第一章 前 言

第一章 前 言

天麻別名明天麻，係蘭科（Orchidaceae）植物天麻 Gastrodia elata B

LUME

有平肝息風、通絡止痛的功能。用於肝陽上亢、頭目眩暈、肝風內動、

驚癇抽搐、頭痛、痹痛、肢體麻木、手足不遂等^(2~4)。對小白鼠有鎮靜、

抗驚厥、鎮痛等作用，臨床用於祛風止痛及神經衰弱失眠等症⁽⁵⁾。 天麻為我國常用傳統中藥之一，應用歷史悠久且用量多，是大宗中 藥材之一，主要化學成分為酚類化合物⁽⁶⁾。早期，在品質鑑別方面僅有 以水煎濾液加碘試液，出現赤紫色之呈色反應⁽³⁾及薄層層析法分析⁽⁷⁾等二 則報導。

傳統中藥多以水煎煮而後口服給藥，其中多為高極性之成分。林氏 等人曾針對其高極性部分加以分離而得 parishin、 parishin B 及 parishin C 等三成分⁽⁸⁾，並以此些成分為指標，調查市售天麻藥材⁽⁹⁾及其複方 ⁽¹⁰⁾中 之含量。此外，亦以毛細管電泳法，定量天麻藥材中此三種成分之含量

(11)。有關市售天麻濃縮製劑中此三種成分之含量分析尚未見報導。

本實驗試圖自天麻藥材中分離出 parishin、 parishin B 及 parishin C 等三成分作為標準品，並利用高效液相層析定量天麻傳統水煎劑與市售 濃縮製劑中此三種成分之含量，並比較二者之差異，提供臨床用藥之參 考。

第二章 總 論

第一節 天麻之藥理活性

一、對中樞神經系統的作用

（一）鎮靜作用

天麻水煎劑可減少中樞 norepinephrine 及 dopamine 之濃度，

顯示天麻之鎮靜作用可能經由降低 norepinephrine 及 dopamine 系 統之活性所致^{(12, 13)}。口服給予天麻水煎劑（1 g/kg）能減少鼷鼠之 自發活動及延長戊巴比妥鈉所引起的睡眠時間，亦可對抗咖啡因 的興奮作用⁽¹⁴⁾。天麻注射液（5 g/kg）亦可延長戊巴比妥鈉、水 合氯醛及硫噴妥鈉等所引起的睡眠時間⁽¹⁵⁾。

（二）鎮痛作用

利用電擊尾法在鼷鼠之研究顯示，天麻水煎劑（5 g/kg）對 鼷鼠有明顯之鎮痛作用，並以 90 分鐘之鎮痛效果最佳⁽¹⁴⁾。此外，

鼷鼠經皮下注射給予天麻製劑（5 g/kg）能明顯抑制醋酸引起之扭 體反應，對熱板法亦有提高其痛閾值之作用⁽¹⁵⁾。

（三）抗驚厥作用

天麻水煎劑可對抗 pentylenetetrazol 所誘發之驚厥、使驚厥潛 伏期延長，死亡率降低或提高其半數驚厥量，且多次給藥較單次 給藥為佳；另天麻水煎劑對 strychnine 所誘發之驚厥則無抑制作 用，顯示天麻之抗驚厥作用應與脊髓無關^{(14, 15)}。經靜脈注射投予 家兔天麻注射液（1 g/kg），可提高電擊 攣的閾值，抑制腦部癲 癇樣放電的發展，有效制止癲癇發作⁽¹⁵⁾。

當豚鼠癲癇發作時腦幹之 norepinephrine 及尾核之 dopamine 含量有下降之趨勢，而投予天麻注射液後可使此二處之該成分含 量均升高，顯示天麻可能與 catecholamine 代謝有關⁽¹⁶⁾。另天麻水 抽取液可抑制 kainic acid 與腦內 glutamate 接受器之鍵結，顯示天 麻抗驚厥之作用可能與降低腦內 glutamate 接受器之活性有關⁽¹⁷⁾。

（四）益智抗衰老作用

在服用天麻水抽取液二~三個月後，可改善 D-galactose 所導 致鼷鼠之被動迴避障礙及老齡鼷鼠之學習記憶能力減退；並可提 升 superoxide dismutase 之活性、減少過氧化脂質之含量^{(18, 19)}。

二、對心血管系統的作用

天麻抽取液可使麻醉大鼠心率減慢，其中以靜脈注射最為明 顯；一般對心臟 QRS 波影響不大，但可延長 P-R 及 Q-T 間期，使 T 波變高且鈍圓。並對腦垂體後葉素引起的大鼠急性心肌缺血有明顯 保護作用，可改善已變平的 T 波、下降的 S-T 段及心律不整⁽¹⁵⁾。

在 Langendorff 法之離體豚鼠心臟灌流實驗中，天麻抽取液可使 冠狀動脈血流量有先減後增的現象，且可降低冠狀動脈及腦血管阻 力，增加心、腦血流量，對心肌及腦部缺血有一定的保護作用。另 在離體兔血之灌流實驗中，亦發現注入天麻抽取液約 15 分鐘後，血 流量明顯增加；且可抑制 epinephrine 引起的血管收縮作用，而此抑 制作用可部份被 atropine 所拮抗⁽¹⁵⁾。

靜脈注射給予天麻注射液後，對大鼠和家兔有明顯之降壓作 用，最大降幅為 73 %，可持續 1 至 1.5 小時以上；若經腹腔注射，

對大鼠之降壓作用可延續更長，約在 3 小時以上⁽¹⁵⁾。

三、耐缺氧作用

天麻注射液可增強鼷鼠在常壓及低壓（負壓 300 mm Hg）下對 缺氧狀態的耐受能力，明顯延長鼷鼠存活時間 ⁽¹⁵⁾。

四、增強免疫功能

天麻注射液可增強鼷鼠巨噬細胞吞噬能力及血清溶菌酵素之活 性，在多次給藥後，更可增加脾臟之重量，顯示天麻具有增強體內 免疫系統之功能^{(20, 21)}。

五、抗炎作用

天麻注射液可抑制 5-HT、PGE2 所引起之皮膚微血管通透性增 加及抑制醋酸所引起之腹腔微血管通透性增加;另對 carrageenan、

5-HT 及 kaolin 所引起之足趾浮腫亦有顯著之抑制作用，但對 cotton oil 所誘發之肉芽囊腫則無效。顯示天麻之抗炎作用可能與炎症初期 之神經傳遞物質有關，而與後期之結締組織增生無關⁽²¹⁾。

六、抗氧化作用

天麻水抽取液可抑制大白鼠大腦皮質部之脂質過氧化現象及增 加粒線體內 superoxide dismutase 之活性，並具清除自由基之作用⁽²²⁾。

第二節 天麻之化學成分(6, 8, 23, 24)

一、Benzenoids

（一）gastrodioside【bis(4-hydroxybenzyl)ether mono-β-D-glucopyranose】

（二）gastrodin【4-(

β

（三）gastrodigenin【4-hydroxybenzyl alcohol】

（四）4-hydroxylbenzaldehyde

（五）3,4-dihydroxybenzaldehyde

H

O O

OH OH O

CH

OH

O

OH

O CH

OH

O

OH OH O

CH

OH

H

HO CH

OH

HO C

O H

C O

H HO

HO

CH

OCH

HO

O

（六）4-hydroxylbenzyl methyl ether

（七）4-hydroxybenzyl ethyl ether

（八）4-(4’-hydroxybenzyloxy) benzyl methyl ether

（九）4-ethyloxytolyl-4’-hydroxybenzyl ether

（十）4, 4’-dihydroxydiphenyl methane

（十一）bis(4-hydroxybenzyl)ether【4, 4'-dihydroxydibenzyl ether】

（十二）2,4-bis(4-hydroxybenzyl)phenol

HO CH

OCH

HO CH

OC

H

HO

O

CH

OC

H

HO OH

HO

O

OH

OH

HO HO

（十三）parishin【tris[4-( β-D-glucopyranosyloxy) benzyl ] citrate】

R₁ = R₂ = R₃ = R

H

CH

O

O CH

HO

O OH

OH R:

CH

COOR

C COOR

HO

CH

COOR

（十四）parishin B【1, 2-bis[4-(

β

R₁ = R₂ = R, R₃ = H

（十五）parishin C【1, 3-bis[4-(

β

R1 = R3 = R, R2 = H 二、Steroids

（一）

β

（二）daucosterol

三、Carbohydrates

（一）glucose

（二）sucrose

四、Organic acid

（一）citric acid

（二）succinic acid

（三）palmitic acid

五、微量元素 Zn、Se、Fe

第三章 實 驗 之 部

第一節 實驗材料

一、實驗試藥

（一）Sulfamethoxypyridazine 購自 Sigma Chemical Company（St. Louis, MO, U.S.A.）

（二）Acetonitrile 及 methyl alcohol 購自 BDH（Poole, UK）

（三）Phosphoric acid 購自 Riedel-de Haën AG（Seelze, Germany）

（四）Methyl alcohol 及 ethyl acetate 購自 Lab-scan (Ireland, Analytical sciences)

（五）藥用酒精（台灣省菸酒公賣局）

（六）Chloroform（J. T. Baker Inc., México; Actual analysis）

（七）Charcoal（Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka, Japan）

（八）MCI gel CHP 20P （Mitsubishi kasei corporation, Tokyo, Japan）

（九）Mili-Q 購自 Millipore（MA, USA）

（十）Parishin、parishin B 及 parishin C 之標準品係自天麻藥材中分離而 得。

二、實驗藥材

（一）天麻藥材市場品收集

於台灣本島之北、中、南收集藥材檢品各二種，共計六種，

以供成分定量分析用。

（二）天麻濃縮製劑之市場品收集

依各濃縮中藥製造廠之產品目錄，採購檢品六種，以供成分 定量分析用。

三、器材及儀器設備

（一）減壓濃縮機 BÜCHI 011（Switzerland）

（二）減壓蒸餾控制器 BÜCHI B161（Switzerland）

（三）水壓抽器機 Aspirator（Tokyo Rikakikai Co., LTD）

（四）冷凍循環槽 PolyScience（U.S.A.）

（五）自動收集器 Advantec 5F-160（Advantec toyo kaisha, LTD）

（六）超音波震盪器 Bransonic 8210 R-MT（Branson ultrasonics Co., Taiwan）

（七）電子天平 Precisa 180A (Switzerland)

（八）高效液相層析儀

幫浦 HITACHI L-6200 pump（Japan）

紫外光檢出器 HITACHI L-3000 Photo Diode Array Detector

（Japan）

自動進樣器 SHIMADZU SIL 9A autosampler（Japan）

第二節 實驗方法

一、Parishin、parishin B 及 parishin C 成分之分離⁽⁸⁾

將 1 公斤天麻藥材剪碎後，加入 70 %甲醇 2.5 L，置於 80℃下迴流 1 小時後趁熱過濾。殘渣再以相同之方式萃取，共五次。合併所有之濾 液，以減壓濃縮之方式將甲醇移除，殘餘之水層再以管柱層析法進行分 離。固定相為 charcoal gel，移動相為水－乙醇－氯仿，採梯度沖提之方 式進行分離。將所得之乙醇－氯仿層濃縮乾，加水使之溶解後加入氯仿 與之萃取，共 3 次。再利用乙酸乙酯繼續與水層萃取，共 3 次。將水層 減壓濃縮至乾，以 MCI gel CHP 20 進行分離，移動相為水－甲醇，採梯 度沖提之方式，即可分離得到此三個化合物，其分離流程圖如 Fig. 1 所 示。

二、分析檢品之製備

（一）Sulfamethoxypyridazine 內部標準品溶液之製備

精確秤取 sulfamethoxypyridazine 156.6 mg，先以少量 70 %甲 醇溶解後，再以 70 %甲醇定容至 250 mL，配製成濃度為 626.4 µg/mL 之貯存溶液。

（二）天麻藥材水煎劑檢品之製備

秤取天麻藥材 5.0 g，加入 20 倍水（100 mL）於室溫下浸泡 1 小時使之浸潤後，置於電熱板上加熱，慢慢使之沸騰至體積略 少於 50 mL，以紗布趁熱過濾至 100 mL 之容量瓶中。其藥材殘渣 再加入水 100 mL，再次煮沸至略少於半量後，亦趁熱過濾至上述 容量瓶中，待冷卻後加入 10 mL sulfamethoxypyridazine 溶液（使 其最終之濃度為 62.6 µg/mL），再以 70 %甲醇定容至 100 mL，將 此溶液以微孔濾膜（0.45 µm）過濾，供 HPLC 分析。

（三）濃縮製劑檢品之製備

秤取濃縮中藥粉末約 2.0 g，加入 70 %之甲醇溶液 25 mL，以 超音波震盪器震盪 1 小時後，以濾紙過濾至 50 mL 之容量瓶中。

其殘渣再加入 20 mL 之 70 %甲醇，再震盪 1 小時，亦過濾至上述 容量瓶中，待冷卻後加入適量之 sulfamethoxypyridazine 溶液（使 其最終之濃度為 62.6 µg/mL），再以 70 %甲醇定容至 50 mL，將此 溶液以微孔濾膜（0.45 µm）過濾，供 HPLC 分析。

三、高效液相層析之分析條件

分析管柱：Cosmosil 5C18 - AR，5 µm，4.6 × 150 m.m.

流 速：1 mL/min 檢測波長：222 nm

內部標準品：Sulfamethoxypyridazine 移 動 相：A：0.1% H₃PO₄；B：MeOH

Time A B

0 85 15

15 75 25

30 70 30

40 70 30

四、檢量線之繪製

分別秤取 parishin、parishin B 及 parishin C 各 21.4、10.2 及 11.0 mg，以適量之 70 %甲醇使之完全溶解後，再加 70 %甲醇定容至 5mL，用來當作貯存溶液。

取適量貯存溶液用 70 %甲醇稀釋，並加入適量內部標準品溶 液，使此三種標準液之濃度分別為：parishin：26.8、53.5、107.0、

214.0、428.0 及 856.0 µg/mL；parishin B：20.4、51.0、102.0、204.0 及 408.0 µg/mL；parishin C：22.0、55.0、110.0、220.0 及 440.0 µg/mL，

而內部標準品溶液之最終濃度為 62.6 µg/mL。經 HPLC 分析所得之 parishin 與內部標準品之波峰面積比值，與 parishin 濃度進行線性迴 歸，求得檢量線方程式。Parishin B 及 parishin C 亦以相同之方式求 得檢量線方程式。

五、數據處理

取上述藥材水煎劑及濃縮製劑之檢品 10 µL 注入 HPLC 分析，

以檢品中 parishin、parishin B 及 parishin C 與內部標準品之波峰面積 比值，代入檢量線之方程式，即可求出天麻水煎劑及濃縮製劑中 parishin、parishin B 及 parishin C 之含量。

第四章 結 果 與 討 論

本研究參照林氏等人⁽⁸⁾之分離方法自天麻藥材（1 kg）中分離得到 parishin（3.24 g）、parishin B（2.11 g）及 parishin C（0.34 g）等成分，

並與標準品比對證明。

本研究所採用之高效液相層析法係參照文獻⁽⁹⁾所載，用來定量天麻 傳統水煎劑與市售濃縮製劑中此三種成分之含量。此層析法係使用逆相 層析管，移動相為甲醇與 0.1 %磷酸溶液，以線性梯度沖提方式分離；檢 測波長設定為 222 nm，移動相採用之磷酸不會影響成分之分析，分析所 得的 parishin、parishin B 及 parishin C 三成分之波峰顯著，其高效液相層 析圖譜如 Fig. 2 所示，三成分之滯留時間分別為 28.4、17.9 及 21.1 分鐘。

本實驗採用的內部標準品為 sulfamethoxypyridazine，其滯留時間為 9.4 分鐘，天麻濃縮散劑及藥材水煎劑於此處並無干擾。以各標準品與內 標準品之波鋒面積比值為 Y 軸，各標準品之濃度為 X 軸進行線性迴歸，

求得各成分之檢量線方程式及相關係數。Parishin、parishin B 及 parishin C 的檢量線及濃度範圍分別為 Y＝192.781X－3.767（26.8 ~ 856.0 µg/mL；

r＝0.9996）、Y＝201.080X－2.630（20.4 ~ 408.0 µg/mL；r＝0.9999）及 Y

＝235.892X－2.712（22.0 ~ 440.0 µg/mL；r＝0.9999），均呈現良好線性 關係，因此此分析方法可適用於天麻傳統水煎劑與市售濃縮製劑之定量 分析。

將自台灣本島北、中、南各地收集之六種天麻藥材樣品以上述分析 方法定量分析，結果顯示每公克天麻之水煎劑中 parishin、parishin B 及 parishin C 之含量分別為 1.1 ~ 4.7、1.5 ~ 3.1 及 0.7 ~ 2.4 mg/g（如 Table 1 所示）。與天麻 70 %甲醇萃取液⁽⁹⁾相互比較此三成分之含量，結果顯示在 水煎劑中 parishin B 及 parishin C 之含量與 70 %甲醇萃取液是相當的,但 parishin 之含量則以 70 %甲醇萃取液較多。此結果顯示 parishin B 及 parishin C 在 70 %甲醇及水中的溶解度是差不多的，但 parishin 較易溶於

70 %甲醇，這和 parishin 在逆向層析管柱中之滯留時間較晚，因此極性 較低的現象是相同的。

六種不同中藥廠產品之濃縮製劑（包括 3 件濃縮散劑及 3 件濃縮顆 粒劑）中 parishin、parishin B 及 parishin C 之含量分析，顯示每公克濃縮 製劑之含量分別為 3.7 ~ 8.9、1.6 ~ 3.6 及 1.2 ~ 2.0 mg/g （如 Table 2 所 示）。若換算成每公克原生藥材中之含量，則分別為 1.2 ~ 3.4、0.4 ~ 1.4 及 0.4 ~ 0.8 mg/g，與天麻藥材水煎劑中之含量相比較，結果略低些，可 能是藥材來源不同所致。

依據文獻所載⁽¹⁾，天麻生藥飲片一日之用量為 3 ~ 9 公克，而濃縮製 劑依廠商標示為 0.8 ~ 3.6 公克，若計算每日平均最大劑量，天麻傳統水 煎劑含 parishin、parishin B 及 parishin C 之含量分別為 24.1、20.4 及 14.4 mg，而濃縮製劑中則含 15.6、6.5 及 4.1 mg，如 Table 3 所示。經比較天 麻水煎劑與濃縮製劑此三成分之每日最大劑量，濃縮製劑明顯低於天麻 水煎劑，假若 parishin、parishin B 及 parishin C 為天麻之活性成分，則天 麻水煎劑之藥效應高於濃縮製劑，此與臨床中醫師的一般認知相符。

綜合上述結果可發現各藥材間含量之差異頗大，若以此為原料，再 加上各家藥廠製程的不同，會導致市面上濃縮製劑品質之參差不齊。而 濃縮製劑是目前健保唯一給付之中藥，因此原料之管控、GMP 的確切執 行及療效的評估是十分重要的。現今我們政府已逐漸重視中藥品質之管 制，並已公告二十個複方方劑應進行指標成分之定量，希望藉此研究來 提醒業者注意其產品之管控，以確保消費者用藥之療效與安全。

第五章 結 論

一、本研究以 HPLC 分析方法同時定量天麻水煎劑及製劑中 parishin、

parishin B 及 parishin C 等成分之含量，提供天麻品質管制之參考。

二、天麻以傳統方式煎煮之水煎劑中所含 parishin、parishin B 及 parishin C 之含量高於濃縮製劑，且不同廠商間此些成分含量差異頗大，建 議廠商應注意產品品質之一致，以確保用藥之療效與安全。

Table 1. Contents (mg/g) of Parishin, Parishin B and Parishin C in the Water Extracts of Gastrodiae Rhizoma

Samples Parishin Parishin B Parishin C

a

±

±

±

b

±

±

±

c

±

±

±

d

±

±

±

e

±

±

±

f

±

±

±

Mean

±

±

±

Range

Data are expressed as mean

±

Table 2. Contents (mg/g) of Parishin, Parishin B and Parishin C in the Commercial Extracts of Gastrodiae Rhizoma

Samples Parishin Parishin B Parishin C

A*

±

±

±

B

±

±

±

C

±

±

±

D*

±

±

±

E*

±

±

±

F

±

±

±

Mean

±

±

±

Range

Data are expressed as mean

±

* Granules, ^# Powder

Table 3. Comparsion of the Contents (mg/g) of Parishin, Parishin B and Parishin C in the Maximum Daily Doses of Traditional Decoctions (9.0 g crude drug) and Commercial Extracts of Gastrodiae Rhizoma Samples Parishin Parishin B Parishin C

Traditional decoctions

a

±

±

±

b

±

±

±

c

±

±

±

d

±

±

±

e

±

±

±

f

±

±

±

±

±

±

Commercial Extracts

A (1.5 g)

±

±

±

B (1.5 g)

±

±

±

C (3.6 g)

±

±

±

D (3.6 g)

±

±

±

E (3.6 g)

±

±

±

F (1.6 g)

±

±

±

±

±

±

±

Fig. 1. Separation of parishin, parishin B and parishin C from Gastrodia

elata B

70% MeOH (5×5L, 80℃) removal of methanol H₂O layer

Charcoal column H₂O – EtOH – CHCl₃ EtOH – CHCl₃ eluate

paratition with CHCl₃（× 3）

CHCl₃ layer H₂O layer

paratition with EtOAc（× 3）

EtOAc layer H₂O layer

Charcoal column H2O – MeOH Parishin 3.24 g Parishin B 2.11 g Parishin C 0.34 g

Gastrodia elata (1 kg)

H₂O suspension

Concentration

Fig. 2. HPLC chromatograms of traditional decoctions (A) and commercial extracts (B) of Gastrodiae rhizoma. 1: sulfamethoxypyridazine (IS); 2:

parishin B; 3: parishin C; 4: parishin.

1 2

3

4 (A)

1

2 3

4

(B)

參 考 文 獻

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