附件一：封面格式
製藥與生物技術國家型計畫
全程結案成果報告
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（計畫名稱）
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計畫類別：□個別型計畫
□整合型計畫
計畫編號：NSC － － － － －
執行期間：
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計畫主持人：
共同主持人：
計畫參與人員：
本成果報告包括以下應繳交之附件：
□赴國外出差或研習心得報告一份
□赴大陸地區出差或研習心得報告一份
□出席國際學術會議心得報告及發表之論文各一份
□國際合作研究計畫國外研究報告書一份
執行單位：
中
華
民
國
年
月
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製藥與生物技術國家型計畫
全程結案成果報告
計畫編號：NSC 89~91-2323-B-039-001
執行期限：89 年 9 月 1 日至 91 年 7 月 30 日
主持人：張永勳 中國醫藥學院中國藥學研究所
共同主持人：
計畫參與人員：詹旭川、Susan Matthew、何玉鈴、高國清
一、中文摘要 第一年從旋花科植物亨利氏伊立基藤 (Erycibe hnryi Prain) 分 離 出β-sitosterol (1)、sitosterol-3-β-D-glucose (2)、scopoletin (3)、methyl 3,4-dihydroxy- cinnamate (4)及p-hydroxyphenethyl trans- ferulate (5)。其中
化合物 4 及 5 為本植物首次發現之化合 物。抗癌活性方面，化合物 4 在 50mM 的 濃度下對鼻咽癌細胞(HONE-1)有些微之 抑制活性。
第二年以從紫金牛科台灣山桂花(M.
perlaria (Lour.) var. formosana (Mez))
CHCl3 及 EA fractions 分離出 CYS-MPC-701 (Afzelin)、CYS-MPC-702 (接糖基之長 鏈 脂 肪 酸 ) 、 CYS-MPC-703 (lupeol) 、 CYS-MPE-1 (Stigmasterol) 、 CYS-MPE-2 (Sitosterol-3-β- D-glucose) 、 CYS-MPE-3 （(-)-epicatechin）、CYS-MPE-4 (Quercitrin) 及 CYS-MPE-6（結構未定）。另外從嶺南 野菊之乙酸乙酯層，分出四個化合物： Apigenin 、 Luteolin 、 Apigenin-7-O-β
-glucopyranoid 及 Luteolin -7-O-β
-glucopyranoid，其中 Apigenin 與 Luteolin 在 50 mg/ml 的濃度下對 NUGC 及 HONE-1 皆有抑制其生長之作用。
年 從 為 三 葉 山 香 圓 (Turpinia ternata
Nakai)莖、葉部分離得 13 個化合物：3 β,
19α dihydroxy urs 12-ene 28-oic acid (1)、 2α, 3 β dihydroxy urs 12-ene 28-oic acid (2) 、 ursolic acid (3) 、 sitosterol (4) 、
Daucosterol (5) 、 3, 5 dihydroxy, 7,3’,4’ trimethoxy flavone (6)、5, 7, 4’-trihydroxy 3’-methoxy flavonol-3-O rhamnosyl glucoside (8)；而化合物 7-13 仍在結構解 析中。在化合物 1、3、5、7、8、9、10 之篩選結果中，化合物 1、3、7 在 20 m g/ml 的濃度下對鼻咽癌細胞(HONE-1)分別有 -1%、42%、0%之抑制活性；化合物 1、3 在 20 m g/ml 的 濃 度 下 亦 對 胃癌細胞 (NUGC)分別有-1%、-1%之抑制活性。 關鍵詞：亨利氏伊立基藤、台灣山桂花、 三葉山香圓 Abstract
In first year, five components, β-sitosterol (1), sitosterol-3-β-D-glucose (2), scopoletin (3), methyl 3,4-dihydroxy-cinnamate (4) and p-hydroxyphenethyl trans-ferulate (5) were isolated from Erycibe. hnry., The compound 4 and 5 were first
isolated from this plant. Compound 4 showed 42% inhibition on the growth of HONE-1 cancer cell line at 50 µM.
In second year, CYS-MPC-701 (Afzelin), CYS-MPC-702 (fatty acid with sugar), CYS-MPC-703 (lupeol), CYS-MPE-1 (Stigmasterol), CYS-MPE-2 (Sitosterol-3-β- D-glucose), CYS-MPE-3 （(-)-epicatechin）, CYS-MPE-4 (Quercitrin) and CYS-MPE-6（unknown structure）have been isolated from chloroform and ethyl acetate layer of M. perlaria (Lour.) var. formosana (Mez). We also isolated three
flavonoides, Apigenin, Luteolin, Apigenin-7-O-β-glucopyranoid and Luteolin-7-O-β-glucopyranoid from M. perlaria (Lour.) var. formosana (Mez).
Among them, Apigenin and Luteolin
showed 50% inhibition on the growth of
NUGC and HONE-1 cancer cell line at 50 µM.
Keywords: Erycibe hnryi Prain, M. perlaria
(Lour.) var. formosana (Mez), Turpinia ternata Nakai
二、緣由與目的 世界衛生組織預測二十一世紀癌症 將是人類第一殺手，也是每一個國家最 嚴重的挑戰。在國內，癌症是十大死因 之首，肝癌、肺癌、直腸癌、三種癌症 更是佔一半左右。依據衛生署的調查統 計 87 年度台灣地區癌症十大死因中肝 癌佔第一位，其中死於肝癌者佔癌症死 亡率 20%[1]。癌症種類多，而國內研究人 力有限，要在短時間內獲得成果，必須 選擇幾項與本土性息息相關的疾病，且 為國外藥廠不列為首要開發目標之治療 藥作為開發的物。本計畫為「台灣產植 物之抗癌與抗病毒活性成分研究」之子 計畫之一，擬將經由國家衛生院進行篩 選之有效台灣產植物，在經檢討評估選 定後進行分離工作。本計畫選擇在抗癌 及抗病毒活性篩選中具有活性之本產藥 用 植 物 曲 莖 蘭 嵌 馬 藍 (Strobilanthes
filexicaulis (Hayata) Hsieh et Huang)、台
灣山桂花(Mesa perlaria (Lour.) Merr. var.
formosana (Mez))及三葉山香圓(Turpinia ternata Nakai)進行活性成分之分離與構 造鑑定，冀望分離出具有活性之化合 物，以提供合成化學家與藥物化學家作 為新藥開發之先導藥物，並發展成具有 臨床應用價值的抗癌與抗病毒新藥。 除進行活性成分分離外，並於研究期 間選送 100 種樣品送至國家衛生研究院進 行活性篩選，第一年擬送篩選神農本草經 下品藥物。神農本草經是一部總結了漢代 以前應用藥物知識的重要著作，書中收載 藥物 365 種，其中植物藥 237 種，動物藥 65種，礦物藥 43 種，其它 20 種，按性能 和功效分為上、中、下三品；上品 120 種， 能補養而無毒，可以長服、久服；中品 120 種，能治病補虛，無毒或有小毒；下品 125 種，專攻大病，多為有毒，不可多服和久 服[2]。第一年則以毒性較大之下品作為活 性篩選之材料，第二、三年則以其他毒性 較大中草藥作為篩選藥物，希望對開發本 產藥用植物及中草藥有所助益，也對於新 藥之研究更具有發展之空間。 三、結果與討論 本計劃第一年進行曲莖蘭嵌馬藍(S. filexicaulis)活性成分研究，但經採集及活 性試驗後，因活性不如預期，經與本計劃 之總主持人吳天賞教授討論後，從「製藥 與生物技術國家型計劃」天然與化學合成 藥物組研究分組第二次會議中之篩選名單 中決定將研究主題更換為亨利氏伊立基藤 （ Erycibe hnryi Prain ） ， 並 分 離 出
β-sitosterol (1)[3]、sitosterol-3-β-D-glucose (2)[4] 、 scopoletin (3)[5] 、 methyl 3,4-dihydroxycinnamate (4)[6] 及 p-hydroxyphenethyl trans-ferulate (5)[7]等化 合 物 ， 其 中 除 了 methyl 3,4-dihydroxycinnamate (4)在 50mM 的濃
度下對 HONE-1 有些微之抑制活性外，其 餘化合物並無抑制癌細胞生長的作用。 第二年材料為台灣山桂花，在大量分 離活性成分時，只有 butanol fraction 有明 顯之抗癌活性，其餘 fraction 並無活性。 從 CHCl3 及 Ethylacetate fractions 分離的化 合 物 ： Afzelin[8] 、 Stigmasterol 、
Sitosterol-3-β-D-glucose[4]、 (-)-epicatechin
[9]、Quercitrin[10]，亦無抗癌活性。而嶺南
野 菊 分 離 出 之 化 合 物 Apigenin[11] 、
Luteolin[12]、Apigenin-7-O-β- glucopyranoid
[12]及 Luteolin -7-O-β - glucopyranoid[13]，其 中 Apigenin 與 Luteolin 在 50 mg/ml 的濃度 下對 NUGC 及 HONE-1 皆有抑制其生長之 作用。 第三年研究從三葉山香圓莖葉部分離 得 13 個 化 合 物 ， 已 鑑 定 出 3 β, 19α
dihydroxy urs 12-ene 28-oic acid (1) [14]、2α, 3 β dihydroxy urs 12-ene 28-oic acid (2)
[15]、ursolic acid (3) [16]、sitosterol (4) [17]、
Daucosterol (5) [12]、3, 5 dihydroxy, 7,3’,4’ trimethoxyflavone (6) [18]、5, 7, 4’-trihydroxy 3’-methoxy flavonol-3-O rhamnosyl glucoside (8) [19]等化合物，其中化合物 3 β, 19α dihydroxy urs 12-ene 28-oic acid (1)、 ursolic acid (3)、(7) 在 20 m g/ml 的濃度 下 對鼻咽癌細胞(HONE-1)分別有-1%、 42%、0%之抑制活性；化合物 1、3 在 20 m g/ml 的濃度下亦對胃癌細胞(NUGC)分別 有-1%、-1%之抑制活性。 另外，針對神農本草經下品藥進行活 性評估，神農本草經上所記載之藥品年代 久遠，考證不易，其中多數為動物類或礦 物類藥品，因此首先選定台灣市面上易購 得且基原確定之五十一種藥材（表一）進 行抗癌活性篩選。 神農本草經下品藥中蛤蟆皮、楝實、 露蜂房、雄黃則有明顯抑制胃癌細胞生長 活性（表二）。 四、計畫成果自評 共完成五十一種農本草經下品藥之活 性篩選，其中以蛤蟆皮、楝實、露蜂房與 雄黃對胃癌細胞（NUGC）有明顯之抑制 活性。 亨利氏伊立基藤之甲醇抽出物中化合 物 methyl 3,4-dihydroxycinnamate (4) 在 50µM 的濃度下對鼻咽癌細胞(HONE-1)有 42%之抑制活性。 嶺 南 野 菊 分 離 出 之 Apigenin 與 Luteolin 在 50 mg/ml 的濃度下對 NUGC 及 HONE-1 皆有抑制其生長之作用。
三葉山香圓(Turpinia ternata Nakai) 莖、葉部分離分離出之 3 β, 19α dihydroxy urs 12-ene 28-oic acid (1)、ursolic acid (3) 在 20 m g/ml 的 濃 度 下 對 鼻 咽癌細胞 (HONE-1)、胃癌細胞(NUGC) 皆有抑制其 生長之作用。 五、參考文獻 [1] 行政院衛生署：中華民國台灣地區公 共衛生概況，1999。 [2] 邱年永、張光雄：原色台灣藥用植物 圖鑑(5)，南天書局出版，台北 1998； 208。
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亨利氏伊立基藤(Erycibe hnryi Prain)分離出之化合物 HO 1 O O HO H3CO 3 GlcO 2 O OCH3 OH HO 4 OH O HO O OCH3 5
台灣山桂花(M. perlaria (Lour.) var. formosana (Mez))及嶺南野菊分離之化合物
HO
CYS-MPE-1 (Stigmasterol)
O
CYS-MPE-2 (Sitosterol-3-β-D-glucoside) Glc O OH OH HO OH OH CYS-MPE-3 ((-)-epicatechin) O O O OH OH HO OH Rha CYS-MPE-4 (Quercitrin) O O O OH HO OH Rha CYS-MPC-701(Afzelin) HO CYS-MPC-703(Lupeol) O OH OH HO O CYS-VP-1 (Apigenin) O OH OH HO O OH CYS-VP-2 (Luteolin)
三葉山香圓(Turpinia ternata Nakai)分離之化合物 O H3CO OH O OH OCH3 OCH3 6 O HO OH O O OH OCH3 rhamnosyl glucose 8 HO COOH 3 HO COOH OH 1 HO COOH HO 2 GluO 5
表一、神農本草經下品藥抗癌活性篩選之藥材 編號 藥 品 重量 mg 編號 藥 品 重量 mg 300 鱉 甲 20.70 334 葫 蘆 巴 19.80 301 蜈 蚣 22.00 335 白 頭 翁 21.00 302 朱 砂 15.20 336 女 青 24.60 303 淫 洋 霍 21.30 337 連 翹 22.02 311 刺 蝟 皮 20.40 338 澤 蘭 20.30 312 蛤 蟆 皮 19.50 339 佛 桃 仁 20.11 313 五 加 皮 20.30 340 巴 戟 天 20.00 314 八 角 蓮 20.90 341 杏 仁 23.20 315 地 榆 21.10 342 郁 李 仁 20.80 316 楝 實 19.80 343 蛤 蟆 骨 20.30 317 白 歛 20.93 344 芫 花 25.97 318 款 冬 花 20.00 345 甘 遂 22.20 319 紫 參 21.00 346 大 戟 22.50 320 旋 覆 花 19.90 347 敗 醬 28.94 321 巴 豆 20.00 348 青 箱 子 22.90 322 皂 夾 20.50 349 穿 山 甲 21.20 323 夏 枯 草 21.10 350 半 夏 26.60 324 貫 眾 21.50 351 天 雄 27.00 325 扁 蓄 20.30 352 烏 頭 21.80 326 射 干 21.30 353 防 己 23.10 327 露 蜂 房 21.40 363 水 蛭 20.50 328 芫 花 21.30 367 赤 小 豆 25.06 329 商 陸 21.30 370 雄 黃 20.15 330 蛇 退 21.30 376 鉛 丹 21.74 331 白 及 22.60 380 戎 鹽 20.30 332 牡 丹 皮 21.90 391 龜 甲 21.00 333 蜀 椒 19.10
表二、神農本草經下品藥活性篩選結果
藥 品 濃 度 Total n-Hexane EtOAc MeOH
蛤蟆皮 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 2% 2% 2% 40% 23% 16% 4% 3% 3% 6% 4% 3% 五加皮 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 90% 78% 63% 104% 113% 108% 88% 61% 32% 67% 42% 28% 八角蓮 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 91% 57% 0% 104% 117% 109% 105% 97% 56% 98% 14% 0% 楝實 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 4% 4% 3% 103% 116% 107% 11% 5% 3% 11% 6% 3% 款冬花 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 103% 106% 81% 110% 0% 0% 109% 107% 103% 108% 106% 80% 旋覆花 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 106% 89% 38% 113% 115% 31% 112% 97% 37% 111% 98% 63% 露蜂房 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 100% 92% 11% 101% 106% 20% 40% 7% 13% 103% 100% 91% 蛇退 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 102% 109% 96% 99% 77% 23% 103% 104% 70% 101% 110% 119% 葫蘆巴 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 100% 92% 2% 101% 104% 102% 103% 106% 109% 105% 12% 1% 雄黃 12.5µg/ml 25µg/ml 50 µg/ml 4% 1% 0% 103% 87% 63% 98% 38% 11% 27% 5% 1% l 10 out of 91 extracts picked for 2° assay, NUGC most active：
蛤蟆皮、楝實、露風房、雄黃。 l All extract from 馬藍：negative.
表三、馬藍屬植物抗癌活性篩選結果 編號 植物 T N E M 400 曲莖藍嵌馬藍葉部＊ 33% 1% 2% 58% 304 長穗馬藍莖部 96% 99% 102% 99% 305 長穗馬藍葉部 97% 98% 102% 98% 306 曲 莖 藍 嵌 馬 藍 根 部 96% 96% 100% 97% 307 曲 莖 藍 嵌 馬 藍 莖 部 98% 95% 99% 99% 308 曲 莖 藍 嵌 馬 藍 葉 部 96% 96% 101% 99% 309 台 灣 馬 藍 葉 部 97% 97% 100% 98% 310 台 灣 馬 藍 根 部 96% 94% 96% 96% 354 台 灣 馬 藍 莖 部 95% 88% 89% 96% ＊ ：吳天賞教授第一次送樣之 sample
T: total extract; N: n-hexane; E: ethyl acetate, M: Meyhanol Cell line: NUGC
Sample conc.: 50 µg/mL
表四、曲莖藍嵌馬藍葉部分劃之抗癌活性篩選結果 Fr.M1 Fr.H2 Fr.B3 Fr.W4
曲莖藍嵌馬藍葉部 96% 97% 100% 95%
1：methanol fraction, 2：n-hexane fraction, 3：n-butanol fraction, 4：water fraction Cell line: NUGC
Sample conc.: 50 µg/mL
表五、台灣山桂花、山香圓、亨利氏伊立基藤及三葉山香圓之抗癌活性篩選結果
Plant Cell line T N E M
HONE-1 6% 41% 85% 18% 台灣山桂花(stem &leaf) NUGC 6% 18% 68% 19% HONE-1 91% 97% 96% 91% 山香圓(stem &leaf) NUGC 87% 83% 86% 88% HONE-1 87% 100% 98% 99% 亨利氏伊立基藤(stem) NUGC 97% 104% 103% 102% HONE-1 90% 99% 52% 96% 三葉山香圓(stem &leaf) NUGC 98% 103% 56% 101%
T: total extract; N: n-hexane; E: ethyl acetate, M: Methanol Sample conc.: 50 µg/mL
表八、亨利氏伊立基藤分離出之化合物 3、4 及 5 抗癌活性測試結果
NUGC HONE-1
Compound 10µM 50µM 10µM 50µM
4 109% 99% 98% 42% 5
5
