.水八角屬 Gratiola L.. 4.

(15) 13. 萼基無小苞；萼齒均相等，基部結合；蒴果僅室間開裂；葉僅下部者發達，中上部者小或鱗片狀。 15. 莖肉質，基部分枝，直立；花絲頂端直，花葯無毛。……………………………………………10.虻眼屬 Dopatricum 15. 莖非肉質，上升或傾臥；花絲頂端扭曲；花葯有毛。………………………………………………11.津番椒屬 Deinostemma 12. 葯室為一葯隔的短臂所分隔；葉有柄至抱莖，有細齒或兩回羽狀分裂，對生或輪生。 16. 蒴果室背開裂為兩瓣。……………………………………………………………………………12. 鐘萼草屬 Lindenbergia 16. 蒴果 4 瓣裂或室間開裂為兩瓣，每瓣又作兩淺裂。 17. 萼齒不相等；雄蕊 4 枚，前方 2 枚的兩個葯室中有一個或兩個均小而中空，和有時後方的 2 枚雄蕊的 2 個葯室中有一個小而中空。…………………………………………………………………………………………13.毛麝香屬 Adeaosma 17. 萼齒相等或僅稍稍不等；雄蕊 4 枚完全。…………………………………………………………14.石龍尾屬 Limnophila 10. 葯室叉分；花梗無小苞。 18. 果不裂，外皮薄肉質；植物莖極短，花從葉叢中發出。…………………………………………15. 肉果草屬 Lancea 18. 蒴果開裂；植株有明顯之莖。 19. 蒴果室間開裂；前方一對花絲自花冠喉部發出，其下部與花管結合。 20. 萼有 4 齒，上下兩齒大，包於外面，側齒狹小而在內。……………………………………16.苦玄參屬 Pieria 20. 萼具 3 齒或 5 齒，或為兩唇狀。 21. 萼具 3 小齒，並生有 3 翅，翅寬而成半圓形。………………………………………………17.三翅萼屬 Logazpia 21. 萼具 5 齒 22. 萼無翅，亦無明顯之稜；花冠小，不超過 10 毫米；子房上部無粗毛。…………………18.母草屬 Lindernia 22. 萼有明顯之翅或稜；花冠大，超過 10 毫米；子房上部生有粗毛。…………………19.蝴蝶草屬 Torenia L. 19. 蒴果室背開裂；前方一對花絲在花管深處即分離。 23. 植物柔弱，經常傾臥或有匍枝，上部不分枝，葉正常。 24. 萼有高凸之稜 5 條，結合至 3/4 以上，頂端幾乎截頭，其細小之齒遠距；花冠上唇僅略短於下唇；苞片葉狀。…………………………………………………………………………………20.溝酸漿屬 Mimulus L. 24. 萼無稜，有脈 10 條，最多結合至一半；花冠上唇甚短於下唇；苞片針型。…………21.通泉草屬 Mazus 23. 植物體較堅挺，上部分枝稠密；葉不發達。……………………………………………22.野胡麻屬 Dodartia 9. 葯室完全匯合而開裂為一室；植物無莖。 25. 蒴果上下均為二室，室背二裂；葉對生，無柄。……………………………………………………23.小果草屬 Microcarpaea 25. 蒴果下部二室，上端處為一室，室背二裂；葉有長柄，基生或束生在匍枝上，少有互生。……… 24.水茫草屬 Limosella L. 3. 蒴果頂端不以完整的果瓣開裂，而以孔或多變的周面孔開裂；花冠成囊狀或有距。………………………… 5.龍頭花族 Antirrhineae 蒴果之室相等或不相等，後方 1 室長不裂或 2 室均以 1 至多數之孔開裂。………………………………………… 25.柳穿魚屬 Linaria 1. 花冠下方 3 個裂片或下唇在花蕾中處於外方(僅兔耳草屬例外)。………………………………………………2.鼻花亞科 Rhynantboideae 26. 花冠上方 2 個裂片平坦或僅微微弓曲，不作明顯的盔狀或兜狀。 27. 花冠裂片的側方 2 枚或其中 1 枚在蕾中處於外方；葯室多頂端匯合而下部分離，極少全部匯合，2 枚均正常發達；非寄生或半寄生植物。 28. 雄蕊明顯 2 強，內藏，絕不超出花冠；花冠筒部發達伸長。………………………………………………6.毛地黃族 Digitalieae 29. 葉對生，條狀披針形，僅有極少數幾乎看不見的細齒；萼膜質，半透明，有高凸之肋，完全包裹花冠之管。…………………… ……………………………………………………………………………………………………………26.蝦子草屬 Mimulicalyx 29. 葉互生，形較寬，齒明顯；萼非膜質而半透明，花管遠遠生出萼外。 30. 花冠顯二唇狀，上唇甚短於下唇，不裂，寬凹頭或二淺裂，下唇中裂有時囊狀膨大；蒴果室間開裂。……………………… ……………………………………………………………………………………………………………27.毛地黃屬 Digitalis 30. 花冠上下唇近於相等，上唇明顯二裂，下唇絕不膨大；蒴果室背開裂。 31. 萼齒全緣，或僅偶有淺裂；體多分泌細胞。……………………………………………………………28.地黃屬 Rehmannia 31. 萼齒均 3 裂或三叉戟狀；體無分泌細胞。………………………………………………………29.呆白菜屬 Triaenophora 28. 雄蕊 2 枚，或 4 枚等長(僅在胡黃連屬中有一個種，雄蕊明顯作 2 強，在此情況下，其前方一對必然明顯伸出花冠之外)；花冠有時幾無管，很少管長過於其裂片。 32. 蒴果肉質，紅色，遲遲在頂部室間開裂，並微作室背開裂；葉強烈二形，在主莖上者卵形，對生，在分枝上者捲為針狀，密集似松葉；莖的外皮剝落。………………………………………………………………………7.鞭打繡球族 Hemiphragmeae ………………………………………………………………………………………………………… 30.鞭打繡球屬 Hemiphragma 32. 蒴果乾燥，作一般開裂；葉非二形；莖皮不剝落。……………………………………………………8.婆婆納族 Veroniceae 33. 雄蕊 4 枚。 34. 花冠裂片 5 枚；花輻射對稱，單生葉腋，其花梗細長，在花後扭捲；葉互生於匍匐莖上，有長柄，羽狀深裂。……………… ………………………………………………………………………………………………………31.幌菊屬 Elliaiophyllum 34. 花冠裂片 4 枚；花左右對稱，集成頂生穗狀花序，無梗；葉成基生蓮座狀之叢，不裂而多少匙形。…………………………… …………………………………………………………………………………………………………32.胡黃蓮屬 Picrorhiza 33. 雄蕊 2 枚。 35. 花冠不作強二唇狀；果為開裂之蒴果；花萼之齒不結合，非膜質或透明；葉多莖生。 36. 萼齒 5 枚，幾相等或極少後方 1 枚僅其餘的半長。 37. 雄蕊多少伸出於花外；柱頭不擴大；萼齒近於相等；根常被黃色茸毛。…………………33.腹水草屬 Veronieastrum 37. 雄蕊內藏；柱頭棒狀；萼齒裂片不相等，後方 1 枚只及其餘的半長。………………………34.細穗玄參屬 Scrofella 36. 萼齒 4 枚，如有 5 枚則後方 1 枚已退化的狀態存在，遠遠小於其餘 4 枚；花冠簡短管狀或極短而使花冠成輻狀。… …………………………………………………………………………………………………………35.婆婆納屬 Veronica 35. 花冠明顯二唇狀，果為核果狀或不裂；萼膜質或透明，常結合，前方開裂至基部，後方則開裂 1/3 至基部，成二裂片狀或後方僅淺裂而成佛焰包狀。葉多基生，常作蓮座狀。………………………………………36.兔耳草屬 Lagotis J.. 5.

(16) 27. 花冠裂片平展，後方 2 枚處於內面，前方 1 枚處於最外；葯室完全分離，有時一室退化；多為寄生或半寄生植物。…………… ………………………………………………………………………………………………………………………9.黑草族 Buchnerieae 38. 葯 2 室，其室相等，或其中一室狹小；花冠鐘形，其擴張之喉部內面無毛或幾無毛；萼寬鐘形。 39. 蒴果室間與室背均開裂；心皮頂部分離。 40. 葯室相等。……………………………………………………………………………………………37.鐘山草屬 Petitmenginia 40. 葯室中有一個無葯或多少退化。……………………………………………………………………38.胡麻草屬 Centranthera 39. 蒴果僅室背開裂，其心皮頂部不分離。 41. 花葯之室分離，相等而並行。 42. 種子很多；花萼包裹花冠筒，花後膨大；葉卵狀披針形，全緣，有齒或基部亞缺刻狀，基出 3 脈，花梗上有小苞對。…… ………………………………………………………………………………………………………………39.黑蒴屬 Melaema 42. 種子很少，每室僅有 2 枚，或因敗育而僅餘 1 枚；花萼包裹花冠筒的半長，花後不膨大；葉基僅有單脈；花梗無小苞。 ………………………………………………………………………………………………………40.方莖草屬 Leptorhabdos 41. 花葯 2 枚，均成對粘連，葯室中有一室有性，另一室小而有柄，中空；花梗上有小苞片一對。……41.短冠草屬 Sopubia 38. 葯因一室敗育而僅存一室；花高腳碟狀，其狹小之喉部內面有毛；萼管狀鐘形。 43. 花冠筒部伸直，外面無毛；萼的主脈不明顯；葉長圓形至長圓形針狀。………………………………42.黑草屬 Buchnera L. 43. 花冠筒部在近端處下彎，外面有毛；萼的主脈高凸成脊；葉線狀披針形或鑽形。………………………43.獨腳金屬 Striga 26. 花冠上方裂片頂部明顯弓曲，成一盔瓣，包裹其花葯(僅在 50 屬中不很弓曲)；花葯常連著；雄蕊 4 個，二強；多為寄生或半寄生植物。…………………………………………………………………………………………………………………10.鼻花族 Rhinantheae 44. 葯室不等或一室退化。 45. 萼管狀，側面壓扁，4 裂，深度不等，前後方較深；花冠下唇裂片平展。…………………………… 44.火焰草屬 Castilleja 45. 萼管狀鐘形，均等 4 裂，前方 2 齒稍短；花冠下唇裂片頂端多少成兜狀。……………………………… 45.直果草屬 Orthocarpus 44. 葯室相等。 46. 果室含 1~2 枚種子；無小苞；葉對生；花冠盔瓣壓扁。……………………………………………………46.山羅花屬 Melampyrum 46. 果室中含有多數種子。 47. 萼下無小苞。 48. 花冠的盔瓣具內捲之緣。 49. 種子有網紋；葉羽狀開裂。……………………………………………………………………47.松蒿屬 Phtheirospermum 49. 種子有網紋；葉全緣或掌狀開裂。 50. 花梗極短或無；上部之花作穗狀排列。……………………………………………………48.小米草屬 Euphrasia L. 50. 花梗極細長；花作疏總狀排列。………………………………………………………………49.臍草屬 Omphalothrix 48. 花冠的盔瓣邊緣不折疊或僅下半部稍稍摺疊，全緣或有齒。 51. 花冠上唇幾不作盔瓣狀，幾乎伸直；深裂過半；萼齒 5 枚，後方 1 枚較小。……………50.五齒萼屬 Pseudobartsua 51. 花冠上唇強烈弓曲。 52. 萼具 4 齒；蒴果球形至長圓形，不偏斜。 53. 萼鐘形，不囊狀膨大，均等 4 裂；種子橢圓形。…………………………………………51.療齒草屬 Odontites 53. 萼膨大成囊狀，壓扁，僅後方裂得較深，其餘淺裂；種子扁平。…………………………52.鼻花屬 Rhinanthue 52. 萼具 2~5 齒；蒴果在大部種類中偏斜。………………………………………………………53 馬先蒿屬 Pedicularis 47. 萼下有小苞一對。 54. 莖在基部即生尋常葉。 55. 萼卵形而大，具 5 脈；葉全緣或有齒。……………………………………………………54.翅莖草屬 Pterygiella 55. 萼細長，管狀，具 10 脈；葉羽狀開裂。……………………………………………………55.陰行草屬 Siphonostegia 54. 莖基部生鱗片狀葉。 56. 蒴果 2 室均開裂，果瓣不反捲。………………………………………………………………56.大黃花屬 Cymbaria L. 56. 蒴果僅背面開裂，果瓣強烈反捲；種子多數。………………………………………………57.鹿茸草屬 Monochasma. 三、野甘草屬之特徵與分佈. 9. 多枝草木或小灌木。葉對生或輪生，全緣或有齒，常有腺點。花腋生，具細梗，單生或常成對，萼 4~5 裂，裂片覆瓦狀，卵形或披針形。花冠幾無管而近乎輻狀，喉部生有密毛，裂片 4 枚，覆瓦狀，在蕾中時後方一片處於外方，略較其他 3 片為寬；雄蕊 4 枚，幾等長，葯室分離，併行或 2 分；子房球形，內含多. 6.

(17) 數胚珠，花柱頂生稍稍膨大。蒴果球形或卵圓形，室間開裂，果瓣薄，緣內卷；種子小，倒卵圓形，有稜角，種皮貼生，有蜂窩狀紋。分佈於墨西哥和南美洲，其中有一種分佈於全球熱帶。中國僅產一種。. 四、中國產野甘草屬植物之形態與分佈 9 1.野甘草 Scoparia dulcis 直立草本或為半灌木狀，高可達 100 厘米，莖多分枝，枝有稜角或狹翅，無毛。葉對生或輪生，菱狀卵形至菱狀披針形，長者達 35 毫米，寬者達 15 毫米，枝上部葉較小而多，頂端鈍，基部長見狹，全緣而成短柄，前半部有齒，齒有時頗深多少缺刻狀而重出，有時近全緣，兩面無毛。花單朵或更多成對生於葉腋，花梗細，長 5~10 毫米，無毛；無小苞片，萼分生，齒 4，卵形矩圓形，長約 2 毫米，頂端有鈍點，具睫毛，花冠小，白色，直徑約 4 毫米，有極短的管，喉部生有密毛，瓣片 4，上方 1 枚稍稍較大，鈍點，而緣有嚙痕狀細齒，長約 2~3 毫米；雄蕊 4，近等長，花葯箭形，花柱挺直，柱頭截形或凹入。蒴果卵圓形至球形，直徑 2~3 毫米，室間室背均開裂，中軸胎座宿存。分佈於廣東、廣西、雲南、福建；原產於美洲熱帶，現已廣布於全球熱帶。喜生於荒地、路旁，亦偶見於山坡。. 7.

(18) 第三節台灣產野甘草屬(Scoparia)植物的藥用植物學考察界 Kingdom. 植物界. 門 Division. Plant kingdom. 被子植物門. 綱 class. Anthophyta (Magnoliophyta). 雙子葉植物綱. Dicotyledons. 合瓣花亞綱. Sympetalae. 亞綱 subclass 目 order. 管花目. 科 family. 玄參科. 屬 genus. Tubiflorae Scrophulariaceae Scoparia. 一、野甘草屬植物的特徵. (1,2,10,11). 根據 Flora of Taiwan2 的記載，野甘草屬植物為玄參科的一屬，通常為一年生或多年生草本，少有小灌木；莖為直立，具有多枝節。葉無托葉，大部分為對生或輪生，葉的邊緣全緣或鋸齒狀。花為單生或對生，腋生；花萼鐘形，裂片通常 4 到 5 裂，無苞，輻射狀，半裂或靠近基部，花瓣 4 片，約略相等，兩裂片在花蕾內，雄蕊 4 枚，幾乎相等，花葯明顯，種類簡單，柱頭頭狀花序，全緣或淺的 2 裂，蒴果開裂，2 全緣或兩裂瓣，種子外堅皮有小瘤。在美洲熱帶地區約 20 種，臺灣有 1 種。. 二、玄參科之屬檢索表. 10. 1. 木本...................................................................................................16. Paulownia 1. 草本。 2. 花冠上唇 2 裂，花苞期時包住下唇。 3. 雄蕊 2；假雄蕊極無或微小。 4. 花有柄；花冠明顯二唇化.............................................................6. Dopatrium 4. 花無柄；花冠具 5 片約略相等之花瓣裂片............................14. Microcarpaea 3. 雄蕊 4；2 孕性及 2 不孕性時，不孕雄蕊（假雄蕊）極為顯著。 5. 萼片寬度明顯不等...............................................................................2. Bacopa 8.

(19) 5. 萼片寬度相等或約略相等。 6. 柱頭單一或微裂.......................................................................20. Scrophularia 6. 柱頭明顯二裂裂，寬過花柱。 7. 花葯明顯分開............................................................................11. Limnophila 7. 花葯至少有一對相連聯。 8. 蒴果胞間開裂。 9. 花萼具三翅，翅近圓形............................................................10. Legazpia 9. 花萼具五稜或五翅。 10. 花萼筒上端約略等高.............................................................12. Lindernia 10. 花萼筒上端明顯傾斜，一邊裂至半途....................................23. Torenia 8. 蒴果苞背開裂。 11. 萼片深裂至底......................................................................4. Deinostema 11. 萼片明顯具萼筒。 12. 花聚合成頂生總狀花序............................................................13. Mazus 12. 花腋間單生............................................................................15. Mimulus 2. 花冠上唇不裂，花苞期為下唇包住。 13. 葉互生。 14. 花單生....................................................................................7. Ellisiophyllum 14. 花成總狀或穗狀花序。 15. 花序總狀；花長 4~6 cm.................................................................5. Digitalis 15. 花序穗狀；花長短於 1 cm................................................25. Veronicastrum 13. 葉對生或輪生（至少下半部葉）。 16. 雄蕊 2.............................................................................................24. Veronica 16. 雄蕊 4。 17. 花冠上層縱摺成兜帽狀。 18. 花萼底部具 2 小苞片..........................................................21. Siphonostegia 18. 花萼底部無小苞片。 19. 花冠兜帽直，邊緣不反折..................................................17. Pedicularis 19. 花冠兜帽斜上，邊緣反折。 20. 花瓣黃色、白色或紫色；葉緣淺裂或鋸齒狀.................8. Euphras 20. 花瓣紫色；葉羽裂................................................18. Phtheirospermum 17. 花冠上唇平直。 21. 雄蕊約略等長。 22. 莖匍匐...........................................................................9. Hemiphragma 22. 莖直立..................................................................................19. Scoparia 21. 二強雄蕊。 23. 葉鋸齒緣..................................................................................1. Alectra 23. 葉全緣或近乎全緣。 9.

(20) 24. 花葯葯室不等長；花瓣裂片約略等長.......................3. Centranthera 24. 花葯葯室等長；花瓣裂片明顯二分....................................22. Striga. 三、台灣產野甘草之形態與分佈. (1,2,8,10~12). 【形態】台灣產野甘草為一年生草本，高可以長到 25~80 cm，根粗壯，全株光滑無毛，莖直立，多分枝，枝有稜角或狹翅，下部有木質化現象。葉主要是三葉輪生或對生，具有短柄，柄長約 3~10 mm 長，形狀為卵形或橢圓形，10~25 mm 長，3~15 mm 寬，越往上葉會變小，基部漸狹，先端短尖，邊緣鋸齒狀或齒狀，上表面光滑無毛，下表面腺狀或有小點。花小，多數；主要是白色花，單生或對生，生於葉腋。花梗細小，約 4~8 mm 長，無小苞片，萼片分生，4 枚，卵狀矩圓形，1.5~2 mm 長，先端較鈍，具有毛。花冠小，為輻射狀，直徑 4~5 mm，4 裂，裂片精圓形，喉部具有濃密的毛。雄蕊 4 枚，約略等長，花葯箭頭形，黃綠色。雌蕊 1 枚，花柱細長挺直，柱頭盤狀。果實為蒴果，卵狀至球形，成熟之後呈現黃褐至深褐色，直徑 2~3mm，室間室背均開裂，花柱宿存，熟後裂開，中軸胎座。花期夏秋間。(圖 1)2 【分佈】熱帶地區低海拔田野或低海拔潮濕地帶，生於荒地，路旁，偶見於山坡。【採集‧加工】全年採全草，鮮用或曬乾後使用。【產地】原產於美洲，現廣布於世界各地，台灣地區全境平野至低海拔地區之村落，路旁多伴自生之雜草。【效用】清熱解毒，利尿消腫，疏風止咳，清熱利濕。主治感冒發熱，肺熱咳嗽，暑熱泄瀉，腳氣浮腫，咽喉腫痛，腸炎，痢疾，小便不利，腳氣水腫，濕疹，痱子，高血壓，糖尿病，眼炎，肝炎，肺炎，肺炎，黃疸，小兒麻痺，丹毒。. 10.

(21) 圖 1：野甘草之手繪形態圖(據 Flora of Taiwan). 11.

(22) 【方例】 1.. 治高血壓：野甘草一至二兩，水煎服。. 2.. 治肺炎：野甘草三兩，蜜棗三粒，水煎後代茶飲。. 3.. 治感冒咳嗽：野甘草 30 克，薄荷 9 克，魚腥草 15 克，水煎服。《全國中草藥匯編》. 4.. 治小兒肝炎煩熱：鮮野甘草 15 克酌加冰糖，開水燉服。《福建民間草藥》. 5.. 治濕疹、熱痱：鮮野甘草搗汁外擦。《廣西中藥志》. 6.. 治小兒外感發熱，腸炎，小便不利：野甘草五錢至一兩，水煎服。《廣西中草藥》. 7.. 治喉炎：鮮野甘草四兩，搗汁調蜜服。《福建中草藥》. 8.. 治丹毒：鮮野甘草二兩，食鹽少許，同搗爛，水煎服。. 9.. 防治痲疹：野甘草水煎作茶飲，連服三天。《閩南民間草藥》. 12.

(23) 第四節野甘草屬(Scoparia)植物的生藥學文獻考察野甘草屬在世界約有 20 種，但在台灣只有一種，即為野甘草(Scoparia. dulcis)，文獻紀錄中，關於野甘草屬植物的生藥論文並不多。日本學者Toshimitsu Hayashi曾經做過一系列的研究 13~16 ，將巴拉圭產 S.. dulcis 所培養的組織依其所含成分分成幾種 chemotype：scoparic acid A (SA) 、 scopadulcic acid B (SDB) 、 scopadulin (SD) 、 scopadiol(SDX) 和 scopadulciol (SDY)，然後研究組織培養與化學成分含量的關係，試著找出最佳的培養方式。首先，以 Murasie-Skoog's medium (包含 5 μM 1-naphthaleneacetic acid (NAA) 和1μM 6-benzyladenine (BA)) 培養 S. dulcis 癒合組織，然後將癒合組織移到 Gamborg-B5 medium 和 liquid B5 medium 中繼續培養。之後經由HPLC 分析，比較時間與細胞生長及化學成分含量的關係 (圖2) ，發現在持續日光照射下的細胞生長比在黑暗中的細胞好，而在日光照射下，SA 型的癒合組織生長得比 SDB 型的癒合組織好。另外在化學成分含量上，在兩種 chemotype 的癒合組織中只能偵測到 SA，且含量遠比完整植物來得少13。. 圖 2：S. dulcis 中兩種 chemotype 中時間與細胞生長及 SA 含量之關係。圖中空心點表示在日照下生長之癒合組織；實心點表示在黑暗中生長之癒合組織。. 另外，在 SDX 型癒合組織也得到 scopadulciol (SDY)14。依照前述之培養方法，得到 SDX 型癒合組織，以 HPLC 分析時間與細胞生長及 SDY 含量的關係 (圖. 13.

(24) 3)，結果發現，與 SA 及 SDB 型癒合組織相同，細胞在持續日光照射下的生長比在黑暗中好，但是癒合組織所產生的 SDY 含量卻是在黑暗中生長比持續日照來得高，綜合上述兩者，在培養瓶中 SDY 總含量與細胞一樣逐漸增多，到第 12 達到最高。. 圖 3：S. dulcis 中時間與細胞生長及 SDY 含量之關係。圖中空心點表示在日照生長之癒合組織；實心點表示在黑暗中生長之癒合組織。. 而在日照週期與 SDY 含量的比較上(表 1)，日照時間增長，SDY 含量會減少，而細胞生長增加，在每天日照 16 小時的情況下最好，培養瓶中 SDY 含量則是在每日照 12 小時含量最高。. 表 1：SDX 型癒合組織中光照週期影響細胞生長及 SDY 含量之效果. 為了選擇葉部組織適當生長方式，觀察S. dulcis的生長diterpenoid含量關係，發現種子發芽4週後其diterpenoid趨於穩定，因此選擇4週大的植物其葉部組織作為培養的組織。分別以 2-Isopentenyladenine (2IP)、kinetin (K)、 N-benzyladenine (BA) 和 N-phenyl-N'-(4-pyridyl) urea (4PU)測試其影響組. 14.

(25) 織生長及diterpenoid含量的關係，結果發現只有4PU 0.1μM是具有影響的15。此外，Toshimitsu Hayashi16也以﹝1-13C﹞glucose做為標誌分子，並以13C NMR 光譜分析，確定了 S. dulcis 中 bicyclic 及 tetracyclic diterpenoid mevalonate-independent之生合成路徑。. 15.

(26) 第五節野甘草屬(Scoparia)植物的化學成分考察 Chemical type. Compound. Plant part. Ref.. Steroid. Daucosterol. Entire plant. 17. Stigmasterol. Entire plant. 17. β-sitosterol. Entire plant. 18. Taraxerol. Entire plant. 17. Dulcinol. Entire plant. 19. Scoparinol. Entire plant. 20,21. Scopadiol. Aerial part. 22. Scopadulciol. Aerial part. 22,23. Scopadulcic acid A. Entire plant. 24,25. Scopadulcic acid B. Entire plant. 22,24,26. Scopadulin. Entire plant. 27. Scoparic acid A. Entire plant. 22,24,26,28, 29. Scoparic acid B. Entire plant. 29. Scoparic acid C. Entire plant. 29. Scopanolal. aerial part. 21. α-amyrin. Entire plant. 30. Betulinic acid. Entire plant, 30,31 Root. Dulcioic acid. Entire plant. 30. Friedelin. Entire plant. 30. Glutinol. Leaf+stem Entire plant. 30. Diterpene. Triterpene. 16.

(27) Flavone. Nitrogen heterocy. glutenol. Aerial part. 32. Ifflaionic acid. Entire plant. 30. Acacetin. Leaf+stem. 8. Apigenin. Entire plant. 5. Cirsimarin. Aerial part. 33. Cynaroside. Entire plant. 5. 5,7,8,3',4',5'- Hexahydroxyflavone glucuronide. Entire plant. 5. 5-Hydroxy-6,7-dimethoxyflavone 4'-O-D-glucose. Entire plant. 5. Hymenoxin. Entire plant. 34. Linarin. Entire plant. 5. Luteolin. Entire plant. 5. Luteolin-7-glucoside. Entire plant. 5. Scutellarein. Entire plant. 5,35. Scutellarin. Entire plant Leaf. 5 35. Scutellarin Methyl Ester. Entire plant. 5. Vicenin-2. Entire plant. 5. Vitexin. Entire plant. 5. Benzoxazolinone. Entire plant. 19. Coixol (6-Methoxybenzoxazolinone). Root Leaf+stem Entire plant. 21,37 23 33. 2-Hydroxy-2-H-1,4-benzoxazol-3 -one. Aerial part. 36. 6-Methoxy-2-benzoxazolinone. Callus tissue 38. 6-Methoxy-2,3-H-benzoxazolone:. Aerial part. 17. 36.

(28) Phenylpropanoid p-coumaric acid. Entire plant. 19. Benzenoid. Gentisic acid. Leaf. 39. Carbohydrate. Mannitol. Rootbark. 18. Compound structure of Scoparia dulcis. Steroid CH3 H3C CH3 CH3. CH3 H. CH3. H. H. H. H. HO. H. HO. β-sitosterol. GluO. Daucosterol. Stigmasterol. HO. Taraxerol. 18. H.

(29) Diterpene O. [E]. O H. H O. H O. O. O. O. O. Dulcinol. Scoparinol. CH2OH. O. H O O. CO. O O. Scopadiol. Scopadulciol. O. O. H O. H O. H O. H. O. O. O. O. O. Scopadulcic acid A. Scopadulcic acid B. O. 19.

(30) O. OH. HOOC O. H. O. O. O. O O. Scopadulin. Scoparic acid A. CHO. O. HOOC. HOOC. O. O. O. O. Scoparic acid B. Scoparic acid C. O. O H. H H. O. O. O. O. O. H O O. 4-Epi-scopadulcic acid B. Dulcidiol. 20.

(31) O. O. [E]. H O H. O. H. O. O. O. O. Iso-dulcinol. Scopanolal. Triterpene CH3 H. H H. HO. H. OH. H. HO. H. Betulinic acid α-amyrin. 21. O.

(32) COOH H H. HO. H. H. O. Dulcioic acid. Friedelin. O. HO. H. H. H. HO O. Glutinol(3β) Glutenol(3α). Ifflaionsaeure. O. O. O. H. H. O. O. Methyl dulcioate. Methyl ifflaionate. 22. O.

(33) Flavone. OH OH OH. OH O. O. OH OH. O. O. OH. HO. O. OH. HO OH. OH. O. OH 5,7,8, 3',4',5'-Hexahydroxyflavone glucuronide OH HO. OH. O. HO. O. O. HO. OH HO. Luteolin. O. OH O. O. O. OH. O. O. HO OH. Linarin. Apigenin. HO. OH. OH. HO. O. O. O. OH. HO. O. HO OH. O. HO OH. Luteolin-7-glucoside. Scutellarein. 23. O.

(34) OH. O O. O. O. OH OH. O. OH OH. O. 5-Hydroxy-6,7-dimethoxyflavone 4'-O-D-glucose. Others. O. O. N. O. O. OH. O N. Coixol (6-Methoxybenzoxazolinone). HO. 2-Hydroxy-4H-benzo[1,4]oxazin-3-one. O OH. p-coumaric acid. 24.

(35) 第六節野甘草屬(Scoparia)植物的藥理作用考察. ¾ 降血糖作用 Pari40 等曾以 alloxan 誘導小鼠造成血糖過高，再以 S. dulcis 葉部的水萃取物(the aqueous extract of the S. dulcis leaves (SLEt))分別口服餵食 0.15, 0.30 and 0.45 g/kg/day，連續餵食 45 天，發現可以明顯的降低血中血糖濃度，其中以 0.45 g/kg/day 餵食的降血糖效果最佳(表 2)。. 表 2：餵食不同劑量之血糖變化. 41. 另外，在近期的文獻中，Muniappan Latha 等也曾 streptozotocin 誘導小鼠造成血糖過高，兩天後開始餵食S. dulcis 全草的水萃取物 (S.. dulcis plant extract (SPEt))，分別以 100, 200 及 400 mg/kg 餵食，並與對照組比較，發現以 200 mg/kg 餵食的這一組其降低血中血糖濃度的效果最佳。如以下所示：. 表3：餵食不同劑量S. dulcis水萃物給予正常與實驗鼠，觀察15天內血糖變化. 25.

(36) 圖4：SPEt效果之比較. 圖5：正常鼠與實驗鼠不同體重之SPEt效果比較. 由上述研究顯示，餵食S. dulcis 之小鼠其體內insulin明顯增加，顯示 S. dulcis 之降血糖作用應是促進體內β-cell分泌胰島素，且若 S.. dulcis 量太多，反而造成效果下降，表示其中應有阻撓有效成分的因數存在。另外研究中也發現餵食S. dulcis之小鼠體重較對照組高，這可能與促進血糖的控制有關。. 26.

(37) ¾ 抗胃潰瘍作用 1987 年，Toshimitsu Hayashi 等從 S. dlucis 植物全草中分離出兩個新的成分，scopadulcic acid A (SDA) 和 scopadulcic acid B (SDB)24，並進行藥理學研究，結果發現，與 SDA 比較之下， SDB 能抑制豬胃中 H+,K+-ATP 酶的活性和進入胃囊的質子運輸 42，如圖 6 所示，SDB 抑制活性 dose-dependent，而其半數抑制濃度 (IC50) 約為 20~30μM，藥物動力學顯示口服 SDB 鈉鹽 (SDB-Na) 或 SDB 效果較注射緩慢，但有較好的腸吸收。. +. +. 圖 6：SDB 對 H ,K -ATP 酶的效果. + + 另外，也研究 SDB 衍生物對豬胃 H ,K -ATP 酶的抑制作用. 23. ，結果發現. 羧基 (carboxyl group) 的甲基化及 C-13 及 C-18 位引入 acetyl group 或 oxime 均能顯著增強其抑制作用。在 30 個化合物中篩選出 SDB 的甲酯衍生物的抑制效果最強。同研究中也發現 scopadulciol 具有輕度的抑制豬胃 H+,K+-ATP 酶作用。. ¾ 抗病毒作用 Kyoko Hayashi43 等從 S. dulcis 中分離出五個雙萜類化合物，研究其體外抗第一型單純皰疹病毒活性，發現 scopadulcic acid B 可以抑制病毒的複製，而其抑制作用並非殺病毒作用或阻止病毒進入宿主細胞，而是影響病. 27.

(38) 毒細胞週期的早期。實驗方法為 hamster test model，口服或腹膜內注射 scopadulcic acid B 100 及 200 mg/kg /day，可以有效延長病毒開始造成傷害的時間。 Toshimitsu Hayashi27 等對分離的 scopadulin 進行藥理研究，發現 scopadulin 對 HeLa 細胞株(一種子宮頸癌細胞株)呈現細胞毒性作用，半數抑制劑量 (ID50) 為 285 μg/ml，並能抑制第一型單純皰疹病毒，半數有效劑量 (ED50) 為 38 μg/ml。. ¾ 抗腫瘤作用 Nishino44 等研究發現，從 S. dulcis 分離出的一個四環雙萜類化合物 ― scopadulcic acid B (SDB)，可以在體內及體外試驗中抑制一種促進腫瘤的物質，12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)。在 cultured cell 中，SDB 可以抑制 TPA 促進磷脂生成的作用，而且可以抑制 TPA 促進皮膚腫瘤起始物質― 7,12-dimethylbenz[a]anthracene 的作用。SDB 較其他具有相同作用的萜類化合物如 glycyrrhetinic acid 效果較強。另外，Ahsan31 等亦曾 S. dulcis 的地上部份分離出六個 labdanederived diterpenes ― iso-dulcinol (1)、4-epi-scopadulcic acid B (2)、 dulcidiol (4)、scopanolal (5)、scopadulciol (3) 及 scopadiol (6)，發現 1-4 及 6 對一種或多種胃癌 cell line 具有抗細胞毒性，另外也發現粗抽取物與純物質一樣對人類胃癌 cell line 具有細胞毒性。. ¾ 鎮痛、抗發炎作用 Ahmed20 等研究發現，由 S. dulcis 分離出的雙萜類化合物 ― scoparinol，在動物實驗具有鎮痛 (p < 0.001) 及抗發炎 (p < 0.01) 的效果，在鎮靜作用上，scoparinol 可使 pentobarbital 所誘導的睡眠起始時間 (onset) 減短及作用時間 (duration) 增長 (p < 0.05)，另外，在尿 28.

(39) 液容量的測量也發現具有利尿的效果。而在另一項研究中，Freire45 等由 S. dulcis 的水抽提物及乙醇抽提物比較其鎮痛及抗發炎作用，並由乙醇抽提物中分離出一個三萜類化合物― glutinol。以 0.8 % acetic acid(0.1 ml/10 g, i.p.)誘導小鼠造成蠕動情況，分別餵食水抽提物及乙醇抽提物之後發現，服用乙醇抽提物之小鼠蠕動情形降低，而餵食水抽提物之小鼠則無明顯改變，另以 carrageenan 誘導造成小鼠腳爪水腫，同樣以水抽提物及乙醇抽提物給食，亦發現乙醇抽提物有降低水腫情形，而水抽提物則無。以 glutinol 重複上述實驗，發現具有與乙醇抽提物相同效果，因此推測鎮痛及抗發炎作用可能與 glutinol 有關。. ¾ 降血壓作用 S. dulcis 根的水或醇提取物給麻醉貓注射均可引起血壓下降，在初期的動物試驗中，從 S. dulcis 分離出的化合物—coixol，呈現明顯的降壓作用 4。另有文獻報導 46，S. dulcis 水提取液對清醒大白鼠給藥劑量在 6 g/kg 時會使動脈血壓不變或微昇；調整到 9.6 g/kg 時反而會使動脈血壓微降；但是提升到 17.2 g/kg 時，又會使動脈血壓微昇；而若以醇提取液，則均會造成血壓微昇(表 4)。. 表 4：提取液對清醒大白鼠動脈血壓之影響提取液. 水提取液. 劑量(g/kg). 動脈血壓變化. 作用時間(min). 6. 不變或微昇. —. 9.6. 微降. 20. 17.2. 微昇. —. 8.9. 微昇. —. 18.5. 微昇. —. 醇提取液. 29.

(40) ¾ 抑制β- glucuronidase 作用 Masaru Kawasaki 等由 S. dulcis 分離出一個新的黃酮類化合物— 5,7,8, 3',4',5'-hexahydroxyflavone glucuronide，發現具有抑制βglucuronidase 的作用 5。另外 Toshimitsu Hayashi 等也發現另一個化合物，Scoparic acid A，也同樣具有抑制β- glucuronidase 的作用 29。. ¾ 其他藥理作用. Plant part. Activity. Type extract. Test model. Ref. Diuretic. Fraction:. Animal. 20. effect. scoparinol. (in vivo). Toxicity. ETOH:H2O. IP mice. 47. assessment. 1:1. Entire plant. Spasmogenic. ETOH(95%). Rat. 48. Entire plant. Binding. ETOH(80%). Rat. 49. test Entire plant. Entire plant. effect. 30.

(41) 第三章材料與方法第一節實驗材料、試藥與儀器一、外部形態鑑定部分 1. 植物採集本實驗採集新鮮野甘草，標本存放在台中市國立自然科學博物館 ( TNM )，採集記錄如表 5 所示：. 表 5：採集地點、時間、經緯度、採集編號採集時間. 採集地點. 2004.12.30. 台中縣沙鹿. 經緯度 120° 33’ 51” E 24° 12’ 50” N. 2005.3.18. 中國醫藥大學. 120° 33’ 43.8” E. 前柳川河堤 2005.11.24. 台中縣沙鹿鎮. 24° 13’ 27.3” N 120° 33’ 43.8” E. 北勢里福至路. 24° 12’. 2. 實驗材料. (1) 植物體 (2) 花 (3) 果皮、種子 (4) 花粉粒. 3. 實驗試劑. (1) Acetolysis 所需試藥 ①. 10% HCl 31. 50” N. 採集編號 TNM C.Y. Lee 185.

(42) ②. 10% KOH ③. H2SO4 (concentrated) ④. Acetolysis solution：是由 10 ml 的 sulphuric acid 和 90 ml 的 acetic anhydride 混合而成 ⑤. Hydrofluoric acid ⑥. 95% Ethanol. 4. 儀器. (1) 顯微鏡. Olympus. (2) 數位相機. Nikon 4500. (3) 鍍金機. JFC-1100E，日本 Jeol. (4) 電子式掃描顯微鏡 JSM-5400，日本 Jeol (5) Acetolysis 所需器材 ①. 離心管 ②. 水浴鍋 ③. 10 ml 和 100 ml 量筒 ④. 攪拌棒. 二、植物組織切片部分１、實驗試劑：. (1) Chloral hydrate solution (2) Glycerin : water（1 : 1） (3) Glycerin : alcohol : water（1 : 1 : 1） (4) Phloroglucinol solution (5) Potassium chlorate (6) Iodine test solution (7) Hydrochloric acid（12 N）. 32.

(43) (8) Potassium hydroxide（50 ％） (9) Safranine (10) SudanⅢ solution. ２、儀器：. (1) 顯微鏡（OPTIMA G303）及照相設備 (2) 立體顯微鏡（OPTIMA ZM160AT）及照相設備 (3) 顯微測微計（Erma 0.01 mm Micrometer） (4) 照相機（Nikon COOLPIX 5900）電腦及其周邊設備與相關軟體. 三、成分分離部份１、實驗試劑 (1) 正己烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、丙酮等溶媒(以上購自 Merck)。 (2) 測核磁共振(NMR)光譜所用之溶媒 CDCl3 (Deuterium chloroform)、 MeOD (Deuterium methanol)、DMSO (dimethyl- sulfoxide)等均為光譜級(以上購自 Merck)。 (3) 顯色劑：10 % Sulfuric acid spray reagent。 2. 薄層層析(Thin Layer Chromatography) TLC plate：Kieselgel 60 F254 silica gel pre-coated aluminium plate，厚度 2 mm (Merck)。 3. 管柱色層層析(Column Chromatography) 以 Pyrex 或 Merck 公司生產之不同型號管柱填充物質：Kieselgel 60. 70~230 mesh (Merck)，. Sephadex LH-20 ２、儀器： (1) 迴轉式濃縮機： EYELA, 日本 (2) 烘箱：MEMMERT. 33.

(44) (3) 電子天平：SHIMADZU LIBROR AEG-120 (4) 電熱板：CORONING MODEL PC-320。 (5) 超音波震盪器：Transsonic-TP690，Elma，德國 (6) 玻璃展開槽：120 mm x 150 mm 及 220 mm x 70mm (7) 紫外線燈 (波長 254nm 及 366nm)：CAMAG UV-CABINET (8) 微量熔點測定器 Electrothermal’s Series IA 9100 and IA9200 Digital Melting point，測定範圍 50.00~500.0℃之間，其溫度未經校正。 (9) 紅外線分光光譜儀 (Infared Spectrophotometer) 使用 Nicolet Impact 400 FT-IR Spectrophotometer 測定，固體以乾的 KBr 粉未混合均勻，在真空下加壓成透明薄片測定之，光譜單位為波數(cm-1)(中國醫藥大學)。 (10)質譜儀(MS). JOEL JMS-SX/SX 102A Tandem Mass Spectrometer (中. 興大學)。 (11)核磁共振光譜儀 Bruker DPX-200 FT-NMR (中國醫藥大學)。 Internal standard 為 Tetramethy Silane (TMS)，化學位移(Chemical shift)以 δ 表示，單位 ppm，以 J 表示偶合常數(coupling constant)，單位 Hz 峰線訊號以“s”表示單峰(singlet)，“d”表示雙重峰 (doublet)，“t”表示三重峰(triplet)，“q”表示四重峰，“m”表示多重峰(multiplet)。. 四、Luteolin 定量部分（液相層析部分）１、實驗試劑： (1) Luteolin：日本和光純藥工業株式會社（Wako） (2) 內部標準品（I.S.）： piroxaicam (3) 丙腈（acetonitril）：德國 Merck 公司 (4) 磷酸（phosphoric acid）：德國 Merck 公司. 34.

(45) (5) 水（water）： Milli Q system (6) 其他試劑：分析試藥級或 HPLC 級２、材料： (1) 分離管： Rp-18，德國 Merck 公司 LiChroCART 250-4 Purospher® STAR (2) 0.22μm 濾膜： minipore PVDF 25 mm (3) 流速 1 ml/min. (4) 檢測條件： UV 350 nm (5) 注射量： 20 μl (6) 溫度：室溫（25 ℃）. ３、儀器： (1) 純水製造機（Water purification equipment）： Milli Q system Milli-Q-Academic，Minipore，美國 (2) 高效液相層析儀（High-performance Liquid Chromatography； HPLC）：本裝置由下列組成： ①.液相層析溶劑輸送系統（Solvent Delivery Pump）：L-7100 ②.紫外光可見光檢測器（UV-Visible Detector）：L-7400 ③.二極體列陣檢測器（Diode Array Detector）：L-7455 ④.自動注射器（Auto-sampler）： L-7200 ⑤.除氣系統（Degas）： DG-2410 (3) 酸鹼度計（pH meter）： Model 6071，Jenco，台灣 (4) 水壓抽氣機（Aspirator）： Aspirator A-3S，Eyla，日本 (5) 電子分析天平︰ CP 224S，Sartorius，德國 (6) 超音波震盪器（Ultrasonic）： Transsonic-TP690，Elma，德國 (7) 抽氣過濾器： EYELA Aspirator A-3S (8) 觸動式震盪器（Minishaker）：MS1，IKA® Works（Asia），馬來西. 35.

(46) 亞 (9) 高速離心機： Hettich Zentrifugen D-7200，Tuttlingen，德國 (10) 可調式定量吸管： Pipetman 20、100、200、1000 μl，GILSON，美國. 五、PCR 部分１、實驗試劑： (1) Liquid nitrogen (2) 20% SDS (3) Extraction buffer，EB 100 mM Tris-HCl pH＝8.0，50 mM EDTA-Na pH＝8.0 500 mM NaCl，10 mM beta-mercaptoethanol (4) K-solution： galatic acetic acid. 11.5 ml. 5M potassium acetate. 60.0 ml. Milli-Q. 28.5 ml. (5) Phenol (6) Isopropanol (7) Chloroform: isoamylalcohol=24:1 (8) TE buffer（Buffer B, TE＝5: 1） (9) Ammonium acetate(7.5M) (10) Absolute EtOH (11) RNase A（10 mg/ml; Sigma） (12) Template DNA (13) Primers : 18D（5'-CACACCGCCCGTCGCTCCTACCGA-3'） 28CC（5'-ACTCGCCGTTACTAGGTGAA-3'） (14) 10X buffer（Promega, Madison, USA）. 36.

(47) (15) MgCl2（25mM） (16) Taq polymerase (Promega,Madison, USA) (17) dNTPs (2mM stock) (18) Markers Lambda/HindIII (Invitrogen/Life Technologies) (19) Ethidium bromide solution 10 mg/ml (20) l5X loading Dyes50X (21) TBE [5X stock solution1(liter): 54 g Tris base, 27.5 g boric acid, 20 ml. 0.5 M, EDTA, pH 8.0]. (22) Sterile ddH20 (23) Agarose (powder). ２、儀器： (1) 離心管 (2) 微量離心管(microfuge tube) (3) 瑪瑙研缽 (4) 水浴鍋 (5) PCR 反應器：GeneAmp PCR System 9600 (PERKIN ELMER) (6) 膠體電泳槽及電源：APELEX PS-305 (7) UV trans-illuminator and camera system：KODAK EDAS 290 (8) 微波爐 (9) 計時器 (10) 固定式/可調式微量吸管：RAININ 美國. 37.

(48) 第二節野甘草(Scoparia dulcis)植物的形態鑑定一、植物外觀利用外觀鑑別並以數位相機拍攝。二、花從植物體上取下花後，1 小時之內以 20 倍 Olympus 顯微鏡觀察，以數位照相機拍攝。三、果皮、種子 (1) 風乾後以顯微鏡觀察之 (2) 以鍍金機真空鍍金後以電子顯微鏡觀察之四、花粉粒 (1) 取花粉粒取花粉粒須先經由 acetolysis (Erdtman 1952)50 步驟處理。 Acetolysis 步驟： 1. 將經過乾燥處理之樣品放入試管 2. 加入 10% HCl (去除 carbonates) 3. 以蒸餾水稀釋 (distilled water) 4. 離心後除去上清液 5. 重複 3，4 步驟兩次 6. 加入 10% KOH (去除一些有機物) 7. 以蒸餾水稀釋 8. 離心後除去上清液 9. 重複 7，8 步驟兩次。 10.加入冰醋酸 11.離心後除去上清液 (如果有明顯的雜質則重複步驟 2~11) 12.加入 acetolysis solution (去除有機雜質，製備花粉粒) 13.水浴 15 min. 38.

(49) 14.從水浴鍋拿出，靜置至室溫 15.以蒸餾水稀釋 16.離心後除去上清液 17.至無色（如仍有顏色則重複步驟 15-16） 18.加入 95% alcohol 19.離心後除去上清液 20.加入 95% alcohol. (2) 電子顯微鏡觀察：置備好的花粉粒，先置於 95%. alcohol 中，以滴管吸取滴於載波片上，. 乾掉後標號置於玻片保存盒中，使用時，剪取鍍碳膠帶合適大小，黏貼於銅座上，然後在載玻片上稍微黏取，得到花粉粒，之後將銅座置於鍍金機鍍金（電流 10 mA 1 min*2），以掃瞄式電子顯微鏡觀察之。. 39.

(50) 第三節野甘草(Scoparia dulcis)植物的生藥組織學研究一、生藥組織鑑別： (1) 將採集之臺灣產野甘草之莖及葉，利用徒手切片法進行橫切（transverse section，X.S.）徑縱切（radial longitudinal section，R.L.S.）弦縱切（tangential longitudinal section，T.L.S.） (2) 置檢體於載玻片上，先以 chloral hydrate solution 清除細胞內容物後，再滴加各種不同化學染劑。內部組織構造之記載及說明，以橫切面為主。特殊組織之觀察以下列方法處理之： ①. phloroglucinol solution 與 hydrochloric acid 進行木化反應。 ②. 以 sudanⅢ染色，再以 glycerin：alc：water（1：1：1）混合溶液清洗之，觀察木栓化反應。 ③. 利用 Schultze's 與 KOH maceration method 將材料予以加熱解離，最後以 glycerin：water（1：1），當做封鎖劑，觀察其細胞解離情形。. 二、顯微鏡觀察先用低倍鏡頭檢查檢品之弱擴大圖，再用高倍鏡觀察內部組織之特徵，使用顯微測微計測量各組織或其細胞大小。並利用顯微鏡之照相設備，將鑑別所需組織照相以供鑑定之用。. 40.