干擾病毒複製的小型干擾性核醣核酸分子

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(1)【19】中華民國【12】專利公報（B）【11】證書號數：I429442 【45】公告日：中華民國 103 (2014) 年 03 月 11 日【51】Int. Cl.： A61K31/713 (2006.01). C12N15/64 (2006.01) 發明全 4 頁 . 【54】名稱：干擾病毒複製的小型干擾性核醣核酸分子 SMALL INTERFERING RIBONUCLEIC ACIDS FOR INTERFERING VIRAL REPLICATION 【21】申請案號：100106445 【22】申請日：中華民國 100 (2011) 年 02 月 25 日【11】公開編號：201235043 【43】公開日期：中華民國 101 (2012) 年 09 月 01 日【72】發明人：洪健睿 (TW) HONG, JIANNRUEY；吳鴻程 (TW) WU, HUNGCHENG 【71】申請人：國立成功大學 NATIONAL CHENG KUNG UNIVERSITY 臺南市東區大學路 1 號【74】代理人：蔡坤財；李世章【56】參考文獻：邱傳勝，神經壞死病毒蛋白 α 所誘發魚類細胞株凋亡機制之研究，國立成功大學生物科技研究所碩士論文，2009。 Wu YC et al., Anti-viral mechanism of barramundi Mx against betanodavirus involves the inhibition of viral RNA synthesis through the interference of RdRp. Fish Shellfish Immunol. 2010 Mar;28(3):467-75. Epub 2009 Dec 23. 審查人員：黃教威. [57]申請專利範圍 1. 一種小型干擾性核醣核酸(small interfering ribonucleic acid；siRNA)分子，其具有一第一序列或一第二序列，該第一序列係如序列辨識編號 1 所示，該第二序列係如序列辨識編號 2 所示，且該小型干擾性核醣核酸分子係用以干擾石斑魚背鰭細胞株 GF1(寄存編號為 BCRC 960094)內之石斑魚神經壞死病毒(red-spotted grouper nervous necrosis virus； RGNNV)的一目標基因之表現量。 2. 根據申請專利範圍第 1 項所述之小型干擾性核醣核酸分子，其中該第一序列係具有一髮夾型結構，該髮夾型結構係由一雙股核苷酸結構以及連接該雙股核苷酸結構之一單股核苷酸環型結構所組成，且該雙股核苷酸結構之一股係用以干擾該目標基因之表現量。 3. 根據申請專利範圍第 1 項所述之小型干擾性核醣核酸分子，其中該第二序列為單股核醣核酸分子，且該第二序列係用以干擾該目標基因之表現量。 4. 根據申請專利範圍第 1 項所述之小型干擾性核醣核酸分子，其中該目標基因為核醣核酸依賴型核醣核酸聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase；RdRp)。 5. 一種重組質體，其導入至一石斑魚背鰭細胞株 GF1(寄存編號為 BCRC 960094)內表現一小型干擾性核醣核酸分子，其中該小型干擾性核醣核酸分子具有一第一序列或一第二序列，該第一序列係如序列辨識編號 1 所示，且該第二序列係如序列辨識編號 2 所示。 6. 一種干擾病毒複製的醫藥組合物，其包含根據申請專利範圍第 1 項至第 5 項之任一小型干擾性核醣核酸分子以及藥學上可接受的一載劑，藉以干擾一石斑魚背鰭細胞株 GF1(寄存編號為 BCRC 960094)內之石斑魚神經壞死病毒的一目標基因之表現量。 - 350 -.

(2) (2) 7. 根據申請專利範圍第 6 項所述之干擾病毒複製的醫藥組合物，其中該目標基因為核醣核酸依賴型核醣核酸聚合酶。圖式簡單說明為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之詳細說明如下：第 1 圖係繪示根據本發明一實施例的 RGNNV 的 RNA 1、siRNA 與突變型 siRNA 的序列及二級結構圖。第 2 圖係顯示本發明一實施例利用 RT-PCR 分析細胞內 siRNA 與突變型 siRNA 表現量的瓊脂電泳圖。第 3 圖係係顯示本發明一實施例利用 RGNNV-TN1 感染實施例一之穩定表現 siRNA 之細胞以及穩定表現突變型 siRNA 之細胞的北方墨點分析圖。第 4 圖係顯示本發明一實施例利用 RGNNV-TN1 感染實施例一之穩定表現 siRNA 之細胞以及穩定表現突變型 siRNA 之細胞的西方墨點分析圖。第 5 圖係繪示本發明一實施例利用 RGNNV-TN1 感染實施例一之穩定表現 siRNA 之細胞以及穩定表現突變型 siRNA 之細胞的細胞存活率柱狀圖. - 351 -.

(3) (3). - 352 -.

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