在我們的論文中，我們利用定點飽和突變的方式來研究酵母菌 ERG7 中其胺基酸 Trp390、Trp587 與 Phe528 在酵素中對於結構和催 化機制的影響，我們發現它們分別對於 A 環、C 環、骨架重排還有受 質通道具有一定的影響。其中，Trp587 與 Tyr99 和 Phe699 間的交互 作用也讓我們感到十分有趣，所以在未來我們會利用多點突變的實驗 方式進行三者的雙定點突變分析與三定點突變分析，來觀察其產物比 例與變化。
我們也正在努力建構 HEM1、ERG7 與 ERG1 基因缺陷的酵母菌 突變株，其中ERG1 為將鯊烯氧化生成氧化鯊烯的酵素。這個突變株 可以讓我們另外添加受質進行突變株的體外（in vitro）分析實驗，這 樣可以避免下游酵素的影響讓我們得到更多詳細的資訊。另外一個我 們一直努力的方向則是將氧化鯊烯環化酵素進行大量表現與純化，若 可以得到大量的蛋白質我們就可以進行酵素動力學的研究與蛋白質 X-ray 結晶結構的分析，這將使我們對於氧化鯊烯環化酵素有更進一 步的了解。
第六章 參考文獻
1. Allayee, H.; Laffitte, B. A.; Lusis, A. J., Biochemistry. An absorbing study of cholesterol. Science 2000, 290, 1709-1711.
2. Vance, D. E.; Van den Bosch, H., Cholesterol in the year 2000.
Biochim Biophys Acta 2000, 1529, 1-8.
3. T. Schulz-Gasch, M. Stahl, J Comput Chem 2003, 24, 741-753.
4. Harvey, P. C. C. a. R. A., Lippincotts Illustrated Review Biochemistry.
Lippincott Williams & Wilkins, 2001, 173-185.
5. Simons, K.; Toomre, D., Lipid rafts and signal transduction. Nat Rev Mol Cell Biol 2000, 1, 31-39.
6. Simons, K.; Ehehalt, R., Cholesterol, lipid rafts, and disease. J Clin Invest 2002, 110, 597-603.
7. V. Quesney-Huneeus, H. A. Galick, M. D. Siperstein, S. K. Erickson, T. A. Spencer, J. A. Nelson, J Biol Chem 1983, 258, 378-385.
8. V. Quesney-Huneeus, M. H. Wiley, M. D. Siperstein, Proc Natl Acad.
Sc.i U S A. 1979, 76, 5056-5060
9. Chugh, A.; Ray, A.; Gupta, J. B., Squalene epoxidase as
hypocholesterolemic drug target revisited. Prog Lipid Res 2003, 42, 37-50.
10. Dougherty, D. A., Cation-pi interactions in chemistry and biology: a new view of benzene, Phe, Tyr, and Trp. Science 1996, 271, 163-168 11. Grundy, S. M., HMG-CoA reductase inhibitors for treatment of
hypercholesterolemia. N Engl J Med 1988, 319, 24-33.
12. T. Dang, I. Abe, Y. F. Zheng, G. D. Prestwich, Chem Biol 1999, 6, 333-341.
13. B. DiDomenico, Curr Opin Microbiol 1999, 2, 509-515.
14. P. C. C. a. R. A. Harvey, Lippincotts Illustrated Review Biochemistry, Lippincott Williams & Wilkins, 2001. 173-185.
15. I. Abe, Y. F. Zheng, G. D. Prestwich, Biochemistry 1998, 37,
5779-5784.
16. R. Xu, G. C. Fazio, S. P. Matsuda, Phytochemistry 2004, 65, 261-291.
17. I. Abe, M. Rohmer, G. D. Prestwich, Chem. Rev. 1993, 93, 2189-2206.
18. J. A. Zoltewicz, N. M. Maier, J. Org. Chem. 1998, 63, 4985-4990.
19. P. C. Miklis, R. Ditchfield, T. A. Spencer, J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 10482-10489.
20. J. P. Gallivan, D. A. Dougherty, Proc Natl Acad Sci U S A 1999, 96, 9459-9464.
21. H. S. Robinson, J Natl Med Assoc 1970, 62, 474-480.
22. D. H. Barton, M. J. Day, R. H. Hesse, M. M. Pechet, J Chem Soc [Perkin 1] 1975, 2252-2256.
23. E. J. Corey, S. C. Virgil, J. Am. Chem. SOC. 1991, 113, 4025-4026.
24. P. G. Barton, F. D. Gunstone, J Biol Chem 1975, 250, 4470-4476.
25. B. robustell, I. Abe, G. D. prestwich, tetrahedron letters 1998, 39, 957-960.
26. B. J.robustell, I. Abe, G. D. prestwich, tetrahedron letters 1998, 39, 9385-9388.
27. E. J. Corey, D. D. Staas, J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 3526-3530.
28. E. J. Corey, H. Cheng, C. H. Baker, S. P. T. Matsuda, D. Li, X. Song, J.
Am. Chem. Soc. 1997, 119, 1277-1288.
29. E. J. Corey, C. H. B. Hengmiao Cheng, S. P. T. Matsuda, D. Li, X.
Song, J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 1289-1298.
30. J. Corsino, P. R. de Carvalho, M. J. Kato, L. R. Latorre, O. M. Oliveira, A. R. Araujo, V. D. Bolzani, S. C. Franca, A. M. Pereira, M. Furlan, Phytochemistry 2000, 55, 741-748.
31. E. J. Corey, S. P. Matsuda, C. H. Baker, A. Y. Ting, H. Cheng, Biochem Biophys Res Commun 1996, 219, 327-331.
32. W. S. Johnson, S. D. Lindell, J. Steele, J. Am. Chem. SOC. 1987, 109,
33. W. S. Johnson, S. J. Telfer, S. Cheng, U. Schubert, J. Am. Chem. SOC.
1987, 109, 2517-2518.
34. R. J. Griffin, M. F. Stevens, Anticancer Drug Des 1992, 7, 443-449.
35. R. Thoma, T. Schulz-Gasch, B. D'Arcy, J. Benz, J. Aebi, H. Dehmlow, M. Hennig, M. Stihle, A. Ruf, Nature 2004, 432, 118-122.
36. K. U. Wendt, K. Poralla, G. E. Schulz, Science 1997, 277, 1811-1815.
37. P. Milla, A. Lenhart, G. Grosa, F. Viola, W. A. Weihofen, G. E. Schulz, G. Balliano, Eur J Biochem 2002, 269, 2108-2116.
38. T. Hoshino, K. Shimizu, T. Sato, Angew Chem Int Ed Engl 2004, 43, 6700-6703.
39. K. U. Wendt, A. Lenhart, G. E. Schulz, J. Mol. Biol. 1999, 286, 175-187
40. I. Abe, M. Bai, X. Y. Xiao, G. D. Prestwich, Biochem Biophys Res Commun 1992, 187, 32-38.
41. E. J. Corey, H. Cheng, C. H. Baker, S. P. T. Matsuda, D. Li, X. Song, J. Am. Chem. Soc. 1997,119, 1277-1288.
42. E. E. Van Tamelen, J. Willet, M. Schwartz, R. Nadeau, J Am Chem Soc
1966, 88, 5937-5938.
43. M. J. Segura, B. E. Jackson, S. P. Matsuda, Nat Prod Rep 2003, 20, 304-317.
44. K.U. Wendt, Angew. Chem. Int. Ed. 2005,44, 3946-3955.
45. K.U. Wendt, A. Lenhart, G.E. Schulz, J. Mol. Biol. 1999,286, 175-187.
46. E. J. Corey, D. D. Staas, J. Am. Chem. Soc. 1998,120, 3526-3527.
47. C. Jenson, W. L. Joergensen J. Am. Chem. Soc. 1997,119, 10846-10854.
48. B. A. Hess Org. Lett. 2003,5, 165-169.
49. B. A. Hess J. Am. Chem. Soc. 2002,124, 10286-10287.
50. D. Gao, Y.-K. Pan, K. Byun, J. Gao J. Am. Chem. Soc. 1998,120,
51. B. M. Joubert, L. Hua, S. P. T. Matsuda Org. Lett. 2000,2, 339-345.
52. T. K. Wu, Y. T. Liu, F. H. Chiu, C. H. Chang Org. Lett. 2006,21, 4691-4696.
53. K.U. Wendt, Angew. Chem. Int. Ed. 2005,44, 3966-3972.
54. E. J. Corey, S. C. Virgil, H. Cheng, C. H. Baker, S. P. T. Matsuda, V.
Sigh, S. Sarshar J. Am. Chem. Soc. 1995,117,11819-11825.
55. C. Jenson, W. L. Joergensen J. Am. Chem. Soc. 1997,119, 10846-10854.
56. B. A. Hess, Jr., J. Am. Chem. Soc., 2002, 124, 10286-10287.
57. B. A. Hess, Jr., Org. Lett., 2003, 5, 165-169.
58. I. Abe, Nat. Prod. Rep.,2007, 24, 1311-1331.
59. T. K. Wu, Y. T. Liu, C. H. Chang ChemBioChem 2005, 6, 1177-1181.
60. T. K. Wu, Y. T. Liu, C. H. Chang, M. T. Yu, H. J. Wang J. Am. Chem.
Soc. 2005, 128, 6414-6419.
61. T. K. Wu, C. H. Chang ChemBioChem 2004, 5, 1712-1715.
62. S. Lodeiro, W. K. Wilson, H. Shan, S. P. T. Matsuda Org. Lett. 2006, 8, 439-442.
63. T. K. Wu, M. T. Yu, Y. T. Liu, C. H. Chang, H. J. Wang, E. W. G.
Diau Org. Lett. 2006, 8, 1319-1322.
64. K. U. Wendt, G. E. Schulz, E. J. Corey, D. R. Liu, Angew Chem Int Ed Engl 2000, 39, 2812-2833.
65. W. K. W. Jennifer B. R. Herrera, and Seiichi P. T. Matsuda, J. Am.
Chem. Soc. 2000, 122, 6765-6766.
66. E. A. Hart, L. Hua, L. B. Darr, W. K. Wilson, J. Pang and S. P. T.
Matsuda J. Am. Chem. Soc. 1999, 121, 9887-9888.
67. S. Lodeiro, M. J. R. Segura, M. Stahl, T.Schulz-Gasch, S. P. T.
Matsuda ChemBioChem 2004, 5, 1581-1589.
68. S. Lodeiro, T.Schulz-Gasch, S. P. T. Matsuda J. Am. Chem. Soc. 2005,
2000, 122, 6765-6766.
70. T. Hoshino, T. Sato Chem.Commun. 2002, 291-301.
71. T. Merkofer, C. Pale-Grosdemange, K. U. Wendt, M. Rohmer, K.
Poralla Tetra. Lett. 1999, 40, 2121-2124.
72. D. J. Reinert, G. Balliano, G. E. Schulz Chem. Biol. 2004, 11, 121-126.
73. Sato T, Hoshino T. Biosci Biotechnol Biochem. 1999, 63, 1171-1180 74. Christine Full, Karl Poralla FEMS Microbiology Letters. 2000, 183,
221-224
75. Sato T, Hoshino T, Abe T. Chem. Commun. 1998, 2617-2618 76. Rajamani R, Gao J. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 12768-12781 77. 李文暄, 利用飽和定點突變方法研究酵母菌氧化鯊烯環化酵素內
的假設活性區胺基酸對於催化環化/重組反應的影響. 碩士論文,國 立交通大學生物科技研究所 2007.
78. 溫皓宇, 利用飽和定點突變對氧化鯊烯環化酵素內假設活性區域 殘基進行結構─反應關係之研究. 碩士論文,國立交通大學生物科 技研究所 2007.
79. Suzuki M, Xiang T. Plant Cell Physiol. 2006, 47, 565–571