本試驗分別在嘉義、斗六、花蓮三地進行大規模之臨床試驗。注射時採用商 品化之改良式高壓灌注器,取代早期重力點滴法,可於灌注器內加入高壓 (壓縮 空氣),使器內抗生素溶液快速注入樹體內 (圖 4),可大量使用於處理田間黃龍病 之病株。藥劑配方以四環黴素為基礎,配製各種四環黴素與其他藥劑混合之複方 進行試驗比較,共計有 (1) 四環黴素 (tetracycline-HCl),(2) 四環黴素+青黴素 (penicillin-G sodium),(3) 四環黴素+harpin,(4) 坊間四環黴素 (當地農民提供),
(5) 四環黴素+青黴素 + harpin,(6) harpin (harpin 係誘導抗病劑),各試驗地區以 不同組合及劑量進行試驗,注射後效果則以黃龍病菌 PCR 檢測追蹤與病株病級 數進展評估。病級數以病樹黃化葉所佔比例共分 5 級 ( 0:無病徵。I: 0-25% 葉黃 化。Ⅱ: 21-50% 葉黃化。Ⅲ: 51-75% 葉黃化。Ⅳ: > 76% 葉黃化及梢枯)。
田間實際灌注試驗於各地之柚類園進行,以具不同黃龍病病級數 (Diseae index, DI) 之柚病株進行藥劑灌注試驗,以上述之配方處理,灌注後發現,經 3 次 灌注者追蹤 1 年半,含有四環黴素之各配方均能有效的降低黃龍株之病級數。以 1000 ppm 之四環黴素單劑 (3 公升/每棵) 灌注 20 年生以上之病柚老柑株 3 次,可達到良好的治療效果,以 PCR 追蹤 1 年半皆無再發病,治療效果優於僅 施藥 1 次之病株,且 3 次灌注施藥對任何 DI 之病株均可達良好的治病效果,
於 4 種不同 DI 之黃龍病株,皆可恢復至幾無病徵的情形。四環黴素與其它藥
I 級,但病株再發病的比率有時高於四環黴素單劑處理者。單獨灌注 harpin 者,
可忍受,也造成檸檬植株淘汰率低,病株四處分佈,除造成生產成本增加,也加 速 HLB 擴大蔓延於整個產區,更造成其他對 HLB 敏感之柑橘品種不易在此區 種植。為促使台灣柑橘產業升級,2004 年行政院農委會動植物防疫檢疫局頒佈「柑 橘無指定疫病蟲害種苗驗證作業須知」,並輔導種植新健康柑橘,以期逐步淘汰田 間已感染黃龍病或柑橘病毒之病株。本試驗亦研究多種砧木對 HLB 的抗感性,
期能加強植株抗性,配合健康種苗制度,提升柑橘產業。砧木的試驗中發現,國 內常用之酸桔與四季橘為對黃龍病敏感之砧木,多用來繁殖椪柑、桶柑及甜橙類 對黃龍病敏感之商用品系,因此一旦遭受感染往往在很快的時間病菌便遍布病株 地上與地下部而快速敗亡,耐病或抗病砧木的使用可使病菌於根部濃度降低較不 易繁殖擴散,增加植物耐病性,並可在發病初期便給予適當的抗生素治療,如此 將可延長柑橘園之生產年限。檸檬類之砧木以本次溫室試驗結果可說是相當耐 病,病徵亦不強烈,其中粗皮檸檬及 Volkamer Lemon 於外國較常用,而廣東檸 檬則為國內常用砧木,此類砧木除對黃龍病具耐病性外,另外對萎縮病毒 (CTV) 亦有強抗病性,然而此三種耐病砧木對鱗砧病 (CEV) 及疫病感病為其弱點。枳 橙類係橙類與枳殼之雜交種,最有名的有 Rusk, Troyer 及 Carrizo,本次所使用 的 Troyer 為美國加州常使用之砧木,在台灣並不常用,本試驗證實此類砧木遭 黃龍病感染大多僅出現小葉情形而不黃化,亦可維持不錯之生長勢,極具利用價 值。枳柚經本試驗證實亦為對黃龍病具高耐病性砧木,此外其並具抗萎縮病毒 CTV、疫病菌、線蟲、耐寒、耐澇及耐鹽等特性,因此成為世界搶手之砧木,可 惜此類砧木對柑橘破葉病敏感,以枳殼或其雜交種 (枳橙或枳柚) 為砧木之柑苗 受破葉病毒 (CTLV) 感染時,會造成穗砧癒合部產生凹陷病徵,並使植株矮化 (Calavan et al., 1963;Garnsey, 1970;Miyakawa, 1978)。而國內也因田間植株普遍 帶有 CTLV 而使得這類良好砧木無法使用,甚為可惜,不過由於柑橘脫毒技術的 成熟,健康種苗的使用將可克服此 CTLV 危害的困難,因此此類砧木極具產業應 用價值。木蘋果為目前為止所找出唯一對黃龍病具強抗病力之砧木,由於其非屬 於柑橘屬,因此嫁接其上之柑橘接穗生長緩慢,其可能具有矮化樹種的潛力,但 是否適合產業應用仍需研究評估。
及挽救柑橘老病株,使其持續生產高品質果實。因此在注射技術上的改進為,(1)
Calavan, E. C., D. W. Christiansen, and C. N. Roistacher. 1963. Symptoms associated with tatter-leaf virus infection of Troyer citrange rootstock. Plant Dis. Rep. 47:
971-975.
Capoor, S. P., D. G. Rao, and S. M. Viswanath. 1967. Diaphorina citr Kuwayama, a vector of the greening disease of citrus in India. Indian J. Agr. Sci. 37: 572-576.
da Graca, J. V. 1991. Citrus greening disease. Annu. Rev. Phytopathol. 29: 109-136.
Garnsey, S. M. 1970. Viruses in Florida’s Meyer lemon trees and their effects on other citrus. Proc. Fla. State Hort. Soc. 83: 66-71.
Huang, C. H., and C. A. Chang. 1980. Studies on the relation of mycoplasma-like organism with the decline of Wentan pummelo in Taiwan. J. Agric. Res. China 29:
13-19.
Hung, T. H., M. L. Wu, and H. J. Su. 1999. Development of a rapid method for the diagnosis of citrus greening disease using the polymerase chain reaction. J.
Phytopathol. 147: 599-604.
Martinez, A. L., D. M. Nora, and A. L. Armedilla. 1970. Suppression of symptoms of citrus greening disease in the Philippines by treatment with tetracycline antibiotics.
Plant Dis. Rep. 54: 1007-1009.
Matsumoto, T., M. C. Wang, and H. J. Su. 1961. Studies on Likubin. 121-125 pp. In Proceedings of 2nd conference of the international organization of citrus virologists. W. C. Price ed. University of Florida, Gainesville, 265 pp.
International Organization of Citrus Virologists. E. C. Calavan, eds. University of California. Riverside. 227 pp.
Su, H. J., and R. Y. Wu. 1979. Preliminary study on the etiology of Wentan pomelo decline. Natl. Sci. Counc. Sym. 1: 45-57.
Tsai, C. H., H. J. Su, Y. C. Liao, and T. H. Hung. 2006. First report of the causal agent of Huanglongbing ("Candidatus Liberibacter asiaticus") infecting kumquat in Taiwan. Plant Dis. 90: 1360.
Tsai, M. C., H. J. Su, and S. M. Garnsey. 1993. Comparative study on stem-pitting strains of CTV in the Asia countries. 16-19 pp. In Proceedings of the 12th Conference of the International Organization of Citrus Virologists. P. Moreno, J.
V. da Graca, and L. W. Timmer, eds. University of California, Riverside. 471 pp.