分析實驗結果報告

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分析實驗結果報告

實驗十一無機磷酸鹽的比色定量

生科 2A 第 9 組

0033B030 張書毓

0033B031 江盈盈

(2)

1 一. 實驗過程 ... 2

二. 加入還原劑的呈色反應 ... 3

三. 探測最適吸收波長 ... 3

掃描光譜圖 ... 3

掃描光譜圖數據 ... 4

四. 配置檢量線容液及測定吸光值 ... 7

五. 心得檢討 ... 8

(3)

2 一、實驗過程

(以預報的流程圖表是當時的圖片以及實驗當下經歷的狀況) 1. 取磷酸鹽標準液(濃度為

220μg/mL)0、0.5、1.0、1.5、

2.0mL 分別加入15cm 長試管中

2. 補純水至總體積5mL

1. 取2.5mL鉬酸銨溶液分別加入各試管混合，靜置5min 2. 分別加入2.5mL之還原劑溶液，混合均勻後，靜置30min

統一以純水blank

以分光光度計測定個呈色液於748 nm 波長之吸收度

Excel 運算最小方差直線之回歸線公式(y=ax+b)計算磷酸鹽濃度與吸收度之關係

(橫軸座標單位μg/mL，縱軸座標單位OD600or A660)

利用所得回歸線y=ax+b，將6-1 6-2 7-1 7-2吸光值帶入得鄰酸鹽濃度

準備靜置 5min 時，

才發現全部都加標準液

重新將 6-1 6-2 7-1 7-2 加入未知液

加入還原劑後，利

用試管震盪器使容

液混合均勻再靜置

將各管加入 2.5Ml 的還

原劑，顏色發生變化

(4)

3 二、加入還原劑的呈色反應

每管加入 2.5 mL 鉬酸銨

每管加入 2.5 mL 還原劑

7𝐻₃𝑃𝑂₄+ 12(𝑁𝐻₄)₆𝑀𝑜₇𝑂₂₄+ 51𝐻⁺

→ 7(NH4)3PO4 • 12 MoO3

黃色

𝑀𝑜

錯合物

+ 51𝑁𝐻4++ 36𝐻2𝑂

(NH4)3PO4 • 12 MoO3

黃色

𝑀𝑜

錯合物

+

還原劑

→

藍色

𝑀𝑜

錯合物

我們加入鉬酸銨後，沒有產生黃色而是透明無色

加入還原劑後顏色明顯變藍色(除了第一管)，顏色不同也代表濃度不同

三、探測最適吸收波長

 取第五管試管進行全波長掃描(Spectrum measurement)

 掃描條件 𝜆 = 500~950 nm，blank 為純水

 最大吸光值的𝜆

_𝑚𝑎𝑥

= 748n

 標準無機磷酸鹽溶液全波長掃描光譜圖

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4

500 600 700 800 900

吸光值 OD

波長𝜆 (nm)

標準無機磷酸鹽溶液全波長掃描光譜圖

(748 , 1.2875)

(5)

4  全波長掃描數據(𝜆

_𝑚𝑎𝑥

= 748nm 數據在第五頁用紅色標註)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD) 500nm 0.5724 534nm 0.6649 568nm 0.7683 602nm 0.9101 636nm 1.0529 501nm 0.5759 535nm 0.6674 569nm 0.7721 603nm 0.9154 637nm 1.0572 502nm 0.5787 536nm 0.6706 570nm 0.7763 604nm 0.9195 638nm 1.0607 503nm 0.5826 537nm 0.6728 571nm 0.7799 605nm 0.9242 639nm 1.0649 504nm 0.5853 538nm 0.6762 572nm 0.7843 606nm 0.9282 640nm 1.0685 505nm 0.5882 539nm 0.6792 573nm 0.7885 607nm 0.9329 641nm 1.0722 506nm 0.5913 540nm 0.6811 574nm 0.7926 608nm 0.9368 642nm 1.0753 507nm 0.5937 541nm 0.6848 575nm 0.7961 609nm 0.9415 643nm 1.0798 508nm 0.5964 542nm 0.6882 576nm 0.8007 610nm 0.9449 644nm 1.0834 509nm 0.5995 543nm 0.6903 577nm 0.8043 611nm 0.9503 645nm 1.0873 510nm 0.6028 544nm 0.6938 578nm 0.8085 612nm 0.9541 646nm 1.0907 511nm 0.6054 545nm 0.6963 579nm 0.8123 613nm 0.9585 647nm 1.0946 512nm 0.6088 546nm 0.6997 580nm 0.8167 614nm 0.9623 648nm 1.0983 513nm 0.6112 547nm 0.7027 581nm 0.8207 615nm 0.9667 649nm 1.1021 514nm 0.614 548nm 0.7052 582nm 0.8255 616nm 0.9706 650nm 1.1058 515nm 0.6166 549nm 0.7084 583nm 0.8291 617nm 0.9754 651nm 1.1094 516nm 0.6198 550nm 0.7109 584nm 0.8338 618nm 0.9786 652nm 1.1129 517nm 0.6225 551nm 0.7149 585nm 0.8378 619nm 0.9832 653nm 1.1164 518nm 0.6248 552nm 0.7168 586nm 0.8421 620nm 0.9878 654nm 1.1203 519nm 0.6273 553nm 0.7212 587nm 0.8456 621nm 0.9917 655nm 1.124 520nm 0.6294 554nm 0.7252 588nm 0.8498 622nm 0.9961 656nm 1.1273 521nm 0.6324 555nm 0.7282 589nm 0.8543 623nm 1.0004 657nm 1.1312 522nm 0.6346 556nm 0.7313 590nm 0.8585 624nm 1.0051 658nm 1.1341 523nm 0.6375 557nm 0.7357 591nm 0.8626 625nm 1.009 659nm 1.1383 524nm 0.64 558nm 0.7386 592nm 0.8666 626nm 1.0126 660nm 1.1414 525nm 0.643 559nm 0.7432 593nm 0.8705 627nm 1.0173 661nm 1.1453 526nm 0.645 560nm 0.7404 594nm 0.8745 628nm 1.0209 662nm 1.1481 527nm 0.6481 561nm 0.7431 595nm 0.8791 629nm 1.0253 663nm 1.1516 528nm 0.65 562nm 0.7466 596nm 0.8837 630nm 1.0291 664nm 1.1547 529nm 0.6527 563nm 0.7504 597nm 0.8885 631nm 1.0332 665nm 1.1585 530nm 0.6556 564nm 0.7539 598nm 0.8926 632nm 1.037 666nm 1.1612 531nm 0.6581 565nm 0.758 599nm 0.8971 633nm 1.0413 667nm 1.1649 532nm 0.6604 566nm 0.7612 600nm 0.9018 634nm 1.045 668nm 1.1677 533nm 0.6625 567nm 0.7639 601nm 0.9063 635nm 1.049 669nm 1.1712

(6)

5 𝜆

(nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD) 670nm 1.1738 695nm 1.242 730nm 1.2839 765nm 1.2854 800nm 1.2795 671nm 1.1774 696nm 1.2442 731nm 1.2846 766nm 1.2855 801nm 1.2793 672nm 1.1804 697nm 1.2461 732nm 1.2848 767nm 1.2851 802nm 1.2791 673nm 1.1836 698nm 1.2484 733nm 1.2853 768nm 1.285 803nm 1.2785 674nm 1.1866 699nm 1.2499 734nm 1.2857 769nm 1.2848 804nm 1.2787 675nm 1.1897 700nm 1.252 735nm 1.2856 770nm 1.2844 805nm 1.2779 676nm 1.1926 701nm 1.2534 736nm 1.2864 771nm 1.2847 806nm 1.2777 677nm 1.1957 702nm 1.2555 737nm 1.2863 772nm 1.2845 807nm 1.2775 678nm 1.1984 703nm 1.2571 738nm 1.2868 773nm 1.284 808nm 1.2768 679nm 1.2016 704nm 1.2586 739nm 1.287 774nm 1.2841 809nm 1.2769 670nm 1.1738 705nm 1.2604 740nm 1.2868 775nm 1.284 810nm 1.2763 671nm 1.1774 706nm 1.2619 741nm 1.2871 776nm 1.2837 811nm 1.276 672nm 1.1804 707nm 1.2638 742nm 1.2874 777nm 1.2838 812nm 1.2752 673nm 1.1836 708nm 1.2651 743nm 1.2875 778nm 1.2833 813nm 1.2746 674nm 1.1866 709nm 1.2669 744nm 1.287 779nm 1.2832 814nm 1.2745 675nm 1.1897 710nm 1.2681 745nm 1.2874 780nm 1.2831 815nm 1.274 676nm 1.1926 711nm 1.2694 746nm 1.2875 781nm 1.2833 816nm 1.2735 677nm 1.1957 712nm 1.2703 747nm 1.2875 782nm 1.2828 817nm 1.2727 678nm 1.1984 713nm 1.2714 748nm 1.2875 783nm 1.2826 818nm 1.2721 679nm 1.2016 714nm 1.2723 749nm 1.2874 784nm 1.2827 819nm 1.2715 680nm 1.2042 715nm 1.2737 750nm 1.287 785nm 1.2826 820nm 1.2711 681nm 1.2074 716nm 1.2746 751nm 1.2871 786nm 1.2825 821nm 1.2704 682nm 1.2097 717nm 1.275 752nm 1.2873 787nm 1.2818 822nm 1.2692 683nm 1.2129 718nm 1.2762 753nm 1.2875 788nm 1.2821 823nm 1.2684 684nm 1.2153 719nm 1.2769 754nm 1.2868 789nm 1.282 824nm 1.2682 685nm 1.2183 720nm 1.2783 755nm 1.287 790nm 1.2816 825nm 1.2672 686nm 1.2203 721nm 1.2789 756nm 1.2872 791nm 1.2817 826nm 1.2665 687nm 1.2233 722nm 1.2794 757nm 1.2865 792nm 1.2813 827nm 1.2649 688nm 1.2255 723nm 1.2801 758nm 1.2863 793nm 1.2813 828nm 1.2639 689nm 1.2281 724nm 1.2807 759nm 1.2866 794nm 1.2808 829nm 1.2631 690nm 1.2308 725nm 1.2817 760nm 1.2861 795nm 1.2807 830nm 1.2621 691nm 1.2333 726nm 1.2819 761nm 1.2861 796nm 1.2805 831nm 1.2615 692nm 1.2362 727nm 1.2832 762nm 1.286 797nm 1.2805 832nm 1.2596 693nm 1.2378 728nm 1.2831 763nm 1.2858 798nm 1.28 833nm 1.2587 694nm 1.2402 729nm 1.2839 764nm 1.2856 799nm 1.28 834nm 1.2576

(7)

6 𝜆

(nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD)

𝜆 (nm)

吸光值 (OD) 835nm 1.2563 870nm 1.1887 905nm 1.1099 940nm 1.0421 836nm 1.2554 871nm 1.1861 906nm 1.1079 941nm 1.04 837nm 1.2538 872nm 1.1843 907nm 1.1061 942nm 1.038 838nm 1.2524 873nm 1.182 908nm 1.1038 943nm 1.0362 839nm 1.251 874nm 1.1793 909nm 1.1018 944nm 1.0338 840nm 1.2497 875nm 1.1769 910nm 1.1 945nm 1.0316 841nm 1.2486 876nm 1.1748 911nm 1.0979 946nm 1.0293 842nm 1.2468 877nm 1.1723 912nm 1.0961 947nm 1.0275 843nm 1.245 878nm 1.1701 913nm 1.0942 948nm 1.0248 844nm 1.2432 879nm 1.1672 914nm 1.0919 949nm 1.0226 845nm 1.2419 880nm 1.1651 915nm 1.09 950nm 1.0202 846nm 1.2399 881nm 1.1626 916nm 1.0885 940nm 1.0421 847nm 1.2381 882nm 1.16 917nm 1.0865 941nm 1.04 848nm 1.2366 883nm 1.1577 918nm 1.0845 942nm 1.038 849nm 1.2349 884nm 1.1556 919nm 1.0827 943nm 1.0362 850nm 1.2327 885nm 1.1532 920nm 1.0807 944nm 1.0338 851nm 1.2308 886nm 1.1507 921nm 1.0785 945nm 1.0316 852nm 1.2287 887nm 1.1485 922nm 1.077 946nm 1.0293 853nm 1.2268 888nm 1.146 923nm 1.0749 947nm 1.0275 854nm 1.2248 889nm 1.1436 924nm 1.0731 948nm 1.0248 855nm 1.2223 890nm 1.1418 925nm 1.0715 949nm 1.0226 856nm 1.2204 891nm 1.1398 926nm 1.0692 950nm 1.0202 857nm 1.2182 892nm 1.1373 927nm 1.0672 858nm 1.2161 893nm 1.1351 928nm 1.0657 859nm 1.2138 894nm 1.133 929nm 1.0635 860nm 1.212 895nm 1.1309 930nm 1.0616 861nm 1.2098 896nm 1.1288 931nm 1.0599 862nm 1.2075 897nm 1.1267 932nm 1.0577 863nm 1.2048 898nm 1.1248 933nm 1.0557 864nm 1.2026 899nm 1.1224 934nm 1.0541 865nm 1.2008 900nm 1.1201 935nm 1.0519 866nm 1.1978 901nm 1.1183 936nm 1.0499 867nm 1.1957 902nm 1.116 937nm 1.0482 868nm 1.1937 903nm 1.1138 938nm 1.046 869nm 1.1911 904nm 1.1121 939nm 1.0442

(8)

7 四. 配製檢量線溶液及測定吸光值

試管號碼

(220 μg/mL) 標準溶液

加𝐻

₂

𝑂至總體積為

5mL

步驟標準液含量計算式

標準溶液濃度

(μg

mL) ×

標準液體積

(𝑚𝐿)

溶液總體積

含量 μg

吸光值 (OD=748)

1 0 5.0

2.5 mL

鉬酸銨

2.5 mL 還原劑

測吸光值

試管 1：

²²⁰⁽

μg

mL)×0.0(𝑚𝐿)

10(𝑚𝐿)

= 0 μg 試管 2：

²²⁰⁽

μg

mL)×0.5(𝑚𝐿)

10(𝑚𝐿)

= 22 μg 試管 3：

²²⁰⁽

μg

mL)×1.0(𝑚𝐿)

10(𝑚𝐿)

= 44 μg 試管 4：

²²⁰⁽

μg

mL)×1.5(𝑚𝐿)

10(𝑚𝐿)

= 66 μg 試管 5：

²²⁰⁽

μg

mL)×2.0(𝑚𝐿)

10(𝑚𝐿)

= 88 μg

0 0.003

2 0.5 4.5 22 0.348

3 1.0 4.0 44 0.673

4 1.5 3.5 66 0.990

5 2.0 3.0 88 1.306

未知 6-1 2.0 3.0 22.709 0.350

未知 6-2 2.0 3.0 0.351

未知 7-2 2.0 3.0 66.020 0.990

未知 7-2 2.0 3.0 0.993

 標準液含量對吸光值做圖檢量線

 利用未知 6-1 6-2 7-1 7-2 測得的吸光值代入檢量線公式推算未知標準液含量濃度所得檢量線公式：y = 0.0148x + 0.0144 R² = 0.9997

未知 6 標準液含量濃度：22.709 μg 未知 7 標準液含量濃度：66.020 μg

 6-1 6-2 吸光值平均值：

0.350+0.351

2

= 0.3505

 將平均值帶入檢量線公式的 y 值：

0.3505 = y = 0.0148x + 0.0144 x = (0.5050 − 0.0144) ÷ 0.0148 = 22.709

 所得 x 值即為未知 6 標準液含量

 6-1 6-2 吸光值平均值：

0.990+0.993

2

= 0.9915

 將平均值帶入檢量線公式的 y 值：

0.9915 = y = 0.0148x + 0.0144 x = (0.5050 − 0.0144) ÷ 0.0148 = 66.020

 所得 x 值即為未知 7 標準液含量 y = 0.0148x + 0.0144

R² = 0.9997

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4

0 20 40 60 80 100

吸光值 OD

檢量線溶液含量濃度(

μg)

標準液含量對吸光值做圖檢量線

(9)

8 五. 心得檢討

這次的實驗結果還不錯檢量線的 R² = 0.9997，但是前面一開始做實驗的時候實在粗心造成我們全部的是管都加入標準液而忘了加未知，因此我們這桌有標準液不夠的問題，用 pipet 加溶液的時候有時候會忘記自己加過了沒其實有點亂，

不過因為有統一長度的試管，所以只要確認液面高度差不多就可以知道有沒有加到同體積。使用分光光度計測量吸光值的時候，我們這組用 pipet 加溶液而不是和別組一樣是用滴管加溶液，所以我們也在想用不同的工具加溶液，是否會影響做出來結果，畢竟當我們測量試管 1~試管 5 的吸光值時，比色管是不會清洗的，因為由濃度低到濃度高，或許加溶液的工具也可以不用清洗，因為也是從濃度低到濃度高。

分析實驗結果報告