溫泉化妝產品機能驗證技術建置

溫泉水應用於化粧保養品是否具有皮膚功效，必須仰賴有效性之驗證，建立 化粧品功效篩選與評估平台，進行 in vitro 及 in vivo 有效性評估測試，確認溫泉 水添加於化粧品之有效劑量。因此，針對溫泉溫泉化粧產品機能驗證技術，包含：

1. 針對台灣溫泉特性，蒐集整理進行溫泉化粧產品機能驗證之可行技術，包 括：

(1) 建置溫泉化粧產品機能之「溫泉產品安全性」的驗證標準作業；

(2) 建置溫泉化粧產品機能之「溫泉產品有效性」的驗證標準作業。

2. 針對台灣溫泉特性進行溫泉化粧產品機能驗證技術能力，本校現行已具備 的能力，包括：

(1) 溫泉水成分之抗氧化活性評估，包括(A)捕捉 DPPH 自由基能力測試；(B) TEAC 總抗氧化能力測試；(C)抑制 liposome 脂質過氧化能力測試；(D) 清除 NO 能力測試。

(2) 溫泉水成分之應用於防曬產品評估，包括(A)紫外線吸收測定；(B)防曬 係數測定。

(3) 溫泉水成分之美白能力評估，包括(A)體外抑制酪胺酸酵素試驗；(B)體 外黑色素細胞抑制試驗。

(4) 人體（in vivo）有效性試驗（膚質評估項目），包括(A)保濕能力測試；

(B)皮膚酸鹼值測試；(C)皮膚彈性變化測試；(D)皮膚紋理、粗糙度檢測：

測試者在使用產品後，皮膚紋理、粗糙度變化測試；(E)表皮水份流失試 驗；(F)美白功效試驗；(G)全臉膚質評估。

本工作項機能驗證技術建置如表2.17 所示。

表2.17 溫泉化粧產品驗證技術建置

Courage+Khazaka Cutometer MPA580

及Visia Complexion

Analysis 數據

spots, pores, whrinkles, textures,

少) 少) porphyrine, UV liposome 加 入反應，反應 inhibiation/

Melanoma

In vitro In vitro In vivo

以下為溫泉水之有效性測試平台：

A. 溫泉水成分之抗氧化活性評估

(A) 捕捉 DPPH 自由基能力測試 Scavenging of 2,2-diphenyl-1- picryl-hydrazyl ( DPPH ) assay‧

(B) TEAC 總抗氧化能力測試 Scavenging of Radical Cation

2,2-azinobis- (3-ethylbenzothiazolin-6-suphonic acid )( ABTS⁺ ) assay 脂質過氧化現象，而脂質氧化的二級產物，像丙二醛（Malondialdehyde, MDA）就會造成遺傳物質 DNA 的損傷。此系統是藉由抗壞血酸（Ascorbic

734 100

1 734 ⎟ ×

517 100

1 517 ⎟ ×

Acid）將三價鐵離子還原成二價鐵離子，之後二價鐵與雙氧水反應產生羥 基自由基，而羥基自由基攻擊磷脂質造成脂質過氧化現象。加入 TBA，加 熱後測其反應物硫代巴比妥酸分析（Thiobarbituric Acid Reactive Substances, TBARS）主要是 MDA 呈現紅色，若加入的樣品可以抑制脂質過氧化，則 (TBA)2-MDA 含量會減少，呈色會較淺，偵測吸光值 OD535 nm，與空白對 照組的吸光值作比較，求出抑制百分比。

Nitric Oxide Scavenging Percentage (%)=（1—待測樣品在540 nm下之吸光値／空 白對照組在540 nm下之吸光値）×100

Inhibition ( % ) =[( Control OD450－Sample OD450)/Control OD450]×100%

Sample OD450：樣品扣除干擾顏色後，於波長450 nm所測的吸光值

535 100

1 535 ⎟ ×

Control OD450：不加待測樣品之blank，於波長450 nm所測的吸光值

(B) 細胞內酪胺酸酶活性試驗

(a) 培養 B16 黑色素細胞於 6 孔盤中，置於 37 ℃培養箱中培養 24 小時。

(b) 加入定量之樣品，繼續培養 2~3 天。

(c) 利用細胞溶解液打破細胞進行酪胺酸酶活性分析。

(d) 細胞溶出液加入酪胺酸溶液反應 4 小時，取 100 μl 加至 96 well ELISA reader plate，利用 ELISA reader 波長 492 nm 偵測吸光值。

(C) 細胞黑色素抑制試驗

(a) 培養 B16 黑色素細胞於 6 孔盤中，置於 37 ℃培養箱中培養 24 小時。

(b) 加入定量之樣品，繼續培養 2~3 天。

(c) 收取黑色素細胞上清液進行抑制效果分析。

(d) 分析樣品取 100 μl 加至 96 well ELISA reader plate，利用 ELISA reader 波長 492 nm 偵測吸光值。

C. 防曬測試

(a) 以石英玻片黏貼上 3M Tape 經背景校正。

(b) 於 3M Tape 上塗抹 2 mg/cm²的待測樣品，靜置20 分鐘。

(c) 以測定儀測量 280~400 nm 之紫外線穿透率。

(d) 重複測量後可求得平均後之 SPF 值。

D. 細胞保護測試

(a) 將細胞培養於 3.5 mm 的培養皿中

(b) 照射 UVB 前，先將 DMEM 培養基吸取掉，加入 1 ml 的 PBS，再 照射紫外線UVB 48 mJ/cm²。

(c) 加入不含血清之 DMEM 培養基 2 ml，後分別加入試驗樣品 0.01 mg/ml 等濃度劑量。

(d) 後置細胞 Incubator 中，5% CO2、溫度37℃，48 小時後進行細胞存 活率分析。

E. 人體有效性試驗

(b) 使用前先測定基礎數據，之後進行有效性試驗。

(c) 選定受試者臉部或無毛髮區域數個(每一區的面積約為 3x3 cm²)。

(d) 每週測定選定區域之皮膚變化。

(e) 連續測量數週，比較使用前後之皮膚改善情形。

F. 溫泉化粧產品之「安全性」的驗證

人體皮膚之貼布試驗：以閉鎖性測試-皮膚過敏性貼布試驗，評估待測的化 粧保養產品對於人體皮膚的刺激性及安全性反應。

方法如下：取適量之待測的樣品，作用於受測試者的上手臂內側皮膚，由於 此處肌膚為較細緻、敏感、不易曝曬到陽光的部位，實驗選擇將貼布貼於此處。

分別作用24、48、72小時後，移除皮膚貼布，並觀察人體皮膚是否有紅斑、紅疹、

搔癢、疼痛、紅腫等其他異狀，再持續觀察24小時。

3. 針對台灣溫泉應用之溫泉化妝保養品驗證規範管理機制

現今國內化妝品製造及其技術在衛生署職掌中已有規範標準，但就溫泉化妝 品製劑而言，目前仍無明確的管理規範方式，本計畫就化妝品製造及其有關技術 規範，建議可在來源與製造驗證、核發及稽查三方面著手，並就所屬職掌建議在 溫泉取供事業證明（來源證明）、溫泉用途申請（用途檢核）、溫泉用量申請（泉 量管制）、溫泉稀釋變更申請（溫泉標準與總量管制）四方面，由水利署或縣巿 政府擔任對應窗口，並依產銷履歷概念核發溫泉產品批號，掌控管理其製造總 量，主要是考量以溫泉為基礎水的化妝保養品其成品之檢驗有相當大的技術困 難，因此建議由源頭及總量進行管制，以方便日後稽查工作。在稽查工作方面，

建議僅就溫泉添加不實稽查、產品批號與數量查核、未核可使用溫泉之產品稽查 三方面著手即可（圖2.23 所示）。

圖2.23 溫泉化妝保養品驗證規範流程圖