探針 7-EDADBD 與三光氣之反應機制和選擇性實驗

參 考 文 獻 推 測 探 針 7-EDADBD 和 三 光 氣 之 反 應 機 制 應 如 圖 3-9 所 示 。 7-EDADBD上之一級胺先和三光氣進行第一次的加成-離去反應，脫去一分子光氣 和鹽酸後，形成一高活性的中間產物，而此活性中間體會促使第二次加成離去反 應的進行，使分子合環形成7-IDBD。反應中產生的光氣副產物為活性比三光氣還 高的物質，因此其亦會與探針反應，這也是為什麼只需要加入0.7當量的三光氣滴 定曲線即達飽和。

圖3-9 探針7-EDADBD與三光氣反應機制示意圖。

由於探針上之一級胺有很好的親核性，有可能與其他親電試劑反應而影響和 光氣的反應性。故評估探針7-EDADBD對三光氣的辨識特異性，將其對其他類似 反應性之有毒化學物質 (作為干擾物質的模擬)，例如醯氯 (acyl chlorides) 和磷酸 酯 (organophosphate，OP) 神經代謝模擬物等活性物質進行選擇性的測試。將 7-EDADBD溶於ACN和DCM溶劑中，配製成10 μM，加入不同活性物質 (20 equiv.)，

包含乙酸酐 (acetic anhydride，AA)、氯乙醯氯 (chloroacetyl chloride，CAC)、乙醯 氯 (acetyl chloride，AC)、乙二醯氯 (oxalyl chloride，OC)、氯化亞碸 (thionyl chloride，

TC)、氯磷酸二乙酯 (diethyl chlorophosphate，DCP)、二氯硫化碳 (thiophosgene，

TP)、硫醯氯 (sulfuryl chloride，SC)、三氯氧磷 (phosphorus oxychloride，POC)，

結構如圖3-10 (a) 所示，進行螢光光譜的量測後，可得圖3-10 (b、c)。取特定波長 (ACN：529 nm；DCM：507 nm) 之螢光強度作成柱狀圖方便比較，如圖3-10 (d) 所

示。由這三個圖可知，同一活性物質在兩種溶劑中之螢光變化趨勢大致相同，

7-EDADBD和三光氣反應之螢光強度變化最為明顯，螢光增強分別可達15.6 (ACN) 和5.3 (DCM) 倍。部分活性物質和7-EDADBD反應完後螢光強度會略微上升或下 降，如AA、CAC、AC、DCP等，在ACN和DCM溶劑中之螢光增強倍率分別為3.4-6.7 倍和1.2-2.1倍，均遠低於和三光氣反應之螢光增強倍率。有些活性化合物會造成螢 光淬滅，如OC、TC、TP、 SC。造成螢光強度略為改變之原因，推測為這幾個活 性分子和探針進行完第一次加成離去反應後所形成的中間體不具有離去基，故無 法再進行分子內的加成離去環化反應，只在一級胺上進行反應並不會影響螢光團，

但可能會因為其他因素使螢光強度發生改變。而造成螢光淬滅原因則是反應所產 生的中間體具高活性，故會使分子合環形成不具螢光之產物，但也有可能是因為 活性物質破壞了整個螢光團之結構，造成螢光淬滅。縱使這些活性物質均會和探 針反應，但和三光氣反應之螢光強度變化最為明顯，故可用螢光強度高低來區別 三光氣和其他活性物質。

圖3-10 (a) 不同活性物質之分子結構。7-EDADBD (10 μM) 於 (b) ACN和 (c) DCM溶劑中與三光氣 (0.7 equiv.) 和不同活性物質 (20 equiv.) 進行選擇性實驗之 螢光光譜。λ_ex = 398 nm (ACN) & 396 nm (DCM)，slit_ex / slit_em = 2.5 / 5 nm。(d) 特 定波長 (ACN：529 nm；DCM：507 nm) 之螢光強度柱狀圖。

第四章 總結

7-EDADBD對於三光氣之偵測極限分別為12.2 (ACN) 和48.3 nM (DCM)，兩者均在 奈米莫耳濃度等級，遠低於光氣會對人體造成刺激或致死之濃度，因此7-EDADBD

Conversion LOD

Flu. Int.

enhancement ACN 5 min 0.7 equiv. 93% 12.2 nM 15.6 times DCM 2 min 0.7 equiv. 80% 48.3 nM 5.3 times

實驗部分

一、一般敘述 1. 測試及實驗儀器

(1) 核磁共振光譜（Nuclear Magnetic Resonance Spectrum, NMR）：氫核磁共振光譜

1H NMR (400 MHz) 和碳核磁共振光譜¹³C NMR (100 MHz) 之測定是使用 Bruker

(3) 紅外線光譜(Infrared Spectrum, IR)：使用 Thermo Scientific Nicolet Is4 光譜儀測 定，樣品製成以純液 (neat)、二氯甲烷或甲醇溶液 (soln.) 滴至硒化鋅 (ZnSe) 鹽 片上，待溶液揮發後進行測定，光譜單位為波數 (cm^-1)。

(4) 薄層色層分析 (Thin Layer Chromatography, TLC)：使用 Merck silica gel 60 F254

層 析 薄 片 。 以 有 機 溶 劑 展 層 後 ， 利 用 手 持 紫 外 燈 檢 視 ， 或 使 用 磷 鉬 酸 (Phosphomolybdic acid, PMA)、茚三酮 (Ninhydrin) 等顯色劑浸染後燒片顯色。

(5) 加壓管柱色層分析 (Flash Column Chromatography)：管柱以 silica gel 60 型 (230-400 mesh ASTM) 或 MB 70-40/75 (Chromatorex) 矽膠填充於玻璃管柱，壓力 來源為市售水族箱用氣體幫浦。

(6) 紫外/可見光光譜 (Ultraviolet/Visible Spectrum, UV/Vis)：使用 Hewlett-Packard (HP) 8453 型儀器測定。

(7) 螢光光譜 (Fluorescence Spectrum)：使用 Hitachi F-4500 型儀器測定。其內部光 電倍增管是使用 Hamamatsu R928 Photomultiplier tube。

(8) 動態光散射 (Dynamic Light Scattering, DLS)：將樣配製成特定濃度後，加入表 面電位專用的 cell 中，以 Malvern Zetasizer Nano Particle Analyzer ZS 型表面電位 儀來進行量測。

(9) 穿透式電子顯微鏡圖像：使用 Hitachi H-7650 或 Hitachi H-7100 電子顯微鏡測 定。

(10) 熔點測定 (Melting point, mp)：使用 Meltemp 熔點測定器測定。

(11) 雷射掃描式共軛焦電子顯微鏡圖像：使用 Leica TCS SP8 X Spectral Confocal 儀器測定。

(2) 動態光散射與表面電位量測之樣品製備

DMF、THF、toluene、cyclohexane 等不同溶劑中，配置成體積 3 mL、濃度為 10 μM，

先進行吸收光譜的測定，再以化合物最大吸收峰之波長進行螢光光譜的測定。

釋成 1 × 10^-3 M 之子液，依下表加入 1 × 10^-4 M TEA、1 × 10^-3 M 三光氣、1 × 10^-3 M

二、生物活性測試方法 1. 細胞株

使用 MCF-7 乳癌細胞株 (human breast adenocarcinoma），組織來源為癌症之 乳房、乳腺之上皮細胞，可由轉移區域之胸腔積液中分離而得。主要型態為黏附 型（adherent），約 29 小時分裂一次，其表型為 estrogen receptor positive，需生長 在 37 ℃和 5% CO₂之培養箱中。

2. 細胞培養與實驗需要使用之試劑

(1) DMEM 培養基 (Dulbecco's Modified Eagle Medium) (1X, liquid)：購自 GIBCO，

其中含有高葡萄糖、L-Glutamine、phenol red。

(2) 胎牛血清 (Fetal bovine serum；FBS)：由牟中原實驗室配置。

(3) Trypsin-EDTA (0.25% Typsin, 1 nM EDTA·4Na)：由牟中原實驗室配置。

(4) Trypan blue solution（0.4%）：由牟中原實驗室購買。

(5) PBS solution：由牟中原實驗室配置。

(6) 玻片封片劑：Molecular probes (ProLong^® Gold antifade reagent)，購自 Life Technologies Corporation。

(7) 細胞冷凍劑：Cell Freezing Medium-DMSO，由牟中原實驗室購買。

3. 細胞培養之使用器材

(8) 倒立式顯微鏡 分鐘，進行 trypsination 使細胞脫附。

(6) 加入 4 mL 10% FBS/DMEM 培養基沖下細胞，將細胞液以 1250 rpm 離心 5 分 鐘，移去含有 Trypsin-EDTA 之上清液。

(7) 加入 10% FBS/DMEM 培養基於適當稀釋倍數下，取 10 μL 細胞液加入 10 μL Trypan blue solution 均勻混合後，取適當量低於血清計數器上，再利用倒立式顯微 鏡計算細胞個數。血清計數器形狀與其在顯微鏡下觀察如圖 (a) 所示，主要計數 四個角落區塊 (以黃色框表示) 之細胞總數。由於一個區塊之體積為 1 mm × 1 mm

× 0.1 mm = 0.1 mm³ = 1 × 10^-4 mL，故計數出之數值可利用下式回推細胞液濃度。

Average number of cells counted × 10⁴ = number of cells/mL

圖(a) 血清計數器與其在顯微鏡下觀察之細胞 (藍色點)。

(8) 令細胞濃度為 1 × 10⁶ 個/mL 後，取 1 mL 細胞懸浮液加入裝有 8 mL 10%

FBS/DMEM 培養基之新培養皿繼續培養，完成至此步驟稱為繼代培養 (存脆繼代 的話不需計數，憑經驗繼代即可)。

(9) 若要凍細胞的話，在此之前，須先將細胞液以 1250 rpm 離心 5 分鐘後移去上 清液，加入含 5% DMSO 作抗凍劑之 10% FBS/DMEM 培養基，然後計數細胞令細 胞濃度為 1 × 10⁶ 個/mL，最後分裝於細胞冷凍管中 (1 mL/tube)。以循序方式降溫：

4 ℃冰箱 10 分鐘 → -20 ℃冰箱 30 分鐘 → -80 ℃冰箱 overnight → 液氮桶儲存，

即可保存細胞。

5. 雌二醇螢光分子對 MCF-7 乳癌細胞測試之實驗流程

(1) 利用倒立式螢光顯微鏡進行分子濃度和培養時間最佳化實驗

i. 於實驗前一天進行繼代培養，利用血清計數器求得細胞濃度後，將細胞移入 12 孔盤，使細胞濃度為 5 × 10⁴ 個/well，並培養 20-24 小時使之貼附。

ii. 吸除細胞培養液，利用 1 mL PBS 溶液潤洗兩次，每次 3-5 分鐘，加入 1 mL 利 用細胞培養基稀釋成濃度為 10 或 50 μM 的螢光分子 DMSO 溶液 (螢光分子原溶於 滅過菌之 DMSO 溶劑中，濃度為 1 × 10^-2 M)，於 37 ℃培養 2, 6, 12 小時後，吸除

上清液，利用 1 mL PBS 溶液潤洗兩次，每次 3-5 分鐘，將 12 孔盤直接移至倒立

三、合成步驟及光譜數據

N-(2-(4-(3-hydroxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)phenoxy)ethyl)-2-iodoacetamide (13)

將化合物 4'-EA-3-HF (0.4966 克，1.670 毫莫耳) 和碘乙酸-N-羥基琥珀醯亞胺 酯 (0.6139 克，2.169 毫莫耳) 置於含有磁石之 250 毫升圓底瓶中，加入氯仿 (90 毫升)，溶液呈黃色懸浮混濁狀，在室溫下反應 1 小時，反應過程中溶液先變為淡 黃白色混濁最後變為澄清。待反應完成減壓濃縮後可得粗產物，再經由加壓矽膠 管柱層析法分離純化，沖提液為甲醇/氯仿 (1:50)，可得乳白色固體化合物 13 (0.6704 克)，產率為 86%。

m.p. 192-194 ℃; TLC (MeOH/CH2Cl2 = 1/50) Rf = 0.33; ¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.22 (m, 3H), 7.68 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.4 Hz,

1H), 7.04 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.95 (br, 1H), 6.50 (br, 1H), 4.13 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.72 (m, 4H); HRMS (ESI) calcd. for C19H17INO5 (M+H)⁺ : 466.0146, found : 466.0144.

N-(2-(4-(3-hydroxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)phenoxy)ethyl)-2-((6-((7R,13S,17S)-13-methyl-3,17-bis((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-decahyd ro-6H-cyclopenta[a]phenanthren-7-yl)hexyl)amino)acetamide (14)

將化合物 8 (96.2 毫克，0.178 毫莫耳) 置於含有磁石之 10 毫升圓底瓶中，加

入二甲基甲醯胺 (0.18 毫升) 使之溶解，打入 N,N-二異丙基乙基胺 (0.0104 毫升，

0.0594 毫莫耳)；另外將化合物 13 (29.3 毫克，0.0630 毫莫耳) 加入二甲基甲醯胺 (3 毫升) 溶解後，利用針筒式幫浦在常溫下慢慢滴入化合物 8 中 (約 0.4 毫升/小時)，

持續滴入 9 小時後，利用高真空抽乾溶劑，再用甲醇帶 3 次可得粗產物，最後經 由加壓矽膠管柱層析法分離純化，沖提液為甲醇/二氯甲烷 (3:47)，可得黃色發泡 狀液體化合物 14 (47.8 毫克)，產率為 87%。

TLC (MeOH/CH2Cl2 = 1/24) Rf = 0.3; ¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23-8.19 (m, 3H), 7.72 (br, 1H), 7.68-7.64 (m, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.80 (dd, J = 8.5, 2.1 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 5.36-5.33 (m, 1H), 4.65-4.60 (m, 1H), 4.11 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.93-3.85 (m, 2H), 3.72-3.66 (m, 3H), 3.63-3.61 (m, 1H), 3.59-3.54 (m, 2H), 3.48-3.43 (m, 1H), 3.26 (s, 2H), 2.83 (d, J = 18.7 Hz, 1H), 2.67 (dd, J = 16.8, 3.5 Hz, 1H), 2.54 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.28-2.22 (m, 3H), 2.07-1.92 (m, 3H), 1.87-1.79 (m, 4H), 1.72-0.96 (m, 30H), 0.76 (d, J = 7.6 Hz, 3H); HRMS (ESI) calcd. for C53H69N2O9 (M+H)⁺ : 877.5003, found : 877.5015.

2-bromo-N-(2-((7-(N,N-dimethylsulfamoyl)benzo[c][1,2,5]oxadiazol-4-yl)amino)eth yl)acetamide (15)

將溴乙酸-N-羥基琥珀醯亞胺酯 (0.2173 克，0.9207 毫莫耳) 置於含有磁石之 25 毫升圓底瓶中，加入四氫呋喃 (8.5 毫升) 使之溶解；另外將化合物 7-EDADBD (0.2021 克，0.7083 毫莫耳) 加入四氫呋喃 (0.7 毫升) 溶解後 (呈橘色混濁)，利用

針筒式幫浦將化合物 7-EDADBD 在常溫下慢慢滴入含有磁石之反應瓶中，(約 0.35 毫升/小時)，持續滴入 2 小時後，抽氣過濾掉未反應完之起始物固體，濾液經減壓 濃縮後可得粗產物，先以二氯甲烷再結晶純化，剩下再結晶液的部分再經由加壓 矽膠管柱層析法分離純化，沖提液為甲醇/二氯甲烷 (3:47)，可得黃色固體化合物 15 (0.1174 克)，產率為 41%，回收起始物後產率為 91% (brsm)。

m.p. 186-188 ℃; TLC (MeOH/CH2Cl2 = 3/47) Rf = 0.34; ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.89 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.83 (s, 2H), 3.58 (m, 4H), 2.80 (s, 6H); HRMS (ESI) calcd. for C12H15N5O4SBr(M+H)⁺ : 404.0028, found : 404.0043.

N-(2-((7-(N,N-dimethylsulfamoyl)benzo[c][1,2,5]oxadiazol-4-yl)amino)ethyl)-2-((6-(

(7R,13S,17S)-13-methyl-3,17-bis((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-7,8,9,11,12,13,14, 15,16,17-decahydro-6H-cyclopenta[a]phenanthren-7-yl)hexyl)amino)acetamide (16)

將化合物 8 (83.9 毫克，0.155 毫莫耳) 置於含有磁石之 10 毫升圓底瓶中，加 入二甲基甲醯胺 (0.16 毫升) 使之溶解，打入 N,N-二異丙基乙基胺 (0.009 毫升，

0.0518 毫莫耳)；另外將化合物 15 (21.8 毫克，0.0537 毫莫耳) 加入二甲基甲醯胺 (2.6 毫升) 溶解後，利用針筒式幫浦在常溫下慢慢滴入化合物 8 中 (約 0.26 毫升/

小時)，持續滴入 10 小時後，利用高真空抽乾溶劑，再用甲醇帶 3 次可得粗產物，

最後經由加壓矽膠管柱層析法分離純化，沖提液為甲醇/二氯甲烷 (3:47)，可得橘 色發泡狀液體化合物 16 (52.6 毫克)，產率為 98%。

TLC (MeOH/CH2Cl2 = 3/47) Rf = 0.26; ¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.82 (d, J = 8.0

Hz, 1H), 7.79 (br, 1H), 7.17-7.14 (m, 1H), 7.00 (br, 1H), 6.81 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.35-5.33 (m, 1H), 4.64-4.62 (m, 1H), 3.90-3.88 (m, 2H), 3.72-3.45 (m, 8H), 3.27 (s, 2H), 2.87-2.81 (m, 7H), 2.69 (dd, J = 16.7, 4.1 Hz, 1H), 2.52 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.30-2.27 (m, 2H), 2.04-1.80 (m, 10H), 1.68-0.99 (m, 33H), 0.77 (d, J = 7.3 Hz, 3H); HRMS (ESI) calcd. for C46H69N6O8S (M+H)⁺ : 865.4898, found : 865.4840.

4-nitrophenyl-(6-((7R,13S,17S)-3,17-dihydroxy-13-methyl-7,8,9,11,12,13,14,15,16,1 7-decahydro-6H-cyclopenta[a]phenanthren-7-yl)hexyl)carbamate (17)

將二(對硝基苯)碳酸酯 (0.1896 克，0.6222 毫莫耳) 置於含有磁石之 10 毫升圓 底瓶中，加入二氯甲烷 (3.74 毫升) 使之溶解，打入 N,N-二異丙基乙基胺 (0.16 毫 升，0.9348 毫莫耳)；另外將化合物 8 (0.1682 克，0.3116 毫莫耳) 加入二氯甲烷 (0.94 毫升) 溶解後，利用針筒式幫浦在常溫下慢慢滴入含有磁石之反應瓶中 (約 0.94 毫升/小時)，持續滴入 1 小時後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液和二氯甲烷萃取，所得 之有機層再以飽和碳酸氫鈉水溶液萃兩次，最後以飽和食鹽水溶液萃一次，收集 有機層，經無水硫酸鎂乾燥、過濾和減壓濃縮後可得粗產物，以加壓矽膠管柱層 析法分離純化，沖提液為乙酸乙酯/正己烷 (1:3)，可得無色發泡狀液體化合物 17 (0.1724 克)，產率為 79%。

TLC (EtOAc/Hexane = 1/3) Rf = 0.27; ¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.21 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.18-7.15 (m, 1H), 6.82 (dd, J = 8.9, 2.1 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.37-5.34 (m, 1H), 5.16 (br, 1H), 4.67-4.62 (m, 1H), 3.95-3.87

(m, 2H), 3.72 (m, 1H), 3.59-3.56 (m, 1H), 3.49-3.44 (m, 1H), 3.23 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 2.86 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 2.70 (dd, J = 16.8, 5.3 Hz, 1H), 2.34-2.24 (m, 2H), 2.09-1.80 (m, 6H), 1.76-0.97 (m, 29H), 0.79 (d, J = 7.3 Hz, 3H); HRMS (ESI) calcd. for C₄₁H₅₆N₂O₈Na (M+Na)⁺ : 727.3934, found : 727.3940.

N,N-dimethyl-7-((2-(3-(6-((7R,13S,17S)-13-methyl-3,17-bis((tetrahydro-2H-pyran-2

-yl)oxy)-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-decahydro-6H-cyclopenta[a]phenanthren-7-yl)h exyl)ureido)ethyl)amino)benzo[c][1,2,5]oxadiazole-4-sulfonamide (18)

將化合物 17 (73.1 毫克，0.1037 毫莫耳) 和化合物 7-EDADBD (37.4 毫克，

0.1311 毫莫耳) 置於含有磁石之 10 毫升圓底瓶中，加入二氯甲烷 (2 毫升) 使之溶 解 (呈橘黃色混濁)，打入 N,N-二異丙基乙基胺 (0.054 毫升，0.3111 毫莫耳) 後便 呈橘黃色澄清，常溫下反應 1.5 小時。加入飽和碳酸氫鈉水溶液和二氯甲烷萃取，

所得之有機層再以飽和碳酸氫鈉水溶液萃兩次，最後以飽和食鹽水溶液萃一次，

收集有機層，經無水硫酸鎂乾燥、過濾和減壓濃縮後可得粗產物，以加壓矽膠管 柱層析法分離純化，沖提液為甲醇/二氯甲烷 (1:24)，可得橘色發泡狀液體化合物 18 (53.4 毫克)，產率為 61%。

TLC (MeOH/CH2Cl2 = 1/24) Rf = 0.35; ¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (br, 1H), 7.17-7.14 (m, 1H), 6.81-6.79 (m, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.35-5.31 (m, 1H), 5.25 (br, 1H), 4.81 (br, 1H), 4.64-4.62 (m, 1H), 3.93-3.86 (m, 2H), 3.71 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.59-3.40 (m, 6H), 3.10 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.86-2.80 (m, 7H), 2.67 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 2.26-2.24 (m, 2H), 2.07-1.78 (m, 8H),

1.72-0.94 (m, 29H), 0.77 (d, J = 7.8 Hz, 3H); HRMS (ESI) calcd. for C45H66N6O8NaS (M+Na)⁺ : 873.4561, found : 873.4561.

1-(2-(4-(3-hydroxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)phenoxy)ethyl)-3-(6-((7R,13S,17S)-13-methyl-3,17-bis((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-decahyd ro-6H-cyclopenta[a]phenanthren-7-yl)hexyl)urea (19)

將化合物 17 (84.6 毫克，0.1200 毫莫耳) 和化合物 4'-EA-3-HF (42.0 毫克，

0.1413 毫莫耳) 置於含有磁石之 10 毫升圓底瓶中，加入二氯甲烷 (2.4 毫升) 使之 溶解 (呈黃色混濁)，打入 N,N-二異丙基乙基胺 (0.063 毫升，0.3600 毫莫耳)，常 溫下反應 4 小時候發現起始物還剩很多，便再加入 4-二甲氨基吡啶 (19.0 毫克，

0.1413 毫莫耳) 置於含有磁石之 10 毫升圓底瓶中，加入二氯甲烷 (2.4 毫升) 使之 溶解 (呈黃色混濁)，打入 N,N-二異丙基乙基胺 (0.063 毫升，0.3600 毫莫耳)，常 溫下反應 4 小時候發現起始物還剩很多，便再加入 4-二甲氨基吡啶 (19.0 毫克，

在文檔中 I. 合成3-羥基黃酮雌二醇螢光探針並探討連接子對於分子光物理性質及自組裝行為的影響 II. 發展可快速偵測光氣之螢光探針 (頁 124-175)