二、成分分析
１、成分鑑別：
•取斑蝥粉末適量，加 CHCl3-HCl(100:1)25ml，振搖 50 分鐘，過夜，濾過，
回收氯仿，殘渣加丙酮溶解，點於矽膠 G 板上，以氯仿-丙酮(95:5)為展開劑，展 開後用 0.04%溴甲酚綠醇溶液顯色，可見與斑蝥素對應的斑點（49）（60）（62）（105）。
‚取樣品粉末 0.1Gm，加水 10ml 冷浸濾過，濾液點於新萃層析濾紙上，以正 丁醇-95%乙醇-冰醋酸-水(4:1:1:2)為展開劑，垂直上行展開，展距 23cm，於 1050C 烘乾，用 0.5% 三酮溶液噴霧，於 1050C 加熱 10 分鐘，斑點顯淺紅至藍紫色，可 見約 5 個斑點（60）（62）（49）。
ƒ取本品粉末 3Gm，加氯仿 20ml，振搖，浸泡 2 小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣 用石油醚(30-600C)洗三次，每次 5ml，小心傾去上清液，殘渣加氯仿 1ml 使溶解，
作為供試品溶液。另取斑蝥素對照品加氯仿製成每 1ml 含 5mg 的溶液，用為對照 品溶液。吸取上述兩種溶液各 5ml，分別點於同一矽膠 G 薄層板上，以氯仿-丙酮 (98:2)為展開劑，展開取出，晒乾，噴以 0.1%溴甲酚綠乙醇溶液，熱風吹至斑點 顯色清晰。供試品色譜中，再與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點（62）
（49）。
２、含量測定
Ａ.斑蝥素的測定：
•紫外分光光度法（49）（60）－斑蝥體內斑蝥素的測定。以氯仿提取斑蝥，600C 水 浴揮去氯仿，真空乾燥，無水乙醇溶解後加乙醇及水使成 95%乙醇溶液，於 228nm 波長處測定吸收度。回收率 99.98%，CV0.719。
‚薄層掃描法（49）（60）－皮擦劑係以斑蝥(I)為主藥製成的外用擦劑，其主要成 分為斑蝥素(II)。I 粗粉以及擦劑分別用鹽酸-氯仿萃取。分取氯仿層，回收氯仿。
殘渣用丙酮溶解製備成樣品液，樣品液採用內存外標兩點法。將對照液Ⅱ和樣品 液分別點於同一塊薄層板上，用氯仿-丙酮(95:5)為展開劑展開，0.04%溴甲酚綠 醇溶液顯色後，薄層掃描儀上測定。測定波長λs=445nm，
λ
R=605nm；狹縫 1.2 x 1.2nm Sx=3。反射法鋸齒形掃描，根據對照品斑點面積值和樣品斑點面積值計算樣品中 II 的含量。實驗平均回收率：I 藥材和皮擦劑分別用 100.9%和 98.4%。ƒ氣相色譜法（49）（60）（120）－用 GC 外標法測定斑蝥(I)體內斑蝥(Ⅱ)含量，將 I 混合，研成細粉，精密稱取 1.25Gm 置具塞三角瓶內，加三氯甲烷 15ml，振搖 30 分鐘，放置 4 小時後，過濾至 25ml 的容量瓶中，殘渣再加 10ml 三氯甲烷浸泡 30 分鐘，過濾至同一容量瓶，自漏斗上添加三氯甲烷沖洗殘渣與濾紙至刻度。搖勻。
配成含生藥 150mg/ml 的溶液，每次進樣 1µl 測得七個 I 樣品含Ⅱ0.55-1.40%。方 法回收率 100.52%。日本島津 GC-7AG 氣相色譜儀(附 FID 和 C-RIA 微處理機)，固 定液：3.5%(w/w)-E301；擔體：101 矽烷化白色擔體(60-80 目)；色譜粒：3mm x 3m 玻璃螺旋柱；柱溫：1850C，氣化室，檢測室溫度均為 2500C；氮氣流速：40ml/分 鐘；空氣流速：500ml/分鐘，氫氣流速：37ml/分鐘；衰減：32。
„取斑蝥粗粉約 1Gm 精密稱定，置具塞三角瓶中，加氯仿 30ml，振搖 15 分鐘，
放置 6 小時，濾過，濾液置 50ml 量瓶中，用氯仿洗滌殘渣與濾紙，洗液濾入同一 量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取斑蝥素氯仿液(1mg/ml)和供試 品溶液各 2
µ
l，注入氣相色譜儀。色譜條件與系統適用性試驗，以甲基矽橡膠(SE-30) 為固定液，塗布濃度為 3.5%；柱溫度為 175±100C；理論板數按斑蝥素峰計算，應 不低於 2600（49）（122）。Ｂ.斑蝥酸鈉的測定：
…絡合滴定法（49）（60）－精密量取斑蝥酸鈉注射液 25ml，置 100ml 容量瓶中，準 確加入 1%氯化鋇(含 2 個結晶水)溶液 20ml，搖勻，置冰箱中過夜，過濾，收集濾 液於三角燒杯中，用水 20ml 分次洗滌濾器與沉澱，合併洗液與濾液。加入預先用 乙二胺四乙酸二鈉液中和好的(先用 0.05mol/L 粗調，後用 0.005mol/L 細調)氨-氯化銨，氯化鎂緩衝液(氯化銨 2.7Gm 氯化鎂 0.15Gm，加氨水 70ml 加水至
100ml)5ml，加鉻黑 T 指示劑少許，以 0.005mol/L 乙二胺四乙酸二鈉滴定終點即 得。每毫升 0.005mol/L 乙二胺四乙酸二鈉相當於 0.001291Gm 的 C10H12O5Na2。本法 回收率為 102.2%，精密度 0.3%。
†酸鹼滴定法（49）（60）－取斑蝥酸鈉約 0.1Gm，精密稱定，置錐形瓶中，加水 20ml
使溶。精密加入 N/10 硫酸液 25ml，瓶上置一小漏斗，加熱微沸約 15 分鐘冷卻，
析出白色沉澱，加氯仿 20ml 振搖使溶解，以酚西太 為指示劑，用 0.1 mol/L NaOH 滴定至水層呈粉紅為終點，同時作空白校正。每亳升 0.1 mol/L 硫酸液相當於 0.01291Gm 的 C10H12O5Na2。
‡非水滴定法（49）（60）－取斑蝥酸鈉約 0.1Gm，精密稱定，置錐形瓶中，加入冰 醋酸使溶，以甲紫為指示劑，用 0.1N 過氯酸滴定至藍綠色。用同法作空白校正。
每亳升 0.1 N 過氯酸相當於 0.01291Gm 的 C10H12O5Na2。
ˆ重量法（49）（60）－取斑蝥酸鈉約 0.1Gm，精密稱定，置錐形瓶中，加水 20ml 使溶解，加入 0.5%氯化鋇(含二個結晶水)50ml，冰箱中靜置過夜，用已恆重之 4 號垂熔漏斗過濾，沉澱用水洗淨氯離子。1050C 乾燥至恆重，每克殘渣相當於 0.7384gm 的 C10H12O5Na2。
‰氣相色譜法（49）（60）－採用 0.5 mol/L H2SO4將複方斑鈉片中斑蝥酸鈉酸化為 斑蝥素以後，以十八烷為內標，5% E-301 為固定相，用 FID 檢測器進行 GC 法測 定其含量。GC 條件，檢測器及進樣口溫度為 2100C，柱溫 1850C，N2流速：60ml/
分鐘，H2流速：70ml/分鐘，空氣流速：500ml/分鐘，衰減：2。在該色譜條件下，
斑蝥素在 0.1-0.5µg 範圍內線性良好，回收率為 97.31%以上，斑蝥酸鈉轉化為斑 蝥素的轉化率為 96.57%。
三、藥理作用
１、斑蝥素對多種移植性腫瘤有明顯抑制作用，並延長實驗動物存活時間，臨 床用於原發性肝癌等惡性腫瘤，有一定近期療效。以斑蝥素為原料合成的羥基斑 蝥胺，甲基斑蝥胺亦有類似的抗癌作用，而且毒性均較斑蝥素低，羥基斑蝥胺用 以治肝癌，毒性只有斑蝥素的五百分之一，已證明斑蝥素類為細胞毒，對癌細胞 有直接殺傷作用，抑制脫氧核糖核酸及核糖核酸的合成，臨床主要用於原發性肝 癌的治療。對賁門癌、食道癌、消化道腫瘤也有一定作用（48）（55）（60）（63）（92）(166)。
２、斑蝥素對皮膚、粘膜有引赤，發泡作用，刺激性雖強烈，但對組織的穿透 力且較小，因作用緩慢，僅有中度疼痛，通常不涉及皮膚深層，所成的泡很快痊 癒而不遺留痕跡。對粘膜或創口，則作用劇烈，較難痊癒。對引起皮膚發泡、皮 膚棘層鬆解 acantholysis，一般認為由於皮膚中某種酉每參與結果。口服毒性大，
可引起胃炎及腎炎，尤其腎臟及尿道對斑蝥素頗敏感，小量可擴張腎小球，中毒
量主要傷害腎小管。斑蝥素易自胃腸道吸收，皮膚也能吸收小量，排泄主要通過 腎臟，泌尿道受刺激可產生尿急疼痛，可引起陰莖異常勃起等症狀（48）（55）（60）（61）（63）
（92）。
３、各種動物對斑蝥素的敏感性，特別是腎臟有很大種屬的差異，斑蝥素 30 亳克即可使人死亡（55）（60）（63）（92）。
４、斑蝥素的抗腫瘤作用：斑蝥素是斑蝥的活性成分，早在 1933 年就有人發 現斑蝥素給藥 3-4 次能使焦油誘發的家兔癌瘤消失，從而證明了其抗癌作用（125）。 斑蝥素對肝臟和癌細胞有較強的親和性，對腹水型網狀細胞瘤和腹水型肝癌有一 定抑制作用，其效價與接種瘤細胞的數目密切相關（60）（64）（126）。
斑蝥素對其他小鼠腫瘤 S180、網組細胞肉瘤 L2、肉瘤 SAK、網組白血病 L615、艾 氏腹水癌及大鼠 W256肉瘤則均無明顯的抑制作用。斑蝥素能引起小鼠腹水肝癌細胞 明顯萎縮、退化、胞漿多空泡等形態學改變（48）（49）（56）（64）（124）（127）。
有人證明，斑蝥素能使急性中毒大鼠心、胃、小腸的還原型尼克西先 胺腺膘呤 酉每二核甘酸脫氫酉每 (NADHD)和細胞色素氧化酉每 (CC0)活性受到不同程度的抑制，還 可破壞線粒體結構，並影響定位於其上的 NADHD 及 CC0 的活性。實驗證明，斑蝥 素首先抑制癌細胞蛋白質的合成，繼而影響 RNA 和 DNA 合成，最終實現抑制癌細 胞的生長和分裂（49）（48）（63）（127）。
斑蝥素對原發性肝癌有一定療效（60）（64）（131），佃氏報導，用斑蝥素治療 27 例肝 癌患者，平均存活時間為 80.9 天，生存半年以上佔 25.9%，一年以上佔 11.1%（131）。
５、斑蝥酸鈉的抗腫瘤作用：斑蝥酸鈉的抗腫瘤譜比較寬，除能抑制小鼠腹水 型肝癌和 ARS 外，對 S180、U14及肝癌等移植瘤有中度抑制效力。體外亦能抑制 Hela 細胞株、人食道鱗癌 CaES-17 細胞株及人肝癌 BEL-7402 細胞株（49）（55）（56）（60）（64）。
病理觀察中證明，斑蝥酸鈉不屬於增強宿主間質反應即提高抗癌免疫反應的藥 物，而可能是使癌細胞直接受到損害（49）（119）。
也曾有人對中、晚期食道癌和賁門癌患者術前應用斑蝥酸鈉，術後觀察到癌周 間質淋巴樣細胞反應減弱，癌細胞出現空泡樣變，揭示斑蝥酸鈉對癌細胞可能直 接殺傷作用（49）（56）。
斑蝥酸鈉能使小鼠 S180癌細胞呈碎環或糜爛狀，用電鏡觀察到 3H-斑蝥酸鈉可 以直接進入小鼠腹水型肝癌細胞的核及核仁（127）（111）。斑蝥酸鈉對體外培養的癌細 胞增殖有明顯的抑制作用（49）（123）。
用生物化學的方法觀察到，斑蝥酸鈉可抑制癌細胞 DNA 和 RNA 含量及前體的摻 入，從而證明了該藥首先作用於癌細胞的核酸代謝，繼而使癌細胞的形態和功能 發生改變，殺傷癌細胞（63）（127）。但傅乃武（132）的實驗卻得出了不同的結論，他認為：
在對核酸及蛋白質代謝的作用上，斑蝥酸鈉的影響是不顯著的。體內多次給藥僅 輕度抑制 DNA 和 RNA 的含量，體外試驗表明對3H-胸月泉 嘧啶核 的摻入有輕度的抑 制，而對3H-尿嘧啶核 和3H 亮氨酸的摻入影響不明顯（132）。這可能與實驗所選用 的藥物濃度相差過大有關。
另外，有人認為，斑蝥酸鈉的抗癌作用可能與降低 cAMP 磷酸二酯酉每 活性從而 提高癌細胞內 cAMP 水準有關。斑蝥酸鈉還能改善癌細胞和荷瘤小鼠的能量代謝，
提高過氧化氫酉每 的活力，即降低荷瘤小鼠的癌毒素水平，這可能是其緩解和控制癌 變的途徑之一（126）。臨床上用斑蝥酸鈉治療原發性肝癌 140 例，有效率為 56,4%；
24 例食道癌患者連續兩週給予 0.5mg/天或 1.0mg/天斑蝥酸鈉，然後手術切除，
其五年生存率為 45.8%，而單純手術切除的 28 例僅為 17.9%(P<0.05) （126）。 ６、去甲斑蝥酸鈉的抗腫瘤作用：去甲斑蝥酸鈉能提高肝癌細胞的呼吸抑制 率，增加酸性磷酸酉每和脫氧核糖核酉每的活性。用 5µg/ml 去甲斑蝥酸鈉處理腫瘤細 胞(Hela)細胞，24 小時後電鏡下可見大量空泡和片狀微粒，有的線粒體被損害，
細胞表面的微絨毛減少甚至消失。癌細胞的線粒體對該藥極敏感，損害後不再能 恢復，而藥物對正常細胞超微結構的損害較輕（126）。
細胞表面的微絨毛減少甚至消失。癌細胞的線粒體對該藥極敏感，損害後不再能 恢復，而藥物對正常細胞超微結構的損害較輕（126）。