試驗設計

3.3.1 運輸緊迫源與腎上腺皮質醇之關聯

本研究欲探討豬隻運輸過程中唾液中腎上腺皮質醇變化與緊迫源之間的關聯，

因此需要在運輸過程中進行豬隻唾液採樣。唾液採集的時間點分別為，豬隻位於豬 場繫留欄位時（第一點）、經過驅趕移動至車體時（第二點）、經過運輸抵達目的地 時（第三點）如圖7 所示。採樣後，唾液採集管先後以 4℃、-20℃暫存，等待離

圖6. 唾液採集裝置，由上而下為口蓋、棉條、內管與採集管。

Fig 6. Saliva collection device are made of cover, swab, inner tube and collecting tube.

圖7.運輸各階段。圖 7-1 為驅趕前豬隻於牧場繫留欄位內、圖 7-2 為驅趕過程、圖 7-3 為驅趕後豬隻於車體上、圖 7-4 為豬隻運輸後於車體上。

Fig 7. Each stage of transportation. Fig 7-1 show pigs in the picked-up facility before loading. Fig 7-2 show the processing of loading. Fig 7-3 show pigs on the vehicle after loading. Fig 7-4 show pigs on the vehicle after transport.

(1) (2)

(3)

(4)

心與皮質醇含量測定。在豬場繫留欄位採集唾液後，以動物用著色筆標記豬隻，針 對標記者進行後續採樣，每趟運輸流程結束後，一隻標記豬隻應該有三次唾液採集，

運輸過程中亦會紀錄驅趕與運輸的時間（minutes）、司機在驅趕時使用電棒的頻率

（times/minute）以及豬隻承載密度( Kg/m²)等緊迫源數值。

將豬隻於第二時間點採集的唾液皮質醇含量減去第一時間點採集的皮質醇含 量即為豬隻在驅趕前後的皮質醇變化，定義為驅趕緊迫（loading stress）；同理，運 輸緊迫（transport stress）即為豬隻在第三時間點與第二時間點的唾液皮質醇差值，

而總緊迫（total stress）則為豬隻整趟驅趕與運輸過程中的皮質醇變化，為第三點 減去第一點的皮質醇數值。將驅趕緊迫、運輸緊迫與總緊迫，與時間、豬隻承載密 度、電棒使用頻度等緊迫源，以簡單直線迴歸（simple linear regression）、多元複迴 歸（multiple regression analysis）與非線性迴歸（nonlinear regression analysis）探討 驅趕、運輸緊迫與緊迫源之間的關係。

3.3.2 唾液採集裝置回收率試驗

使用 Cortisol-Salivette®之前，必須先確認此採集裝置對皮質醇具有優良之回 收率。本試驗以10 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml 四個濃度皮質醇溶液，各 取1 ml 滴於 Cortisol-Salivette®的棉條上，經過離心後測定其皮質醇濃度，重複三 次。另外取一組溶液不經過棉條，直接測定皮質醇濃度，作為控制組。將三組重複 平均值除以控制組濃度即可得到回收率。

3.3.3 日夜節律試驗

本試驗欲探討豬隻每日唾液腎上腺皮質醇隨時間之變化，試驗對象為8 隻 LYD 豬隻，各自以動物用著色筆標記，於一天的 05:00、07:00、09:00、11:00、13:00、

15:00 等六個時間點採集唾液，並以-20℃保存唾液採集管，等待離心與皮質醇含量 測定。進行試驗前兩日開始，每日對豬隻採集唾液一至兩次，使其習慣操作流程以

及操作人員之存在。

3.3.4 緊迫試驗

本試驗以鐵製鼻圈套索保定模擬緊迫施加於豬隻上，欲探討豬隻遭遇緊迫後，

其唾液與血液中腎上腺皮質醇之變化。試驗對象同日夜節律試驗，為同樣8 隻 LYD 豬隻。每隻豬總共會採集檢體九次，前三次為緊迫前採集唾液，以確立豬隻尚未緊 迫時之皮質醇水平，第四次至第六次為施加緊迫後先後採集血液與唾液，每次保定 時間不超過 5 分鐘即鬆開套索，第七次至第九次為緊迫結束後採集唾液，以非侵 入方式得知豬隻在緊迫後皮質醇水平之變化，是否有下降趨勢，唯第九次採集唾液 後額外進行採血，以血液樣本再次確認豬隻皮質醇水平。每次採集檢體的間隔皆為 0.5 小時，共歷時 4 小時。

唾液採集後之處置同上，而血液採集後置於室溫約30 分鐘，待血液凝固後置 於4℃暫存，後以 1000 x g 離心取其上清液血清，再將血清置於-20℃保存，等待 測定皮質醇含量。