河魨毒 (tetrodotoxin, TTX) 為海洋生物毒之ㄧ,係一種低分子量 (320 Da) 的非蛋白質之神 經性劇毒,具有10 餘種衍生物。目前關於含有河魨毒的生物體中河魨毒的來源,大致上有兩 種說法,一種是由生物本身體內生合成的內因說,另一種是經由攝食寄生或共生細菌而蓄積在 體內的外因說。自1986 年由學者 Noguchi 等人從 Xanthid crab 的腸道分離出具有河魨毒生 產菌後,陸續有多位學者由當地河魨腸道中分離出可生產河魨毒之弧菌Vibrio
alginolyticus;由數種海洋標準菌株中,亦檢測出多種微生物 V. parahaemolyticus, V.
anguillarum, V. cholerae 及 V. costicols 均具有河魨毒生產能力。綜合上述結果,河魨 TTX 及其衍生物之來源,推論係生息在其腸內之微生物生產所致。
為了解在台灣海域之河魨所含有細菌種類,分別於宜蘭大溪漁港和台中港採集黑鯖、滑背、毒 鯖河魨之腸壁,使用ORI 培養基檢測好氣性生菌數,在 ORI 培養基的生菌數分別為 1.07 × 105 CFU/g、8.01 × 104 CFU/g、9.54 × 107 CFU/g。總共分別分離出 286、316、202 株,初步依菌落外觀型態分類,使用ORI broth 大量培養,經震盪培養 3 天後,以離心收集菌 體。將菌體以超音波破碎機破碎經純化後,以HPLC 鑑定河魨毒,初步篩得 6 株 TTX 生產菌,
進而探討培養條件對河魨毒生產菌產產毒能力之影響,以ORI broth 為基礎培養基,分別改變 pH 值、NaCl 濃度和溫度,以試驗菌株在 3 項條件下之河魨毒生產能力,結果顯示,菌株 LiWC263、LLWF001、LLWF013、LLWF049、LLYF008 之河魨毒生產性分別在 pH 8, 3%
NaCl, 25℃有較佳之河魨毒生產量。菌株 LiWF271 則是在 pH7, 3% NaCl, 25℃有較佳之河 魨毒生產量。
此外,利用16S rDNA 基因定序法,進行河魨毒生產菌基因探討與分析,鑑別不同菌株在系統 分類所在的位置,分析菌株與菌株之間基因的差異性。結果顯示分離出6 株河魨毒生產菌經 16S rDNA 定序,利用 GCG 資料庫系統分析共找到相似性之微生物 2 屬 6 株 (Shewanell chilikensis, Shewanella waksmanii, Vibrio ichthyoenteri, Vibrio alginolyticus, Vibrio crassostreae, Vibrio splendidus, Vibrio gigantis 和 Vibrio chagasii.) 。以 UPGMA 所建 構的遺傳相關樹狀圖,顯示菌株與菌株間的差異很明顯,有效的區分菌種中菌株之差異性。