不同萃取法對雲芝子實體的活性成分分析比較研究 黃凱煜、楊博文
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摘 要
雲芝是常見生長於腐木上的一種專性好氣菌，他主要的功能性成分為多醣，而該多醣中主要含有一些多醣?，雲芝的多醣?
具有作為免疫調解劑的潛力，常被用於輔助癌症的化學治療與放射線治療和許多傳染病上。本實驗中運用了田口氏直交試 驗設計法L25和L9直交表。實驗因子中包括如:萃取溶劑、溫度、時間和固液比，顯示不同萃取情形對有效成份的產量。本 研究主要目的在於萃取分析雲芝子實體中的有效成分總醣、腺?、總三?並比較依不同萃取法對總醣、腺?、總三?產量上的 差異。
在比較雲芝不同萃取技術方面，以水作為溶劑、溫度100 oC、萃取時間30分鐘、固液比1:20條件下，微波輔助萃取總醣產 量較超音波輔助萃取和熱迴流萃取產量高；以水作為溶劑、溫度100 oC、總萃取時間30分鐘、固液比1:25，微波萃取腺?產 量較熱迴流萃取和超音波輔助萃取產量高；以75 % 乙醇溶液為溶劑、溫度80 oC、萃取時間30分鐘、固液比1:30，微波萃 取總三?產量較超音波輔助萃取和熱迴流萃取產量高。
關鍵詞 : 雲芝、多醣、多醣?、總醣、腺?、總三?、微波輔助萃取、超音波輔助萃取、田口氏直交試驗設計法 目錄
封面內頁 簽名頁 授權書iii 中文摘要iv 英文摘要v 誌謝vii 目錄viii 圖目錄xii 表目錄xiv 附錄xvi
1.前言1 2.文獻回顧3 2.1 雲芝的簡介3 2.1.1 雲芝的分類3 2.1.2 別名3 2.1.3 分布4
2.1.4 雲芝的形態和特徵6 2.1.5 成分和藥理7 2.2 雲芝之有效成分8 2.2.1 多醣體8 2.2.2 雲芝多醣9
2.2.3 雲芝多醣的生理活性11 2.2.4 雲芝醣?14
2.2.5 腺?18
2.2.6 腺?臨床研究與生理活性20 2.2.7 三?類22
2.2.8 三?的近代藥理研究24 2.3 不同萃取方法之介紹28 2.3.1 微波輔助萃取28 2.3.2 微波輔助萃取的特點28
2.3.3 微波輔助萃取應用實例29 2.3.4 超音波輔助萃取原理30 2.3.5 超音波輔助萃取的特點30 2.3.6 熱迴流萃取原理31 3.材料與方法32
3.1 實驗材料32 3.1.1 植物來源32 3.1.2 藥品清單32 3.1.3 儀器清單32 3.2 實驗方法33 3.2.1 樣品前處理33
3.2.2 不同萃取方式之條件探討34
3.2.2.1 微波輔助萃取(Microwave-assisted extraction,MAE)34 3.2.2.2 超音波輔助萃取(Ultrasonic-assisted extraction ,UAE)36 3.2.2.3 熱迴流萃取法(Heating reflux extraction, HRE)37 3.2.4 成分分析38
3.2.4.1 總醣分析38 3.2.4.2 總醣標準品製備38 3.2.4.3 粗三?分析38
3.2.4.4 熊果酸標準品的製備39 3.2.4.5 腺?分析39
3.2.4.6 腺?標準品製備40 3.2.5 統計分析40 4.結果與討論41
4.1 微波輔助萃取雲芝子實體L25(45)分析結果41 4.1.1 微波萃取總醣之L25(45)分析結果43
4.1.2 微波萃取總醣較佳條件L25直交表的探討45 4.1.3 微波萃取腺?之L25(45)分析結果46
4.1.4 微波萃取腺?較佳條件L25直交表的探討46 4.1.5 微波萃取總三?之L25(45)分析結果48 4.1.6 微波萃取三?較佳條件L25直交表的探討49 4.1.7 直交試驗法L25(45)試驗結果探討50 4.1.8 總三?分析方法的修定50
4.2 微波輔助萃取雲芝子實體L9(33)表分析結果51 4.2.1 微波萃取總醣L9(33)直交試驗結果51
4.2.2 微波萃取總醣L9(33)直交表較佳條件的探討54 4.2.3 微波萃取腺?L9(33)直交試驗結果57
4.2.4 微波萃取腺?L9(33)直交表較佳條件的探討60 4.2.5 微波萃取總三?L9(33)直交試驗結果62
4.2.6 微波萃取總三?L9(33)直交表較佳條件的探討65 4.3 超音波輔助萃取雲芝子實體之分析結果68
4.3.1 探討超音波萃取雲芝子實體-萃取時間對總醣產量之影響68 4.3.2 探討超音波萃取雲芝子實體-萃取時間對腺?產量之影響72 4.3.3 探討超音波萃取雲芝子實體-萃取時間對總三?產量之影響75 4.4 熱迴流萃取雲芝子實體之分析結果79
4.4.1 探討熱迴流萃取雲芝子實體-萃取時間對總醣產量之影響79 4.4.2 探討熱迴流萃取雲芝子實體-萃取時間對腺?產量之影響83 4.4.3 探討熱迴流萃取雲芝子實體-萃取時間對總醣產量之影響86
4.4.4 微波、超音波、熱迴流在不同萃取時間上之總醣、腺?、粗三?產量差異性的比較90 5.結論92
參考文獻94 圖目錄
圖2.1 雲芝蕈體(子實體)5 圖2.2 雲芝多醣的分子結構8
圖2.3 具有抗腫瘤活性之多醣體結構10 圖2.4 雲芝醣?的回收與純化方式17 圖2.5 腺?的化學結構18
圖2.6 三磷酸腺?的代謝降解19 圖2.7 腺?降解結構流程圖19
圖2.8 腺?往返細胞內與細胞外的路徑20 圖2.9 自然界中常見的10種三?類化合物23 圖2.10 羊毛脂烷型三?之結構24
圖4.1 微波萃取總醣L25(45)的S/N比主要效應試算圖45 圖4.2 微波萃取腺?L25(45)的S/N比主要效應試算圖47 圖4.3 微波萃取總三?L25(45)的S/N比主要效應試算圖49 圖4.4 微波萃取總醣L9(33)的S/N比主要效應試算圖53
圖4.5 以微波最適萃取條件進行對雲芝子實體連續萃取十次總醣56 圖4.6 微波萃取腺?L9(33)的S/N比主要效應試算圖59
圖4.7 以微波最適萃取條件進行對雲芝子實體連續萃取五次腺?61 圖4.8 微波萃取總三?L9(33)的S/N比主要效應試算圖 64
圖4.9 以微波最適萃取條件進行對雲芝子實體連續萃取十次腺?67 圖4.10 超音波輔助萃取雲芝子實體-時間對總醣產量的影響68
圖4.11 以超音波最適萃取條件進行對雲芝子實體連續十次萃取總醣之依序產量71 圖4.12 超音波輔助萃取雲芝子實體-時間對腺?產量的影響72
圖4.13 以超音波最適萃取條件進行對雲芝子實體連續十次萃取腺?之依序產量74 圖4.14 超音波輔助萃取雲芝子實體-時間對總三?產量的影響75
圖4.15 以超音波最適萃取條件進行對雲芝子實體連續十次萃取總三?之依序產量78 圖4.16 熱迴流萃取雲芝子實體-時間對總醣產量之影響79
圖4.17 熱迴流最適萃取條件進行對雲芝子實體連續十次萃取總醣之依序產量82 圖4.18 熱迴流萃取雲芝子實體-時間對腺?產量之影響83
圖4.19 熱迴流最適萃取條件進行對雲芝子實體連續五次萃取腺?之依序產量85 圖4.20 熱迴流萃取雲芝子實體-時間對總三?產量之影響86
圖4.21 熱迴流最適萃取條件進行對雲芝子實體連續十次萃取總三?之依序產量89 表目錄
表2.1 PSK和PSP兩種多醣?的回收來源差異性16 表4.1 微波輔助萃取雲芝子實體L25(45)直交表41
表4.2 微波輔助萃取雲芝子實體L25(45)直交實驗設計表及實驗數據42 表4.3 微波萃取總醣L25(45)直交表的訊號雜訊(S/N)比值44
表4.4 微波萃取腺?L25(45)直交表的訊號雜訊(S/N)比值46 表4.5 微波萃取總三?L25(45)直交表的訊號雜 訊(S/N)比值48 表4.6 微波輔助萃取雲芝子實體中總醣L9(33)直交表51
表4.7 微波輔助萃取雲芝子實體總醣L9(33)直交實驗設計表及實驗數據52 表4.8 微波萃取總醣L9(33)直交表的訊號與雜訊(S/N)比值53
表4.9 以微波萃取雲芝子實體中總醣之效率55
表4.10 微波輔助萃取雲芝子實體中腺?L9(33)直交表57
表4.11 微波輔助萃取雲芝子實體腺?L9(33)直交實驗設計表及實驗數據58 表4.12 微波萃取腺?L9(33)直交表的訊號與雜訊(S/N)比值59
表4.13 微波輔助萃取雲芝子實體中的總三?L9(33)直交表62
表4.14 微波輔助萃取雲芝子實體總三?L9(33)直交實驗設計表及實驗數據63 表4.15 微波萃取總三?L9(33)直交表的訊號與雜訊(S/N)比值64
表4.16 以微波萃取雲芝子實體中總三?之效率66 表4.17 以超音波萃取雲芝子實體中總醣之效率70
表4.18 以超音波萃取雲芝子實體中總三?之效率77 表4.19 以熱迴流萃取雲芝子實體中總醣之效率81 表4.20 以熱迴流萃取雲芝子實體中總三?之效率88
表4.21 萃取時間、溶劑、溫度、固液比對不同萃取技術之總醣、腺?及總三?產量比較91 附錄
附錄1 腺?標準品和雲芝萃取物HPLC層析圖100 附錄2 總醣和腺?的標準曲線圖101
附錄3 總三?(熊果酸)的標準曲線圖102 參考文獻
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