組織培養

桔 梗 毛 狀 根 生 產 桔 梗 皂 苷 之 培 養 條 件 研 究 利用具有快速 生長特性之轉 殖毛狀根生產 植物二 次代謝物是組織培養之新趨勢，本研究以桔梗毛狀 根作為試驗材料，逐步建立培養桔梗毛狀根生質量 及成分產量之最佳化條件。試驗以內含液態培養基 之 125 mL 三角瓶於水平迴轉震盪器上進行暗培 養，首先藉由生長時序試驗，得知以20 mL 培養液 接種0.05%比例 (w/v) 之毛狀根根尖時，在培養 8 週後有最高乾重產量14.97 g/L，培養 9 週後有最高 桔梗皂苷D 含量 6.16 mg/g 及最高產量 81.57 mg/L (圖 25)；由接種量試驗得知，接種量與培養時間兩 者間具有交感效應，亦即提高接種量可縮短達到最 高乾重所需之培養時間；以三種鹽類配方 MS、B5 及WPM 作為毛根培養液，結果顯示桔梗毛狀根在 B5 配方中生長表現最佳 (表 3-1)；蔗糖濃度試驗則 顯示，提高培養基中蔗糖含量至204.5 mM 時，毛

狀根乾重、桔梗皂苷D 含量及其產量均顯著提高，

分別為 16.96 g/L、7.76 mg/g 及 134.01 mg/L (表 3-2)。在添加誘引劑促進桔梗皂苷 D 含量試驗，結 果顯示添加1.25 mg/L 離層酸後 3-9 天間，均可顯著 提高桔梗皂苷D 含量，其中最高者為處理 3 天後，桔 梗皂苷D 含量為 20.0 mg/g，產量則提高至 281.8 mg/L；

誘引劑中表現次佳者為添加5 mg/L 之茉莉酸，在第 5 天後桔梗皂苷D 含量可提高至 9.2 mg/g，產量則提高 至111.9 mg/L (表 3-3)。

小 花 蕙 蘭 組 織 培 養 大 量 繁 殖 與 栽 培 管 理 體 系 利用蘭花瓶 (直徑 9 cm、高 14 cm) 與瓶身較高之 梅酒瓶 (直徑 7 cm、高 17 cm) 進行玉華四季蘭瓶 苗之發根培養 (圖 26)，結果顯示以梅酒瓶培養之瓶 苗，其地上部及根部均較蘭花瓶培養之瓶苗生長健 壯，葉芽高於 10 公分且有較長之根部。將此瓶苗 出瓶後以唐山石、珍珠石與蛭石混合之介質進行馴 化栽培，蘭株皆生長良好。太平洋報歲蘭之芽體增 殖、生長與發根速率相較於玉華四季蘭相對緩慢 (圖 27)，目前每一階段之繼代培養期間均需 6 個月以上，

圖25 桔梗毛狀根時序培養中 (A) 毛狀根乾重、(B) 桔梗皂苷 D 產量變化之情形。

表3-1 培養基鹽類配方及其濃度處理對桔梗毛狀根乾重、桔梗皂苷D 含量及產量之影響，以及各處理培養液中酸鹼值與殘 糖含量變化之情形

培養基 鹽類配方

乾重 (g/L)

桔梗皂苷D 含量 (mg/g)

桔梗皂苷D 產量

(mg/L) 酸鹼值 蔗糖殘糖含量 (mM)

葡萄糖殘糖含量 (mM) 1/4MS 8.20 b^z 0.33 cd 2.69 bc 6.77 a 0 b 21.00 c 1/2MS 6.33 bc 0.39 c 2.17 c 5.70 b 0 b 36.06 a MS 5.48 bc 0.79 b 4.76 b 4.76 c 0 b 26.06 b B5 12.76 a 1.04 a 13.26 a 7.44 a 0.38 b 8.61 d WPM 4.44 c 0.21 d 1.52 c 4.59 c 2.22 a 28.11 b

z 英文字母相同者表示經 LSD 5%分析後不具顯著差異。

表3-2 蔗糖濃度對桔梗毛狀根乾重、桔梗皂苷D 含量及其產量之影響，以及經 10 週培養後各處理培養液中酸鹼值、蔗糖

為達到量產效率，有進一步改進培養基組成之需求。

玉華四季蘭盆栽葉面肥試驗之結果顯示，處理組在花 梗數、花梗長度及每梗花朵數均高於對照組 (圖 28)，

顯示玉華四季蘭可藉由適時分芽與肥培管理達到催 花的效果 (表 3-4)。本研究結果建議，小花蕙蘭瓶苗 發根階段宜改用瓶身高度較高之培養瓶，如梅酒瓶進 行培養，有利小苗及根部生長；太平洋報歲蘭之組培 繁殖與發根培養，則需進一步測試適宜培養基組成，

以提高量產效率；玉華四季蘭則可藉由適時分芽與肥 培管理，達到催花的效果 (表 3-5)。

小花蕙蘭優質 種苗供應之產 業化系統 本計 畫針對(1)組培苗大量繁殖與養成技術、(2)病害檢測 與管理模式、(3)捲揚防雨設施管理，以建構符合小 花蕙蘭外銷需求之健康種苗供應體系。研究結果顯 示，組培苗發根階段採用芽長芽方式可得每苗具有 2-4 芽的蘭苗(圖 29)，以此蘭苗進行馴化之存活率 較高，且蘭株生長旺盛。利用唐山石、珍珠石與蛭 石等混合介質進行小花蕙蘭組培苗馴化，其效果優 於花生殼與椰塊介質，但略差於水苔介質，然混合 介質具有操作簡便且效果一致的優點，可應用於組 培苗之馴化階段。設施種類與施藥與否對報歲蘭類 與四季蘭類芽體增殖效率並無顯著影響(圖 30)。捲 揚防雨設施可減少炭疽病與細斑病之擴散感染(圖 31)，但假球莖腐敗病係導因於種苗是否已受感染，

若利用無病種苗或實生組培苗可避免此一病害。捲 揚防雨設施環 境下施藥與否 對於葉片罹病 率之差 異並不顯著，若能減少施藥次數，又能維護蘭株品 質 ， 對 於 農 民 健 康 與 藥 劑 成 本 應 當 有 所 助 益(圖 32)。本研究已建立小花蕙蘭種苗供應、病害管理與 設施栽培等技術，若是再配合育種家、蘭農與貿易 商的獨到眼光，當可建構符合小花蕙蘭外銷需求之 健康種苗供應體系。

利 用 胚 拯 救 技 術 育 成 屬 間 雜 交 藍 紫 色 蝴 蝶 蘭 以 朵 麗 蘭

Doritis pulcherrima 、 朵 麗 蝶 蘭 Doritaenopsis Purple Martin 、 Dtps. Kenneth

Schubert、Dtps. Siam Treasure、Dtps. Freed’s Beautiful Girl、Dtps. Fire Cracker、Dtps. Tzu Chiang Sapphire 以及蝴蝶蘭

Phalaenopsis violacea、Phal. equestris

等 藍 紫 色 親 本 互 交 ， 以 及 以 白 花 蝴 蝶 蘭 種 原進行 20-35 個雜交組合。雜交種子進行無菌播種，以花寶 1 號為基礎培養基配合 0.1%活性炭、1-2%蔗糖以及 2.5%-5.0%香蕉與馬鈴薯之添加，繼代培養基亦同。

結果顯示以

Dor. pulcherrima、Dtps. Purple Martin 與 Dtps. Siam Treasure 為親本之雜交組合 CYT03、

CYT04、CYT10、CYT15、CYT16、CYT18、CYT20

圖28 玉華實生組培苗肥培試驗情形。

表3-4 不同生育階段肥培處理之氮、磷、鉀濃度組成表

氮 磷 鉀

mg kg^-1

催花期

T1 40 60 800

T2 20 60 900

CK 緩效肥180 天劑型 花梗期

T1 & T2 & CK 250 60 750

表3-5 不同肥培處理對小花蕙蘭開花之影響

處理 花梗數 花梗長 花朵數

T1 1.011.17 ^a 26.45.69^a 3.261.29^a T2 1.191.30 ^a 24.46.69^ac 3.221.13^a CK 0.441.00 ^b 21.14.22^bc 2.670.75^a

z 相同英文字母表示差異未達 5%顯著水準。

圖29 玉華四季蘭芽切組培苗馴化成活情形。

圖30 設施種類與施藥與否對報歲蘭類與四季蘭類芽體增殖之影響。

圖31 試驗調查與植株罹病情形。

圖32 設施種類與施藥與否對報歲蘭類與四季蘭類葉部病害發生之影響。

可獲得較多實生後代，株數介於118 -1,500 株，原球 體 與 小 苗 之 生 長 發 育 正 常 ； 而 以

Dtps. Freed’s

Beautiful Girl、Dtps. Fire Cracker、Dor. pulcherrima 為親本之雜交組合 CYT08、CYT09、CYT19，其實 生後代較少，株數介於 5-31 株，實生苗之葉片較堅 硬革質化，生長速度較為緩慢，且原球體與小苗有較 高的畸形率，達31-71% (表 3-6、圖 33)。

在文檔中 行政院農業委員會農業試驗所年報 (101年) (頁 62-66)