國立成功大學「邁向頂尖大學計畫」
延攬優秀人才工作報告表
NCKU’s “Aim for the Top University Project”
Work Report Form for Distinguished Scholars
□續聘continuation of employment離職resignation
100 年 7 月 13 日更新
受聘者姓名
Name of the Employee 廖婉玲 男 女
Male Female
聘 期 Period of Employment
from 101 年(y) 4 月(m) 1 日(d) to 102 年(y) 8 月(m) 31 日(d) 研究或教學或科技研發與
管理計畫名稱 The project title of research,
teaching, technology development and management
探討病毒感染細胞過程中蛋白表現
調控機制 計畫主持人
（申請單位主管）
Project Investigator (Head of Department/Center)
賴明德
補助延聘編號
Grant Number HUA 102 - 3 - 22 -251
一、研究、教學、科技研發與管理工作全程經過概述。（由受聘人填寫）
Please summarize the entire research, teaching, or science and technology R&D and management work process (To be completed by the employee)
在過去已證實病毒可利用其 5’端非轉譯區(5’UTR)上的 internal ribosome entry site (IRES)的結構 而不需透過 cap 來轉譯所需的蛋白質以維持其在宿主細胞中病毒蛋白的合成與後續的病毒複製。
而近年來也發現透過 IRES 的結構轉譯蛋白質的能力並非為病毒專有的方式，在真核細胞中也發 現許多基因除了傳統 cap-dependent 的機制外，當細胞遭受到一些極致狀況時，有些基因為了快 速合成所需蛋白，亦可透過 IRES-dependent 的機制來製造因應環境變化的蛋白質，使細胞可以 對所遭遇的極致環境做適當的處理。
在過去的工作中，我們利用生物資訊學的方式預測出一個叫做 c-Jun 的致癌基因在其 5’端非轉 譯區亦有相當高的機率形成 IRES 的結構，接著利用 Rabbit Reticulocyte lysate 的系統進行 in vitro translation 的實驗和一系列 pRF 及 phpRF 的質體，將 c-Jun 5’端非轉譯區的全長和一些 deletion 的 區域接入兩各 cistron 間的 inter region 後，再以 reporter assay 的方式初步證實了 c-Jun 的 5’端非轉 譯區具有 IRES 的活性。並且在兩株來自同源但是癌化程度不同的人類大腸直腸癌的細胞中，發 現 c-Jun 的 IRES 活性是具有生理意義的。
接著，再進一步的利用 biotin-pulled down 的技術搭配 mass spectrometry 的分析，我們也發現了 RNA 結合蛋白 hnRNPA2/B1 會結合到 c-Jun 的 5’端非轉譯區，且這樣的現象也更進一步的以 RNA 免疫沉降法的方式確認，進而發現了調控 c-Jun IRES 活性的 IRES-interacting trans-acting factors (ITAF)即為 hnRNPA2/B1。
接下來，為了更進一步的確認 RNA 結合蛋白 hnRNPA2/B1 在 c-Jun 的蛋白轉譯上有明確的調控 角色，於是利用基因 knockdown 的技術將 hnRNPA2/B1 knockdown 後觀察到 c-Jun 蛋白質會受其 影響而減少其表現量，而反之在細胞中過度表現 hnRNPA2/B1 的話則發現 c-Jun 的蛋白質表現量 也會跟著增加而確定 hnRNPA2/B1 和 c-Jun 兩者間存在著正相關的影響。另外，為了更確實的證 明 hnRNPA2/B1 對 c-Jun 的影響在於其轉譯層級上的調控，我們也利用了蔗糖梯度 (sucrose gradient)的方式分別收集細胞中 free RNA、40/60S subunit 及 polysome 等不同的狀態，發現若 將 hnRNPA2/B1 knockdown 後，在轉譯活化的分層中(polysome 的部份)，c-Jun mRNA 的量與對
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照組比較起來有顯著的減少，顯示在細胞中，若 hnRNPA2/B1 的表現減少的話，就會減少 c-Jun mRNA 在 polysome fraction 的存在比例，顯示了 hnRNPA2/B1 在 c-Jun 蛋白轉譯的調控上扮演重 要的角色。
而我們也在 160 片臨床檢體中，利用免疫組織染色(IHC)的方式觀察到在比較惡化的大腸直腸癌 中，c-Jun 與 hnRNPA2/B1 的表現皆相較於較不惡化的癌組織來的高，且這樣的差異以統計分析 的方式做一整理是有顯著意義的。因此由以上的實驗，我們除了確定人類致癌基因 c-Jun 也像病 毒一樣具有 IRES 的結構可轉譯蛋白質之外，也找出了與其結合並參與調控其轉譯能力的 RNA 結合蛋白。並且在大腸直腸癌的細胞及臨床組織中發現了這樣的調控是具有生理意義的。
而已上所建立的實驗技術除了幫助我們發現人類 c-Jun 具有 IRES 的活性及找出與其結合的 ITAF 之外，在未來，我們也可利用這些已建立的技術進一步的探討腸病毒(EV71)如何影響宿主 細胞以及找尋在宿主細胞中是靠哪些 ITAF 幫助腸病毒進行蛋白合成，以及探討病毒與宿主間蛋 白合成機制的交互作用關係，以期了解腸病毒的致病機轉而找出適當的藥物治療方式。
二、研究或教學或科技研發與管理成效評估（由計畫主持人或單位主管填寫）
Please evaluate the performance of research, teaching or science and technology R&D and management Work: ( To be completed by Project Investigator or Head of Department/Center)
(1)是否達到延攬預期目標？
Has the expected goal of recruitment been achieved?
是, 目前工作進度及成果有達預期延攬目標。
(2)研究或教學或科技研發與管理的方法、專業知識及進度如何？
What are the methods, professional knowledge, and progress of the research, teaching, or R&D and management work?
雖然有些實驗方法的瓶頸尚待解決，但目前的工作進度大致符合預期，有些想釐清的實驗結 果目前已經完成。
(3)受延攬人之研究或教學或科技研發與管理成果對該計畫(或貴單位)助益如何？
How have the research, teaching, or R&D and management results of the employed person given benefit to the project (or your unit)?
受延攬人之研究成果對本計劃未來後續的研究工作有很大的助益。
(4)受延攬人於補助期間對貴單位或國內相關學術科技領域助益如何？
How has the employed person, during his or her term of employment, benefited your unit or the relevant domestic academic field?
受延攬人於補助期間所建立的實驗方法對後續探討腸病毒在體內的致病機轉有很大的幫助，
而目前的研究成果亦在學術上提供了一個新的發現。
(5)具體工作績效或研究或教學或科技研發與管理成果：
Please describe the specific work performance, or the results of research, teaching, or R&D and management work:
受延攬人之具體工作績效良好，且在研究成果上也有不錯的發現。
(6)是否續聘受聘人? Will you continue hiring the employed person? □續聘Yes 不續聘No
※此報告表篇幅以三～四頁為原則。This report form should be limited to 3-4 pages in principle.
※此表格可上延攬優秀人才成果報告繳交說明網頁下載。
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