【19】中華民國 【12】專利公報 (B)
【11】證書號數:I519787 【45】公告日: 中華民國 105 (2016) 年 02 月 01 日 【51】Int. Cl.: G01N33/574 C12Q1/68 C40B20/04 (2006.01) (2006.01) (2006.01) G01N33/68 C12Q1/02 C12R1/91 (2006.01) (2006.01) (2006.01) 發明 全 12 頁 【54】名 稱:癌症轉移之評估方法及生物標記、抑制癌症轉移之醫藥組成物、及分泌蛋 白質體之分析方法METHODS AND BIOMARKER FOR EVULATING CANCER
METASTASIS, PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR INHIBITING CANCER METASTASIS, AND METHOD FOR ANALYZING SECRETOME 【21】申請案號:101140274 【22】申請日: 中華民國 101 (2012) 年 10 月 31 日 【11】公開編號:201416676 【43】公開日期: 中華民國 103 (2014) 年 05 月 01 日 【72】發 明 人: 廖寶琦 (TW) LIAO, PAO CHI;張盈華 (TW) CHANG, YING HWA;李淑慧
(TW) LEE, SHU HUI;張華倩 (TW) CHANG, HUA CHIEN;曾堯麟 (TW) TSENG, YAU LIN;賴吾為 (TW) LAI, WU WEI
【71】申 請 人: 國立成功大學 NATIONAL CHENG KUNG UNIVERSITY
臺南市東區大學路 1 號 【74】代 理 人: 吳冠賜;蘇建太
【56】參考文獻:
Bai, J., et al.,” DJ-1 May Contribute to Metastasis of Non-Small Cell Lung Cancer”, Mol. Biol. Rep., 2012, Vol.39, P. 2697-2703. 結合中空纖維管柱培養系統與非標記蛋白質體定量分析方法來鑑定與肺腺癌轉移相關 的分泌蛋白質(研究生:李淑慧)成功大學環境醫學研究所,20120913 國圖上架公 開。 審查人員:張榮興 [57]申請專利範圍 1. 一種肺癌轉移之評估方法,包括:(A)提供一受試者之檢體樣品,該檢體樣品係包括一正 常組織、及一待檢腫瘤組織;(B)分別檢測該正常組織、及該待檢腫瘤組織中之一生物標 記之表現量,其中該生物標記係為一帕金森氏疾病第七型(Parkison disease type 7,PARK7) 之基因型或蛋白質,並分別檢測該正常組織、及該待檢腫瘤組織中之 PARK7 之蛋白 質、蛋白質之衍生物、或蛋白質之胜肽鏈之表現量,其中 PARK7 之核苷酸鏈序列係為 SEQ ID NO:1 所示之序列;以及(C)比較該正常組織、及該待檢腫瘤組織中之該生物標 記之表現量,當該待檢腫瘤組織中之該生物標記之表現量高於該正常組織中之該生物標 記之表現量,代表該受試者具有癌症轉移之風險。 2. 如申請專利範圍第 1 項所述之評估方法,其中於步驟(B)中,係分別檢測該正常組織、及 該待檢腫瘤組織中之 PARK7 之蛋白質之表現量。 3. 如申請專利範圍第 2 項所述之評估方法,其中係透過西方墨點法、PCR、凝膠電泳法、 酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)、免疫組織化學法(IHC)、免疫沉澱法(IP)、或質譜分析 法(MS)分別檢測該正常組織、及該待檢腫瘤組織中之 PARK7 之蛋白質之表現量。 3936
-4. 如申請專利範圍第 1 項所述之評估方法,其中 PARK7 之蛋白質序列係為 SEQ ID NO: 2 所示之序列。 5. 如申請專利範圍第 1 項所述之評估方法,其中該肺癌係為一非小細胞肺癌。 6. 一種肺癌轉移之生物標記,其係為 PARK7 之一蛋白質序列、該蛋白質序列之衍生物、 該蛋白質序列之片段、該蛋白質序列之變異體、及該蛋白質序列所對應之抗體所組成之 群組。 7. 如申請專利範圍第 6 項所述之生物標記,其中 PARK7 之核苷酸鏈序列係為 SEQ ID NO:1 所示之序列。
8. 如申請專利範圍第 6 項所述之生物標記,其中 PARK7 之蛋白質序列係為 SEQ ID NO: 2 所示之序列。
9. 一種用以抑制肺癌轉移之 siRNA 化合物,包括:一目標序列,該目標序列係選自 PARK7 之基因,其中該 PARK7 之基因序列係為 SEQ ID NO:1。
10. 如申請專利範圍第 9 項所述之 siRNA 化合物,其中該目標序列係包括 20-25 個寡核苷酸。 圖式簡單說明 圖 1A 係於無血清培養基(SFM)馴化前與馴化後,以顯微鏡(200X)觀察 CL1-0 以及 CL1-5 的細胞型態 圖 1B 係以 MTT 技術測試 CL1-0 細胞於無血清培養基(SFM)馴化前與馴化後生長情況。 圖 1C 係以 MTT 技術測試 CL1-5 細胞於無血清培養基(SFM)馴化前與馴化後生長情況。 圖 2 係根據本發明實施例,對肺腺癌細胞株進行分泌蛋白質體分析之流程圖。 圖 3 比較家務蛋白質 G3PDH 在等量狀況液中經過外泌體純化與未經過之表象量差異。 圖 4 係根據本發明實施例,以西方墨點法對 CL1-0 與 CL1-5 細胞株中,候選蛋白質的表 現量進行比較。
圖 5A 係根據本發明實施例,處理 PARK7 siRNA 或轉染 PARK7 DNA 的質體之細胞株的 PARK7 蛋白質表現量。
圖 5B 係根據本發明實施例,CL1-5 細胞株以 PARK7 siRNA 處理後之生長情況。 圖 5C 係根據本發明實施例,A549 細胞株以 PARK7 siRNA 處理後之生長情況。 圖 5D 係根據本發明實施例,CL1-0 細胞株以 PARK7 siRNA 處理後之生長情況。 圖 5E 係根據本發明實施例,CL1-0 細胞株以轉染 PARK7 質體 DNA 後之生長情況。 圖 5F 係根據本發明實施例,CL1-5、A549 以及 CL1-0 細胞株以 PARK7 siRNA 處理或轉 染 PARK7 質體 DNA 後,每區域細胞移動數目。
圖 6A 係根據本發明實施例,PARK7 的表現量在正常周邊細胞組織與不同 TNM 階段之癌 化組織有統計上之差異。
圖 6B 係根據本發明實施例之 ROC 曲線(Receiver operating characteristic curve),可清楚分 辨第一期與第二期 TNM 階段。
圖 6C 係根據本發明實施例總存活率之 Kaplan-Meier 估計量。 圖 6D 係根據本發明實施例病展存活率之 Kaplan-Meier 估計量。
(2)
-(3)
-(4)
-(5)
-(6)
-(7)
-(8)
-(9)
-(10)
-(11)
-(12)