基礎試驗結果

唾液採集裝置Cortisol-Salivette®之回收率、豬隻唾液皮質醇之日夜節律與豬 隻緊迫測試等試驗，皆為本研究主軸—探討運輸緊迫源與腎上腺皮質醇之關聯的 基礎試驗。確保運輸過程中的唾液採集裝置有優良的回收率、不會影響皮質醇濃 度，方能進行唾液採集。得知豬隻在未受刺激的狀態下，其唾液皮質醇含量之日 夜節律變化，方能對各時間點採集的唾液進行校正，較精準地得到豬隻的驅趕與 運輸緊迫。了解豬隻應對緊迫時的血清與唾液皮質醇變化，方能確認本研究以唾 液皮質醇作為緊迫指標的可行性。

4.1.1 唾液採集裝置 Cortisol-Salivette®之回收率

使用Cortisol-Salivette®對四種濃度（10、20、40 與 80 ng/ml）的回收率結果 如表1 所示，10 ng/ml 組別的平均濃度為 11.90 ng/ml，控制組濃度為 11.87 ng/ml，

20 ng/ml 組別的平均濃度為 21.00 ng/ml，控制組濃度為 19.20 ng/ml，40 ng/ml 組別 的平均濃度為41.99 ng/ml，控制組濃度為 39.92 ng/ml，80 ng/ml 組別的平均濃度 為86.48 ng/ml，控制組濃度為 77.85 ng/ml。

平均濃度除以控制組濃度所得到的回收率，在10、20、40 與 80 ng/ml 的表現 分別為100、109、105 與 111%，顯示出使用 Cortisol-Salivette®的組別，其皮質醇 溶液經過棉條的吸收以及離心後，濃度有稍微上升的情形。

4.1.2 豬隻唾液皮質醇之日夜節律

八隻LYD 豬隻在一天六個時間點（05:00、07:00、09:00、11:00、13:00、15:00）

的唾液腎上腺皮質醇含量如表 2 所示，其中有 5 個唾液樣本有受到汙染的情形而 無法檢測。將時間點與皮質醇的關係繪製成折線圖，如圖8，可看見唾液皮質醇含 量（Mean ± S.E.M）在 09:00（24.27 ± 2.74 ng/ml）、11:00（21.70 ± 1.50 ng/ml）與 15:00（27.17 ± 3.24 ng/ml）有較高的情形，而在 05:00（17.32 ± 1.97 ng/ml）、07:00

（12.68 ± 1.26 ng/ml）與 13:00（8.03 ± 1.20 ng/ml）有較低的情形。

經過ANOVA 變方分析及鄧氏兩兩比較後發現，05:00、07:00 與 13:00 的豬隻 唾液皮質醇之間無顯著差異，05:00、09:00、11:00 與 15:00 的豬隻唾液皮質醇之間 無顯著差異，05:00、07:00、09:00、11:00 的豬隻唾液皮質醇之間亦無顯著差異。

然而，15:00 與 07:00、13:00 相比，豬隻唾液皮質醇含量顯著較高（P < 0.05），09:00 與11:00 的唾液皮質醇含量也比 13:00 顯著較高（P < 0.05）。

4.1.3 豬隻緊迫試驗

本試驗預以8 隻 LYD 豬隻進行，然而過程中有一隻豬（No.5）經歷較大的不 適與緊迫，擔心施加緊迫之過程造成豬隻過大的傷害，因此放棄對這隻豬的採樣。

七隻豬的唾液與血清皮質醇隨試驗時間點的表現如表3 所示，其中 No.2 豬缺 乏第九個點的採樣。7 隻豬隻的平均唾液與血清皮質醇濃度隨試驗時間點的表現如 圖9。在試驗中於時間點 4、5、6 施加緊迫，可看到唾液同血清皮質醇濃度在 5、

6 點有上升的趨勢，且唾液皮質醇在第 7 點達到高峰，而血清皮質醇在第 9 點回到 第 4 點的水平。儘管可以從圖 9 中看出唾液與血清皮質醇的趨勢，但在統計上兩 者的皮質醇含量在9 個試驗點之間皆無顯著差異（P = 0.1287、0.2162）。這可能受 到豬隻個體差異的影響，從唾液皮質醇含量隨試驗時間點的表現便可看出，No.2、

No.3、No.4、No.7 豬有類似的反應曲線。針對這四隻豬進行 ANOVA 變方分析，

在9 個試驗點之間發現存有顯著差異（P < 0.001），結果如圖 10，最高點出現在第 7 點。另外 3 隻豬不同試驗時間點的唾液皮質醇濃度之間則沒有顯著差異，而血液 皮質醇濃度隨試驗時間點之變化，則7 隻豬的反映皆有相似的模式。

表1. Cortisol-Salivette®對不同皮質醇濃度溶液的回收率

Table 1. Recovery rate of Cortisol-Salivette® to four concentrations cortisol solution Conc.（ng/ml） 10 20 40 80

Cortisol level（ng/ml）

No.1 11.96 20.31 41.33 86.54

Recovery rate is average concentrations divided by concentrations of control group

表2. 豬隻唾液皮質醇濃度之日夜節律

Table 2. The circadian rhythm of salivary cortisol in swine

Time 05:00 07:00 09:00 11:00 13:00 15:00 Pigs Cortisol level（ng/ml）

No.1 7.61 14.82 12.03 23.63 7.80 44.29

 Use symbol # to indicate the sample that is unable to measure due to contamination

表3. 豬隻唾液與血清皮質醇濃度在緊迫測試中之表現

Table 3. Concentrations of saliva and serum cortisol of swine in a stress test

Pigs No.1 No.2 No.3 No.4

 Use symbol # to indicate the sample that is unable to measure due to contamination

 Pig No.2 was stressed only twice, so there are less 1 sample in the entire process;

pig No.5 experienced more stress during sampling, thus quit its sample.

圖8. 豬隻唾液皮質醇之日夜節律（N=8），以平均濃度（Mean ± S.E.M）表示。經 過AVONA 變方分析出有顯著差異，再進行鄧肯（Duncan）兩兩比較，不同字母表 示兩者之間有顯著差異（P < 0.05）。結果顯示 05:00、09:00、11:00、15:00 間無顯 著差異，05:00、07:00、13:00 間無顯著差異，05:00、07:00、09:00、11:00 間無顯 著差異，而09:00、11:00、15:00 比 13:00 顯著較高，15:00 比 07:00 顯著較高。

Fig 8. Circadian rhythm in salivary cortisol of swine (N=8), expressed as average concentration (Mean ± S.E.M). There is a significant difference between time points after ANOVA F-test, which is compared with each other by Duncan multiple comparison.

Result shows that there is no significant difference between 05:00, 09:00, 11:00 and 15:00.

There is no significant difference between 05:00, 07:00 and 13:00. There is no significant difference between 05:00、07:00、09:00、11:00. However, concentrations of cortisol in 09:00, 11:00 and 15:00 are significantly higher than 13:00, and concentration of cortisol in 15:00 is significantly higher than 07:00.

17.32

05:00 07:00 09:00 11:00 13:00 15:00

Concentrations of cortisol (ng/ml)

Time points

Circadian rhythm in salivary cortisol

A

圖9. 緊迫試驗中各時間點（每點間隔 0.5 小時），豬隻唾液（◆）與血清（□）的 皮質醇平均濃度（Mean ± S.E.M）（N=7）。緊迫在試驗時間點 4、5、6 點施加，可 看到唾液同血清皮質醇濃度在5、6 點有上升的趨勢，唾液皮質醇在第 7 點達到高 峰，而血清皮質醇在第9 點回到第 4 點的水平。然而統計上，不同點的血清與唾液 皮質醇之間沒有顯著差異。

Fig 9. Average concentrations (Mean ± S.E.M) of porcine salivary (◆) and serum (□) cortisol in each experiment points (0.5 hour interval between each points) (N=7). Stress is induced at points 4, 5 and 6; the concentrations of salivary and serum cortisol tend to increase at points 5 and 6. The peak of salivary cortisol is at point 7 and at point 9 serum cortisol returns to the level of point 4. However, there is no statistically significant difference in salivary and serum cortisol between each experiment points

0 5 10 15 20 25 30 35

- 1 . 5 - 1 - 0 . 5 0 0 . 5 1 1 . 5 2 2 . 5

Concentrations of cortisol(ng/ml)

Time (hour)

Saliva blood

Stress

圖 10. 四隻表現相近的豬隻（No.2、No.3、No.4 與 No.7，N=4）在緊迫試驗中各 時間點（每點間隔0.5 小時）的平均唾液皮質醇濃度（Mean ± S.E.M）。ANOVA 變 方分析有顯著差異，經過鄧肯（Duncan）檢定進行兩兩比較，不同字母表示兩者之 間有顯著差異（P < 0.05）。結果顯示緊迫施加後，唾液皮質醇高峰出現在第七點。

Fig 10. Average concentrations（Mean ± S.E.M）of salivary cortisol in each experiment points (0.5 hour interval between each points) from pigs with similar performance (No.2, No.3, No.4 and No.7, N=4). ANOVA F-test shows significant difference, and after Duncan multiple comparison, there is significant difference between different letters.

Result showed the peak of salivary cortisol is at point 7.

20.43

Concentrations of cortisol(ng/ml)

Time (hour)