前 言
氣單胞菌屬(Aeromonas spp.)是屬於革 蘭氏陰性菌,呈直桿狀或有時少數呈微弧狀 之兼性厭氧細菌(facultatively anaerobic bac- teria),不形成孢子(non-spore),具單一極 鞭毛(polar monotrichous)(1)。1986 年後,以 分子生物學為基礎,分析RNA 含量、序列及 RNA-DNA 雜合(hybridization)資料後,將
氣單胞菌屬由 (弧菌科)重新分
類為 (氣單胞菌科)。該屬
菌株依最適生長溫度之不同,可簡單區分為 具嗜冷(psychrophiles, 22~28℃)、無運動性 (non-motile)的 一 群 以 及 嗜 溫(mesophiles, 35~37℃)、具運動性(motile)的另一群。
前者為與魚類疾病有關之 ;後
者是與人類疾病有關,包括 、
及 。廣泛存在於各種自然水域
(淡水、海水、下水道、污水、土壤及污泥 等),食物(蛋、牛肉、豬肉等)中也可檢 測到,人體、溫血動物及其排泄物中偶而亦 能分離出來,是與人類疾病有關的重要病原
市售即食水產品中氣單胞菌污染之調查
蘇秀琴 吳克慧 賈東明 林宜蓉 傅曉萍 鄭守訓
南部檢驗站
摘 要
為調查臺灣地區日本料理店、餐廳、傳統市場、生鮮超市及超商 所販售之即食水產品中氣單胞菌污染現況,於民國93 年 6 月至 11 月 期間,委請各縣市(政府)衛生局採集生魚片 83 件、生蠔 18 件、蝦手 卷62 件及烤鰻魚 67 件,共計 230 件。檢體抽樣後立即以快遞冷藏送 達實驗室,並參考USDA/FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 3rd Edition/1998 及相關文獻資料,進行氣單胞菌菌株之分離及鑑定,結 果檢出42 件,佔 18.3%,其中檢出 28 件、
8 件及 6 件。氣單胞菌存在自然環境,由生鮮水產品 中檢出該菌,雖屬自然現象,惟即時水產品之前處理若處理不當,仍 有於產品中繼續繁殖或交叉污染,而致危害人體健康之虞。所以對於 檢出氣單胞菌之檢體,各衛生局應以該菌為指標菌,針對即食水產品 製程之衛生,要求廠商提供品管資料,並依食品良好衛生規範查核其 衛生狀況,對於不符合食品良好衛生規範者,依法處理,以保障消費 者之健康。
關鍵詞:氣單胞菌(Aeromonads)、即食水產品(ready-to-eat
fishery product)。
菌之一(1,2)。1982 年日本厚生省將
及 列為食品病原菌(3),1984 年美國 FDA 亦將氣單胞菌列為新的食品病原菌(4)。
近年來關於氣單胞菌致病報告有增加的 趨勢,包括引起心內膜炎(endocarditis)、腸 胃 炎(gastroenteritis)、腹 膜 炎(peritoni- tis)、肺炎(pneumonia)、敗血症(septi- cemia)、蜂窩組織炎(cellulitis)、溶血性尿 毒及尿道感染等。其感染途徑可經由飲水、
創傷、刺傷之傷口及食物等傳播,從臨床及 流行病學的證據指出,氣單胞菌是腸道病原 菌,雖然很少有完整的流行病學爆發紀錄,
但若是免疫不完全或有腸胃道、肝膽疾病患 者,在其受感染後,致病之風險更高。氣單 胞菌是屬具潛在致病性之細菌,感染後會引 起嚴重之腹瀉,也是最常由食物引起疾病中 被檢出的菌株(5,6)。
日本料理一向偏好使用大量水產品取 代 牛、豬、雞 肉,作 為 動 物 性 蛋 白 質 的 來 源。調理方式以清淡、簡單、精緻著稱,生 魚片、生蠔、烤鰻魚、蝦手捲則是頗受大眾 喜好的即食生鮮與熟食水產品。然而,魚貝 類肉質組織因含水分多脂肪少,體表附著之 細菌比禽畜肉多且無筋腱及脂肪來阻止細菌 入侵,故極易產生肉品腐敗現象(7)。氣單胞菌 遍佈於各種水域中,海中生物之帶菌率極 高,若水產食品的貯藏溫度不當,即能促使 此菌迅速繁殖,當繁殖到足以引起中毒之菌 數時,被污染之食品在外觀上雖然呈現新鮮 狀態,極易被誤食而引起食品中毒。魚貝類 向來是食品中毒之高危險群,尤其國人於夏 天嗜食海產食品如:生魚片、生蠔等,故在 處理這些料理時,必需特別注重食品的來 源,工作人員的個人衛生習慣及所使用的用 具如:砧板、刀具、碗盤等之清洗,以避免
污染食品,造成食品中毒事件。
在國外 於生鮮水產品中的
檢出率由37 ~ 90%不等(8),國內亦有很高的檢
出率(2,9),本調查則以市售即食之水產品為對
象,以暸解其衛生狀況,檢驗結果提供給有 關單位行政管理參考,以確保即食水產品之 安全,維護大眾健康。
材料與方法
一、檢體來源
於民國93 年 6 月至 11 月期間由本局委 請臺灣地區23 個縣市(臺北市、高雄市、基 隆市、臺北縣、桃園縣、新竹縣、新竹市、
苗 栗 縣、台 中 縣、台 中 市、彰 化 縣、南 投 縣、雲林縣、嘉義縣、嘉義市、台南縣、台 南市、高雄縣、屏東縣、宜蘭縣、花蓮縣、
台東縣及澎湖縣)之衛生局,採集即食水產 品檢體,每縣市各10 件,共計 230 件。檢體 包括魚類(生魚片)83 件、甲殼類(生蠔)
18 件、蝦手卷 62 件、紅燒鰻魚 67 件等 4 類。
檢體由專人或宅急便快遞冷藏方式送達實驗 室進行檢驗。
二、培養基及試劑
1. 稀釋液:無菌生理食鹽水。
2. 選擇性培養基-澱粉酚紅安匹西林培養基 (Starch phenol red- ampicillin agar, SPA):
Starch phenol red agar (Becton Dickinson microbiology system, USA) 以 121℃滅菌 15 分鐘,待冷卻至約 50℃時,加入經過 濾 除 菌 之 安 匹 西 林(Ampicillin:純 度 99.8%, Sigma Co., Lot. 063K0522.
USA.),使其最終濃度為 10 µg/mL。
3. 篩選用培養基-三糖鐵培養基(Triple sugar
iron agar, TSI): Merck KgaA, No.
1.03915, Germany。
4. 純化用培養基-胰化酪蛋白-大豆培養基 (Trypticase soy agar, TSA): Difco Lab- oratories, No.0369-17-6, USA。
5. MR-VP 培養液(MR-VP broth):Merck KgaA, No.1.05712, Germany。
6. 氧 化 試 劑(Oxidase test reagent):
bioMerieux, France。
7. 歐 普 氏 試 劑(Voges-Prokauer test reag- ents, VP reagent):bioMerieux, France。
三、氣單胞菌之檢驗方法
參考USDA/FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 3rdEdition/1998(10)及相關文獻資料
(1、2、11),進行菌株之分離及鑑定。
稱取檢體50 g,加入無菌生理食鹽水 450 mL,充分混合均勻,即為 10 倍稀釋檢液。使 用滅菌之吸管,吸取10 倍稀釋檢液 10 mL,
加入稀釋液90 mL 中,依序作成一系列適當 之100 倍、1000 倍稀釋檢液。自各系列稀釋 檢液中取0.1 mL,在澱粉酚紅安匹西林培養 基表面以曲玻棒塗抹(二重複),於35℃培 養18~24 小時,觀察所形成菌落之型態。氣 單胞菌在澱粉酚紅安匹西林培養基上的可疑 菌落顏色為黃色,外緣成平整形,在澱粉酚 紅安匹西林培養基背景為黃色,在固態培養 基上有游移(swarming)的現象(2)。挑選可疑 菌落劃線於TSA 培養基,於 35℃培養 18~24 小時,鉤取單一菌落進行氧化?反應,正反應 者,續利用斜面劃線及穿刺法接種於 TSI 斜 面培養基中,於35℃培養 24 小時後開始觀察 直至48±2 小時,可疑之氣單胞菌在 TSI 斜面 培養基之斜面呈紅色(鹼性),底部呈黃色
(酸性),但無氣體或硫化氫產生。符合結 果者,進行革蘭氏染色及鏡檢,並以革蘭氏
陰性菌鑑定卡(GNI identification card, Bio- Merieux Vitek, Inc., France )配合 Vitek 微生 物全自動鑑定儀(VITEK system, France)進行生 化試驗以鑑定菌株種類。
結果與討論
本調查係針對台灣地區23 個縣市,每一 縣市各抽樣10 件檢體,抽樣地點分別為日本 料理店、餐廳、傳統市場、生鮮超級市場及 超商等(見表一)共計230 件,檢體種類包 括:生魚片、生蠔、蝦手卷及烤鰻魚等。230 件檢體中檢出 者共計28 件、
者8 件及 A. sobria 者 6 件,總計有 42 件檢體檢出氣單胞菌,檢出率為18.3% 。其 中生魚片83 件檢體,檢出 19 件,檢出率為 22.9%;生蠔 18 件檢體,檢出 6 件,檢出率 為33.3%;蝦手卷 62 件檢體,檢出 16 件,檢 出率為25.8%;烤鰻魚 67 件檢體,僅檢出 1 件,檢出率為1.5%(見表二)。由於檢測之 鰻魚皆為經加熱處理之產品,且大部分為冷 凍真空包裝,故僅 1 件抽驗於餐廳之散裝檢 體中檢出 ,菌量為9.0 102 CFU/g,
相較於其他完整包裝之冷凍烤鰻魚,該產品 可能是受污染所致,因於同一餐廳中抽樣之 生魚片檢出A. caviae,菌量為 1.0 102 CFU/
g 及蝦手卷檢出 A .sobria,菌量為 2.4 104 CFU/g。其他即食水產品,如生魚片類,是於 製作當日,先經洗淨、去鱗、去骨、去內臟 等前處理後,再切成所需要的形狀;而生蠔 則經洗淨後,撥開即供食用;蝦手卷中之鮮 蝦、海 苔、蘆 筍 及 沙 拉 醬 等 材 料 之 處 裡 過 程,極易受到微生物污染。這些水產食品不 論是即時食用、運送途中及展示期間等均需 加以冷藏處理,故原料來源、清洗方式及貯 藏溫度等即成為微生物繁殖多寡的主要因
表一、台灣地區各縣市市售水產品抽樣情形
縣市別
抽樣地點(件數)
總抽驗件數 日本料理店及
餐廳 傳統市場 生鮮超商及
超級市場 其他*
台北市 8 0 2 0 10
高雄市 6 3 1 0 10
基隆市 5 0 5 0 10
台北縣 10 0 0 0 10
桃園縣 7 0 3 0 10
新竹縣 8 0 2 0 10
新竹市 7 0 3 0 10
苗栗縣 6 0 0 3 9
台中縣 6 2 0 2 10
台中市 4 2 5 0 11
彰化縣 6 0 4 0 10
南投縣 6 0 4 0 10
雲林縣 4 0 1 5 10
嘉義縣 4 6 0 0 10
嘉義市 10 0 0 0 10
台南縣 4 0 6 0 10
台南市 10 0 0 0 10
高雄縣 6 0 4 0 10
屏東縣 6 0 1 3 10
宜蘭縣 10 0 0 0 10
花蓮縣 10 0 0 0 10
台東縣 7 3 0 0 10
澎湖縣 9 0 1 0 10
合 計 159 16 42 13 230
* 表示抽驗地點未明確標示。
素。
大部分的氣單胞菌株能緩慢的生長於一 般的冷藏溫度下(5℃),但一旦溫度上升,
即使是增加很少的溫度,亦能使此菌株快速 生長,故當儲存食物時,溫度如偏高,即使 相當短的時間,亦能使氣單胞菌快速生長(1), 故檢體在運送過程,皆以冷藏快捷運達本局 中、南、東各檢驗站,立即進行檢測。檢出 的42 件檢體中,不論其檢出為 A. caviae、 A.
hydrophlila 或 A. sobria,其 菌 量 皆 落 在 102 105 CFU/g(見表三)。於生魚片、蝦手 卷或生蠔中所檢出之菌量則並無明顯差異。
此次調查中以A. caviae 之檢出率 12.2%為最 高,相較於本局於83 年度「市售生鮮水產品 中Aeromonas 之分離」(9)調查結果,A. sobria 之檢出率30%為最高,有顯著不同,且檢出
率也明顯下降,可能原因為該計畫抽驗之檢 體為市場上未經處理之新鮮魚類,與本計畫 不同所致。至於抽驗地點分布與檢出情形所 得結果,仍然以日本料理店及餐廳之檢出率 20.1%為高;而傳統市場及生鮮超市之 12.2%
及16.7%較低,可能原因為對於傳統市場及生 鮮超市抽驗檢體數較少所致。
我國並未將氣單胞菌列為食品中毒原因 菌,然而在民國92 年度本局對於食品中毒案 204 件檢體所作氣單胞菌檢測,結果檢出 19 件檢體(2)。雖然在國外曾發生因氣單胞菌造成 之食品中毒案件,但並未因此造成大的爆發
流行(5,6),食品中檢出該屬細菌,並不代表人
類 一 定 會 被 感 染 而 造 成 疾 病,年 齡、免 疫 力、感染劑量、健康情形及菌體是否會產生 足量的毒素等均是須考量之因素。因此加強 表二、市售即食水產品種類、採樣數及氣單胞菌之檢出情形
分 類 採樣件數 檢出件數 總 計
(檢出率%)
A. caviae A. hydrophila A. sobria
生魚片 83 10 6 3 19(22.9)
生 蠔 18 6 0 0 6(33.3)
蝦手卷 62 11 2 3 16(25.8)
烤鰻魚 67 1 0 0 1( 1.5)
總 計 230 28 8 6 42(18.3)
表三、市售即食水產品中檢出氣單胞菌之菌數(CFU/g)分布統計
分 類 菌數(CFU/g)
A. caviae A. hydrophila A. sobria 生魚片 1.2 103 ~ 8.5 104 8.0 102 ~ 7.5 104 1.0 103 ~ 5.0 104
生 蠔 9.2 103 ~ 5.5 105 *** ***
蝦手卷 9.0 102 ~ 5.4 105 1.2 103~ 3.5 103 2.4 104 ~ 3.7 105
烤鰻魚 9.0 102 *** ***
*** 表示未檢出
衛生管理及衛生安全宣導措施,並建議業者 以風險評估的角度著手,製造食品時應特別 注意:1.向衛生可靠和信譽良好的店舖購買海 鮮及其他原材料。2.確保以最佳方式儲存食物
-食物之冷凍溫度必須為-18℃或以下,冷藏 溫度必須為4℃或以下;未經烹煮的材料必須 與經配製的食物分開存放,以免交叉污染。3.
確保使用新鮮的海鮮-不應儲存過量的海鮮及 存貨應採用「先入先出」為原則。4.配製食物 時及在處理食物的過程中,須遵守衛生守則- 重視個人衛生及工作範圍須清潔衛生。製造 業者能從原料之管理著手,以求減少受微生 物污染及有效抑制微生物繁殖才是致本之 道。
表四、市售即食水產品中檢出氣單胞菌之 檢驗結果與抽樣地點之分布情形 抽 購 地 點 檢出件數/抽樣件數(%) 日本料理店、餐廳 32/159(20.1)
傳統市場 2/16 (12.5)
生鮮超級市場、超商 7/42 (16.7)
其他 1/13 (7.7)
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Investigation on Aeromonas spp. in Ready-to-eat Fishery Product
HSIU-CHIN SU
1, KO-HUI WU
1, DUNG-MING JEA
2,YI-RONG LIN
2, HSIAO-PING FU
3AND SHOU-HSUN CHENG
11 Southern District Laboratory 2 Central District Laboratory 3 Eastern District Laboratory
ABSTRACT
In order to realize the presence of Aeromonas spp. in ready-to-eat fishery product, 230 samples including sashimi, roasted eel , shrimp roll and raw oyster collected from Taiwan area were examined. These samples were analyzed by a method compiled in "USDA/FSIS Microbiology Laboratory Guidebook." The result showed that A. caviae were found in 28 samples, A. hydrophila in 8 samples and A. sobria in 6 samples.