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一、菌種的分離與鑑定
綜合表型特徵分析的實驗結果，以及 16S rRNA 基因序列分析、
ARDRA、質體分析等不同方法所獲得之結果的相互支持下，可知在 本 研 究 中 由 透 抽 體 內 所 分 離 出 的 三 株 發 光 細 菌 品 系 皆 為 Photobacterium leiognathi。
就已知的文獻搜尋，尚未有過從台灣沿海的 Uroteuthis 屬鎖管類 物種身上分離出海洋發光細菌的報導。雖有學者進行台灣沿岸細菌的 收集、分類與鑑定的研究，並證實 Photobacterium leiognathi 存在於 台灣沿海海域﹙邱秀慧, 2006﹚，但直接從台灣沿海海域的鎖管類體 內分離鑑定出 P. leiognathi 則未曾被報導過。
二、不同理化因子對於細菌發光強度的影響 1. 溫度與 pH 值
由實驗結果可知，本研究中從透抽體內分離出來的三株 P.
leiognathi 品系，其發光強度間有相當大的差異，雖然由於曝光時間
不同而無法做直接的比較，但由圖三十二便可知道其間確實有著很大 的落差。不同品系有最適合其發光的溫度範圍，且品系之間並不相 同。最適合 L 品系細菌發光的溫度範圍在 20-30°C 之間，D 品系則 在 20-25°C 之間，而適合 Dalt品系發光的溫度範圍則侷限於 20°C 上 下。
同樣地，細菌亦有適合其發光的 pH 值範圍；圖三十三中，適合 三株 P. leiognathi 品系發光的 pH 值範圍均在 pH 7 左右，Dalt品系的 最適合發光 pH 值較其他兩品系稍微向低 pH 值的方向偏移。
2. 鹽度
不同的發光細菌，其所適合生長的環境鹽分濃度可能也不盡相 同。例如 V. fischeri 和 P. leiognathi 不能在含有 8% NaCl 的 YP﹙yeast extract-peptone﹚培養基上生長，但 V. harveyi 則能適應較廣範圍的鹽 度變化﹙1-8%﹚；這說明了為何 V. harveyi 能夠存活於鹽度較高的潟 湖中，而 V. fischeri 則很少在這樣的環境裡被發現﹙Shilo & Yetinson, 1979﹚。
因此，適合細菌發光的環境鹽度範圍在不同品系或菌種間可能也 有所差異。由圖三十四可看出，不同的 P. leiognathi 品系，其發光現 象對於環境鹽分濃度變化的反應並不完全相同。雖然三株品系的發光 強度均隨鹽度的上升而減弱，但 Dalt品系在鹽度達到 7%以上偵測不 到發光的現象，而 D 品系的發光強度對於環境鹽分濃度的變化則較 其餘兩株品系敏感。
3. 滲透壓
由圖三十五可以看出 L 品系在蔗糖濃度達到 10%之後，其發光 強度才大幅度下降，而 D 品系在蔗糖濃度超過 5%之後，其發光強度 便大幅度下降；Dalt品系則是當蔗糖濃度達到 5%，其發光強度便已減 弱至低點。顯示三株品系的發光現象受到滲透壓影響的程度並不相 同。
4. 紫外光
雖然細菌發光的遺傳基礎與生化反應已被廣泛地研究，但這個反 應過程所扮演的生物角色卻仍不清楚。前人研究指出海洋細菌 Vibrio harveyi 的發光現象會誘發DNA 的修補機制，由於其暗突變品系﹙dark
mutant﹚顯出特別高的 UV 敏感性，故推論很可能是因為強化的光反 應﹙photoreactivation﹚所導致﹙Czyz et al., 2000﹚。
但由圖三十六可發現，當受到相同能量的紫外光照射時，對於三 株發光細菌品系發光強度的影響有很大的不同。L 品系的發光強度在 實驗所測試的紫外光能量範圍內，隨著能量的增強而明顯的上升。D 品系的發光強度在一定範圍內的反應與 L 品系相似，但當能量繼續加 強，其發光強度反而開始下降。而 Dalt品系發光強度則不僅不隨著紫 外光能量的增強而提升，反而出現隨之下降的趨勢。這樣的現象似乎 與前人研究所獲得的結果並不一致，推測可能是因為即使是同種細 菌，不同品系之間的生化活性亦常有所差異。
5. 鋅離子濃度
ZnCl2 溶於水中後會解離出 Zn2+。Zn2+濃度經常是水污染的一個 指標；過量的鋅離子存在水中經常會對生物造成毒性，影響細菌的生 化反應與生理功能﹙Irwin, 1997﹚。
Tamminen & Virta 曾於 2006 年探討拍立得底片在捕捉發光訊號 上的實用性，其研究中同時使用光度計與拍立得底片來進行鋅離子濃 度對發光強度影響的實驗，並比較兩者結果的差異。在本研究中，由 於使用數位相機作為捕捉發光訊號的工具，因此原先亦欲探討數位相 機與光度計之間的差異，故進行鋅離子濃度對於發光強度影響的實 驗，並期望能與前人研究中的結果進行比對。然而由於本研究所使用 的細菌品系與前人研究並不相同，故最後並無法將實驗結果與前人研 究作比較；然而由實驗結果中仍能看出，不同品系發光強度在受到不 同鋅離子濃度影響時，其效應還是有所差異。
由圖三十七可以看出，當水中鋅離子濃度增加時，三株發光細菌
在鋅離子濃度達到 3.2 mg/l 時便大幅下滑，而後則漸趨平緩。D 品系 的發光強度則是隨著 Zn2+濃度的增加而持續地減弱。D alt品系的發光 強度雖然也是隨著 Zn2+濃度的增加而逐漸減弱，但其幅度較 D 品系 來得平緩。
6. 過氧化氫
前人研究中認為生物發光的現象在最初可能並不是為了光的產 生而演化出來的，反而更像是一種對於含氧大氣的解毒機制（Łyżeń &
Węgrzyn, 2005）。且在發光反應過程中，細菌螢光酵素催化長鏈脂 醛的氧化並還原黃素單核苷酸，因而推測對抗氧化壓力也可能是細菌 發光現象的演化趨力﹙Rees et al., 1998﹚。
三株發光細菌品系在環境中存在過氧化氫時，皆會因而反應出較 高的發光強度，但對於過氧化氫的敏感性亦不完全相同。圖三十八 中，L 品系與 D 品系的發光強度上升幅度較為相近，而 Dalt品系的上 升幅度則較為平緩。
7. 光譜偏移﹙spectrum shift﹚現象
前人研究中曾指出，V. fischeri 的一個品系在其細胞內一特定螢 光蛋白存在與否的情形下，其發出的光會出現光譜偏移的現象，亦即 所發出光的波長改變﹙Eckstein et al., 1990﹚；然而海洋發光細菌光波 長的改變是否可能影響其共生海洋動物的生態行為，目前並無相關的 研究報導。
雖然本研究中並沒有直接測量各品系細菌所發出的光波長，但由 各實驗結果圖中的紅、綠、藍三色訊號值亦可看出，三株品系所發出 的光之波長並不相同，L 品系偏向藍色，D 品系則偏向綠色；Dalt品
系雖然也是偏向綠色，但其發出的光中，紅色訊號值的比例較其餘兩 株品系高了許多。
然而當環境中的理化因子發生改變時，並不會改變三株品系所發 出光的三色訊號值的組成比例，亦即沒有光波長改變的現象。D、Dalt
品系雖然在某些情形下出現紅色訊號值比例稍微產生波動的現象，但 因並無明顯規律，且無法排除非為實驗誤差所導致，故此一現象尚待 進一步的研究探討。
綜合以上的結果顯示，雖然不同理化因子對於不同品系的發光強 度有不同程度的影響，但由於本研究中所分離出的三株 P. leiognathi 品系的發光強度差異甚大，即使是在不同理化因子處理下，發光強度 的排位並不會有所改變，同時亦無明顯光波長改變的現象。故推論三 株品系發光強度受到不同程度影響的現象並不會影響其共生海洋動 物的生態行為；但各品系在受到不同理化因子影響時而產生發光強度 受到抑制或是激發的現象，仍可能是海洋動物利用來調控體內細菌發 光強度的一種可能機制。
三、測量發光強度的方法
將發光細菌應用在生態毒理學試驗的優點在於快速、便宜，且簡 單容易測量；然而，在欲進行發光強度的定量時卻容易遇到經濟上的 限制。雖然市面上有許多光度計可供選擇，然而對於落後地區的有關 當局或是研究者而言，即便是最便宜的設備也仍然是一個很重的負 擔。前人研究中曾使用X光片偵測細菌菌落所發出的光﹙Wood &
DeLuca, 1987﹚，亦有學者曾發表發光細菌培養於96孔盤中的照片
﹙Simpson et al., 2001﹚；可見得使用普通攝影底片來偵測細菌發出
細菌培養液進行曝光後，以掃描器將其轉換為數位檔案格式，並用軟 體分析發光訊號強弱，其結果與使用光度計進行發光強度的定量分析 所獲得的結果相似﹙Tamminen & Virta, 2006﹚。
本研究中所使用的數位單眼相機在近年來由於市場的需求增加 與工藝技術的日漸進步，其價格已下降至一般消費大眾多能接受的程 度。與拍立得底片相較之下，其每張照片的平均成本在拍攝量到達一 定程度後，便會低於拍立得底片的成本。且數位相機能夠直接將所接 收到的光訊號轉換成數位檔案，不必再經過掃描器的協助，可同時降 低訊號在轉換過程當中的損失程度。而由於數位相機不使用實體底 片，故也不必將底片沖洗成照片，也減少了儲存檔案時所需的硬體空 間。
