研究限制

本研究以調查台灣豬隻運輸現況為主，在豬隻運輸過程中採集豬隻唾液，並以 ELISA 系統分析唾液中腎上腺皮質醇濃度，再與運輸過程中紀錄的緊迫源數值進 行簡單直線回歸、多元複迴歸、非線性回歸的統計分析。然而，整個研究過程中有 一些不可抗力的限制，會影響到研究結果的正確性。在此列出研究中可能的限制，

並討論其如何影響研究之準確性。

5.1.1 調查過程中人為因素

本研究以調查為主，會直接接觸到從事豬隻養殖與豬隻運輸的人員，以及肉品 市場與屠宰場的工作人員。這些從業人員通常有時間壓力，必須盡快將豬隻送往目 的地進行拍賣（必須在中午十二點前將豬隻送往肉品市場，肉品市場才能在下午進 行拍賣）或屠宰（屠宰場亦有排程與時間期限）。因此在調查豬隻運輸時，須以不 干擾各位從業人員的工作為前提，故在整個豬隻運輸過程中，僅有些許的時間可以 採集豬隻唾液與紀錄緊迫源數值，不充足的操作時間便成為了本研究的一項限制。

時間的限制會影響採集唾液的成功率，因為採集豬隻唾液時需要將棉條放進 豬隻口腔內，等待豬隻咀嚼一段時間後方能取出，無論是在繫留欄位或者車體上，

豬隻都需要一段時間來適應採集人員的存在與操作，若時間不夠充分會減少成功 採集到唾液的次數，特別車體上的唾液採集本身具有一定難度（需要在車體四周的 欄杆上移動），且運輸過後的豬隻又特別虛弱，不願意咀嚼採集棉條，更增加了採 集的難度與時間。當成功採集的次數減少，意味著統計模型的樣本數降低，影響了 統計的準確性。

另外時間的限制也會對驅趕前後唾液採集之準確性產生影響。通常，運輸人員 會等待豬隻於第一點（牧場繫留欄位，驅趕前）的唾液採集與標記（動物用色筆）

完成後進行驅趕，當驅趕開始後便有時間的壓力，為避免耽誤運輸人員的時間，尚 未等驅趕完成，筆者就在車邊等待被標記的豬隻被趕上車，進行第二次採樣。然而，

每次驅趕的時間與過程都不一樣，不是每次驅趕被標記的豬隻都能在驅趕完成前 成功採集到唾液。這使得每次第二點採集（牧場車體上，驅趕後）的時間點都不盡 相同，有些豬隻在驅趕還沒完成，車體上還沒有很多豬隻存在時就採集到唾液，有 些豬隻則在驅趕完成後，車體上滿是豬隻時才採集到唾液，兩種情況的豬隻所經歷 的緊迫程度並非相同，後者的豬隻在車體上會經歷更多擠壓、堆疊與不適。簡言之，

第二點的唾液檢體是預期豬隻經歷完整驅趕緊迫之後，再進行採集，但有部分的豬 隻，礙於時間因素，在尚未經歷完整的驅趕緊迫前就先進行唾液採集，意味著部份 豬隻的第二點唾液中皮質醇濃度，並不能反映豬隻經歷完整驅趕過程後的生理狀 態。這影響了後續對於驅趕緊迫與運輸緊迫的分析，因為驅趕緊迫的定義為第二點 與第一點的皮質醇濃度相減，而運輸緊迫的定義為第三點與第二點的皮質醇濃度 相減，如果部分豬隻第二點唾液中皮質醇無法反映豬隻經歷完整驅趕後的狀態，那 驅趕緊迫與運輸緊迫的意義就有待商榷，這也解釋了圖19 中部份豬隻在經歷驅趕 之後，其唾液中皮質醇沒有上升的現象，因為那些豬隻可能尚未經歷完整的驅趕緊 迫，便已經採集其唾液檢體。

另外一項人為因為的限制，是這些豬隻為畜牧業者的財物。運輸人員最重要的 工作，就是將豬隻安全地送往目的地，避免豬隻在運輸過程中死亡。畢竟運輸是充 滿緊迫的過程，當被標記的豬隻出現一些狀況，如被其他豬隻堆疊而無法移動、

發出低鳴或豬緊迫性綜合症的症狀（肌肉僵硬與皮膚發紺等），而被運輸人員認為 豬隻有死亡之風險時，筆者基於對畜牧業者與運輸人員的尊重，和避免對該豬隻造 成額外的緊迫而發生意外，會放棄對該豬隻進行唾液採樣，意外著採集的成功率與 統計模型的樣本數降低，影響到調查結果的準確性。

承上，由於豬隻屬於業者的財物，無法使用侵入式的檢體如血液，因為有對豬 隻造成傷害的疑慮。其他的緊迫指標在本次調查中亦不便使用，例如心率、心律變 異率與體溫，前二者需要將儀器貼合在豬隻的皮膚並且固定，確保運輸過程中不會 掉落，然而，運輸時車體上空間狹小，豬隻彼此之間的擠壓讓儀器無法固定在豬隻 皮膚上，故在豬隻運輸過程中無法進行心率的偵測。而體溫的檢測則需要將小型儀 器投入致豬隻的消化道中，藉以偵測豬隻體溫，並在屠宰時取出，但本研究僅調查 至運輸結束，因此豬隻的體溫也不便收集。基於這些人為因素的限制，本研究調查 過程中僅使用唾液腎上腺皮質醇作為緊迫指標，解釋豬隻生理狀態的能力有限。

5.1.2 唾液腎上腺皮質醇做為緊迫指標的限制

使用唾液腎上腺皮質醇，作為緊迫指標有許多優點，包括非侵入性的檢體採集 方式與即時性地反應生理狀態等，但同時也有一些缺點與限制需要注意，例如日夜 節律的影響、在連續變動的腎上腺活動中僅能反映瞬間的數值、採集過程仍會對動 物造成一些緊迫與唾液中皮質醇數值較低易受汙染等。

唾液中皮質醇僅能反映瞬間動物的生理狀態，而糞便中皮質醇卻可以提供一 段時間內的腎上腺活動的資訊，但得要考慮豬隻排泄的頻率與糞便形成的耗時，

本研究中所調查的運輸時間皆在三個小時內，小於豬隻糞便形成的時間。換言之，

豬隻受到緊迫所分泌的皮質醇尚未形成糞便或排出，豬隻的運輸便已結束，故糞便 在本研究中並非合適的緊迫指標。而且，藉由試驗設計中不同採集點的唾液皮質醇 濃度相減，可計算出豬隻在驅趕與運輸後皮質醇的累積變化量，嘗試克服唾液皮質 醇僅能反映動物體瞬間生理狀態的限制。而本次調查的基礎試驗，亦對豬隻唾液中 腎上腺皮質醇之日夜節律進行探討，並以該結果對運輸過程中的豬隻唾液皮質醇 濃度進行校正，並嘗試消除唾液皮質醇日夜節律的限制與影響。

然而在本研究中，唾液中皮質醇亦受汙染的限制造成較多影響。在豬隻運輸過 程中，豬隻容易受到驚嚇而排泄，糞尿常常散佈在車體，經過豬隻擠壓與堆疊，糞

尿往往沾染在豬隻身上，而豬隻又常以口鼻探索未知環境，導致在採集唾液時豬隻 口腔內有糞便或尿液存留，採集唾液時難免受到糞尿的汙染，干擾ELISA 系統對 皮質醇濃度的分析。雖然並非糞便與尿液中的皮質醇代謝物所會與標誌抗原競爭 抗體結合位，但由於糞便與尿液中皮質醇代謝物含量為生物體於一段時間內的累 積，其濃度遠高於唾液中皮質醇，意味著即使只有一點糞尿的汙染，也會影響 ELISA 系統的分析，使得在評估豬隻唾液中皮質醇濃度時多了一項變數。在採集 過程中偶有豬隻口腔因為運輸時的擠壓與碰撞而出血，同樣地，血液的汙染亦有與 糞尿相同的影響，對皮質醇含量的分析造成誤差，而且血液與糞尿中亦有其他固醇 類內泌素，其中孕酮（Progesterone）與其代謝物 17-羥孕酮（17α-OH Progesterone）， 與ELISA 系統中的抗體具有較高的交叉反應比率（見附錄），表示這些固醇類內泌 素會與標誌抗原競爭抗體結合位，影響唾液中皮質醇濃度的分析。綜上所述，在本 研究中採集唾液的過程裡，豬隻唾液容易受到糞便、尿液與血液的汙染，其中的皮 質醇、皮質醇代謝物與固醇類內泌素會競爭ELISA 系統中抗體之結合位，對於唾 液中皮質醇的評估造成影響，有高估之疑慮。

另外，本研究為運輸現況的調查，在採集豬隻唾液之前，無法提前一段時間重 複採集使豬隻習慣人員之存在與操作，故在採集唾液時有可能對豬隻造成額外的 緊迫，進而增加豬隻 H-P-A 軸活動，影響唾液中腎上腺皮質醇濃度之分析與豬隻 生理狀態之評估。

5.1.3 迴歸模型的限制

迴歸模型係藉由統計的運算，找出自變數與應變數（應變數受到自變數的影響）

之間的關係。無論是簡單直線迴歸、多元複回歸與非線性迴歸，都需要足夠的樣本 數，與一定範圍的自變數（過於集中的自變數有可能無法解釋應變數的變化），方 能找出自變數與應變數之間的關聯性。在本研究中，各項緊迫源為自變數，腎上腺 皮質醇濃度為應變數，然而本研究是以短程運輸為主的現況調查，每趟運輸過程中

的條件變動幅度不大，緊迫源數值有可能不具有足夠範圍以查明自變數與應變數 之間的關係，例如運輸時間不超過三個小時，無法探討長途運輸對腎上腺皮質醇濃 度的影響，而豬隻承載密度的數值中，僅有一個低於300 Kg/m²，無法探討低豬隻 承載密度與腎上腺皮質醇濃度之間的關聯。

如先前小節所討論，運輸過程中有需多因素會影響唾液的採集，使得本次研究 中的樣本數不夠充足，而足夠的樣本數可以降低迴歸模型中的誤差方均和（mean sum of square of error, MSE）進而增加迴歸模型達到顯著的機會。本次研究中許多

如先前小節所討論，運輸過程中有需多因素會影響唾液的採集，使得本次研究 中的樣本數不夠充足，而足夠的樣本數可以降低迴歸模型中的誤差方均和（mean sum of square of error, MSE）進而增加迴歸模型達到顯著的機會。本次研究中許多