一、 鼠尾草酸與熊果酸抗氧化能力及清除 DPPH 自由基能力
TEAC 方法中鼠尾草酸與熊果酸與水溶性的維生素 E (Trolox) 的抗 氧化能力比較下，觀察到鼠尾草酸與熊果酸的總抗氧化能力分別是在維 生素 E-trolox 的 6.6±0.02、1.3±0.14 倍，即表示皆為 Trolox 的 6.6 和 1.3 倍的抗氧化能力，並且比維生素 E-Trolox 的抗氧化能力還要強，而主 要清除的自由基為 ROO．、RO．。但在清除 50％ DPPH 的自由基試驗 上，鼠尾草酸在 30.14±1.35 µmol/L 則可以清除 50％ DPPH 自由基的產 生，但熊果酸在實驗測試後，發現其結果再線性低，因此以 ND 表示 (表 3)。
二、 鼠尾草酸和熊果酸對血管平滑肌細胞之影響(-細胞毒性傷害)
利用細胞計數方法測量鼠尾草酸和熊果酸對大鼠血管平滑肌細胞 的毒性傷害。大鼠血管平滑肌細胞培養在6孔盤中，並經無血清培養基 下同步化24小時後，給予不同濃度的鼠尾草酸與熊果酸 (10、20、30、
40和50 µmol/L ) 再處理25小時，以 Trypan blue 染色後，以血球計數盤 計算總細胞的數目。實驗結果顯示 (圖10、11) 鼠尾草酸與熊果酸分別 在濃度30 µmol/L 以上時，兩者都會導致細胞的毒性，因此分別選擇10 µmol/L、20 µmol/L 的鼠尾草酸與熊果酸做為以下的實驗濃度。
三、 評估不同濃度瘦體素對血管平滑肌細胞增生之影響
大鼠血管平滑肌細胞培養於6孔盤，並經無血清培養基下同步化24 小時後，給予不同濃度的瘦體素 (0、100、200、300、500 ng/ml) 處理24 小時，以 Trypan blue 染色後，以血球計數盤計算總細胞的數目。實驗 結果顯示 (圖12)，隨濃度的增加，細胞存活率呈現劑量相關性 (dose dependent)，在 500 ng/ml 濃度時，增生表現最強，因此選擇 500 ng/ml 瘦 體素做為以下的實驗濃度。
四、 評估瘦體素誘導血管平滑肌細胞增生在不同時間下之影響
大鼠血管平滑肌細胞培養於 6 孔盤，並經無血清培養基下同步化 24 小時後，給予 500 ng/ml 瘦體素，並分別處理 24、48、72 小時，以 Trypan
blue 染色後，以血球計數盤計算總細胞的數目。實驗結果顯示 (圖 13)，
加入瘦體素 24 小時後的增生表現最強，而在 48、72 小時增生則有減弱 的現象，因此選擇以瘦體素作用 24 小時為以下實驗的作用時間。
五、 鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素誘發之血管平滑肌細胞增生之影響
大鼠血管平滑肌細胞培養於 6 孔盤，並經無血清培養基下同步化 24 小時後，先分別給予濃度 10、20 µmol/L 的鼠尾草酸與熊果酸預處理 1 小時，再給予 500 ng/ml 瘦體素刺激 24 小時，以 Trypan blue 染色後，
再以血球計數盤計算總細胞中存活的數目。實驗結果顯示 (圖 14)，血管 平滑肌細胞在瘦體素的誘導下，細胞的增生明顯增強，並分別在有加入 鼠尾草酸與熊果酸 (10、20 µmol/L) 後的組別，明顯地都抑制細胞存活 率的表現，並隨著鼠尾草酸與熊果酸濃度的提高，抑制能力越強，表示 鼠尾草酸與熊果酸皆具有抑制瘦體素誘導的血管平滑肌細胞增生的作 用。
六、 鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素誘發之血管平滑肌細胞自由基生成之 影響
大鼠血管平滑肌細胞經無血清培養基下同步化 24 小時後，先分別 給予濃度 10、20 µmol/L 的鼠尾草酸與熊果酸預處理 1 小時，再給予 500 ng/ml 瘦體素刺激 24 小時後，加入 DCF-DA 與細胞一起放於培養箱中 30 分鐘，測其發光波長 485 nm 和發散光波長 528 nm 下的吸光值，實 驗結果 (圖 15、16)，分別觀察到，血管平滑肌細胞在瘦體素的誘導下，
細胞內產生的自由基明顯增強，而在分別加入鼠尾草酸與熊果酸在濃度 20 µmol/L 後，都較 10 µmol/L 時，其抑制 ROS 生成的能力較佳。
七、 以西方點墨轉漬法觀察瘦體素對血管平滑肌細胞 ERK 1/2 和立即性 早期磷酸化 ERK 1/2 蛋白之影響
大鼠血管平滑肌細胞經無血清培養基同步化24小時後，分別給予500 ng/ml 瘦體素作用於不同長度的時間 (0、1、5、10、20、30、60 分鐘)，
並以西方墨點電泳法測試在瘦體素刺激下不同時間點後，血管平滑肌細 胞中，ERK 1/2與立即性早期磷酸化 ERK 1/2蛋白的表現。實驗結果顯示
(圖 17)，在瘦體素刺激下不同的作用時間，對血管平滑肌細胞中的 ERK 1/2蛋白表現大多相同，但對立即性早期磷酸化 ERK 1/2蛋白的表現，則 隨瘦體素刺激作用時間的增加而增強，此現象持續到20分鐘，但於20分 鐘後表現明顯降低。並以此時間點作為以下相關實驗之時間點。
八、鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素誘發之血管平滑肌細胞ERK 1/2和立即性 早期磷酸化ERK 1/2蛋白之影響
藉由西方點墨電泳法測試鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素刺激血管平 滑肌細胞 ERK 1/2 與立即性早期磷酸化 ERK 1/2 蛋白表現的影響。大鼠 血管平滑肌細胞經無血清培養基下同步化 24 小時後，先分別給予濃度 10、20 µmol/L 的鼠尾草酸與熊果酸預處理 1 小時，再給予 500 ng/ml 瘦 體素刺激 20 分鐘。實驗結果顯示 (圖 18)，大鼠血管平滑肌細胞中的 ERK 1/2 蛋白表現幾乎一致。不過在立即性早期磷酸化 ERK 1/2 蛋白的表現 上觀察到，當大鼠血管平滑肌細胞在瘦體素的誘導下，立即性早期磷酸 化 ERK 1/2 蛋白明顯增強，當分別加入鼠尾草酸或熊果酸的組別，發現 都能抑制立即性早期磷酸化 ERK 1/2 蛋白的表現，而熊果酸抑制立即性 早期磷酸化 ERK 1/2 蛋白表現的能力，不論濃度是在 10 或是 20 µmol/L
時，都較同濃度的鼠尾草酸抑制能力為強。
九、 鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素誘發之血管平滑肌細胞血管平滑肌細 胞 NFκB p50 及 p65 蛋白之影響
利用萃取細胞核蛋白，透過西方點墨電泳法測試鼠尾草酸與熊果酸 對瘦體素刺激大鼠血管平滑肌細胞 NF-κB 蛋白質表現的影響。實驗結 果 (圖 19、20)，分別觀察到 NF-κB p50 與 p65 在瘦體素的作用下，都 比控制組有明顯的表現，並且在加入鼠尾草酸與熊果酸的組別，都能具 有抑制 NF-κB p50 與 p65 蛋白質的表現，當濃度在 10 µmol/L 時，可觀 察到熊果酸的抑制能力比鼠尾草酸強，相同的結果在濃度 20 µmol/L 時 也可以觀察到，且熊果酸 20 µmol/L 是四組中抑制能力是最強的。
十、 鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素誘發之血管平滑肌細胞核轉錄因子 NF-κB 之影響
利用免疫螢光染色法觀察大鼠血管平滑肌細胞，活化的 NF-κB p50 在細胞核內的表現。將大鼠血管平滑肌細胞培養在24孔盤中，經無血清
培養基下同步化24小時後，分別給予濃度10、20 µmol/L 的鼠尾草酸與熊 果酸預處理1小時，再給予500 ng/ml 瘦體素刺激24小時後。實驗結果 (圖 21)，在只有二抗不加一抗的存在下，可以觀察到背景是黑色的，而 PI 染色代表核位置的紅色，明顯存在著，表示無背景值的干擾。當大鼠血 管平滑肌細胞在瘦體素的誘導下，可觀察到核內的螢光綠明顯的比控制 組亮且深，表示在瘦體素的誘導下，NF-κB p50會被刺激活化，而進入 細胞核內表現，在加入濃度10 µmol/L 的鼠尾草酸與熊果酸時，觀察到 細胞核內的螢光綠明顯的減少且有出現些許的空洞，而螢光綠大都聚集 在細胞質，表示 NF-κB p50大多呈現無活性的狀態，而存在於細胞質 中，無法進入細胞核內活化表現，而此現象與控制組的結果相似，當提 高濃度至20 µmol/L 的鼠尾草酸與熊果酸時，觀察到細胞核內幾乎是黑 色的的空洞，螢光綠都聚集在細胞質，且螢光顏色也變淡，表示在鼠尾 草酸與熊果酸的作用下，能夠抑制瘦體素誘導大鼠血管平滑肌細胞 NF-κB p50活化進入細胞核內的表現，且在20 µmol/L 濃度時，抑制 NF-κ B p50活化進入細胞核內的表現能力又比10 µmol/L 濃度時佳。
十一、 鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素誘發之血管平滑肌細胞 MMP-2 蛋白 之影響
藉由西方點墨電泳法測試鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素刺激大鼠血 管平滑肌細胞 MMP-2 蛋白質表現的影響。大鼠血管平滑肌細胞經無血 清培養基下同步化 24 小時後，先分別給予濃度 10、20 µmol/L 的鼠尾草 酸與熊果酸預處理 1 小時，再給予 500 ng/ml 瘦體素刺激 24 小時。實驗 結果 (圖 22)，當大鼠血管平滑肌細胞在瘦體素的誘導下，MMP-2 蛋白 質的表現對照於控制組明顯增強，並分別加入鼠尾草酸與熊果酸後，觀 察到都具有抑制 MMP-2 蛋白質的表現，當濃度在 10 µmol/L 時，鼠尾 草酸與熊果酸的抑制能力差不多 (123.84±5、110.783±7)，但濃度在 20 µmol/L 時，熊果酸抑制大鼠血管平滑肌細胞 MMP-2 蛋白質表現的能力 較鼠尾草酸強 (73.55±6、96.31±8)，並且也是四組加藥組別中，抑制大鼠 血管平滑肌細胞 MMP-2 蛋白質表現能力最強的。
十二、 鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素誘發之血管平滑肌細胞 MMP-2 之影 響
藉由明膠蛋白酵素電泳法測試鼠尾草酸與熊果酸對瘦體素刺激大 鼠血管平滑肌細胞 MMP-2 分泌活性的影響。大鼠血管平滑肌細胞經無 血清培養基下同步化 24 小時後，先分別給予含濃度 10、20 µmol/L 的鼠 尾草酸與熊果酸之無血清培養基預處理 1 小時，再給予 500 ng/ml 瘦體 素刺激 24 小時。實驗結果 (圖 23)，當大鼠血管平滑肌細胞在瘦體素的 誘導下，MMP-2 分泌的活性對照於控制組明顯增強，當加入濃度 10 µmol/l 的鼠尾草酸與熊果酸時，都能抑制 MMP-2 活性的表現，且能力 相當 (102.69±3、98.05±3)。不過在 20 µmol/L 濃度時，抑制 MMP-2 分泌 的能力又比 10 µmol/L 濃度時佳，且熊果酸 20 µmol/L 的抑制能力是其 他三組中最強的。