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第三章 實驗結果

3.2 原位雜合表現結果

3.2.1 體軸決定基因 tgfα、EGFR 和 par-1 原位雜合結果

第一次偵測 Aptgfα 在卵細胞發育過程的表現,是在 stage 0 的卵母細胞 (oocyte) 空腔中,此時卵母細胞的細胞核和大部份的細胞質還尚未進入由濾泡細 胞 (follicle cell) 環繞而成的空腔 (Miura et al., 2003),但已有訊號出現在空腔前端 (圖十三 A)。同樣為 stage 0 但當卵母細胞核進入空腔後,前端 Aptgfα 訊號變得更 強 且 都 集 中 於 細 胞 核 前 端 ( 圖 十 三 B) 。 stage 1 時 , 卵 母 細 胞 從 生 殖 原 區 (germarium) 分離出來,並以濾泡細胞和營養索 (nutritive cord/trophic cord) 與滋養 細胞 (nurse cell) 連結,此時 Aptgfα 訊號由前端開始向後端擴散 (圖十三 C~D)。當 卵母細胞核行多次分裂進入胚胎發育早期時 (stage 3),Aptgfα 訊號表現在胚胎各 處且強度相近,沒有聚集的現象 (圖十三 E),胚胎胚帶細胞化後,Aptgfα 訊號主 要集中在胚胎中央空腔處 (圖十三 F)。stage 8 胚胎中,Aptgfα 訊號出現在內共生 菌 (圖十三 G 虛線) 的兩側 (圖十三 G),由側面圖得知訊號是集中在胚胎背側 (圖

十三 H),已知該處相當靠近 cephalic lobes 區域,但缺乏相關文獻而無從得知該 部分將發育為何種部位。stage 10 胚胎仍在移動 (anatrepsis) (胚胎前端位於蛋腔後 端),但胚胎的頭胸腹位置已能辨別 (Miura et al., 2003),Aptgfα 訊號出現在

的表現 (圖十四 L~M 箭號)。

Appar-1 最早在 stage 0 時,在卵母細胞內表現,其中前端有大量聚集的現象,

此外也可在生殖原區腔室內 (germarial lumen) 觀察到 Appar-1 表現 (圖十五 A)。

隨著卵母細胞成長,Appar-1 訊號會擴散至卵母細胞後端,但前端的表現仍是相 當明顯地高於其他位置的表現 (圖十五 B~C)。stage 3 卵母細胞進入胚胎發育時,

Appar-1 已在胚胎內各處表現,並沒有前端聚集的現象 (圖十五 D),當胚帶形成 後 (stage 5),可發現在靠近原始生殖細胞 (primordial germ cells) 位置有 Appar-1 的 表現 (圖十五 E 黑箭頭),胚胎前端偵測不到 Appar-1 的表現。stage 7 當內共生菌 進入蛋腔內部時 (圖十五 F 虛線),Appar-1 的訊號會出現在胚帶上,但主要的訊 號集中在胚帶前後兩端 (圖十五 F 箭號)。當胚胎開始移動後,Appar-1 訊號表現 在胚胎各個位置,並未在特定部位有較強的表現 (圖十五 G~H),從胚胎中期至晚 期,訊號都是在胚胎各個位置,沒有發現特殊的表現模式 (圖十五 I~K)。

3.2.2 眼部特化基因 toy、eya 和 eyg 原位雜合結果

在卵細胞發育時期,無法觀察到 Aptoy 的表現 (圖十六 A)。偵測 Aptoy 在胚 胎發育時期的表現,得知 Aptoy 最早在 stage 7 時便開始表現 (圖十六 B 箭號),此 為胚帶細胞化不久之後的時期,說明胚胎在此時期便開始分化出胚層 (Miura et al., 2003),由 Pax6 基因在其它物種的早期胚胎表現得知第一個表現位置主要是頭部 外胚層 (Chisholm and Horvitz, 1995; Glardon et al., 1997,1998; Czerny et al., 1999),

推測該訊號的位置即為豌豆蚜蟲的頭部外胚層,在 stage 7~8 時,可以清楚觀察到 訊號分成兩個區塊 (圖十六 C~F 箭號),推測此現象為 head lobes 分化成左右對稱 的半圓狀結構。stage 8 是胚胎移動開始的時期,其移動過程中可以觀察到 Aptoy 訊號始終標定著 cephalic lobes 區塊 (Miura et al., 2003) (圖十六 G~N 箭號),此結

果也類似於 Apotd 訊號的位置,可以更為肯定此標定位置為未來的頭部 (Huang et

在胚胎移動過程中,均可觀察到 Apeya 在 cephalic lobes 上的表現,但訊號強度一 直不明顯 (圖十七 D~G 箭號)。胚胎移動至定位後,可在 cephalic lobes 的頂端偵 測到較強的 Apeya 訊號 (圖十七 H~I 箭號),更成熟的胚胎上,Apeya 在 cephalic lobes 上的訊號變得更強 (圖十七 J~K 箭號) 且前緣的部分開始出現訊號 (圖十七 J~K 黑箭頭),stage 13~14 胚胎上,已能確認 Apeya 表現在胚胎複眼上 (圖十七

L~O 箭號)。胚胎移動後,Apeya 訊號表現在胚胎複眼上 (圖十七 P~Q 箭號),即 便是更晚期的胚胎上依然能偵測 Apeya 訊號在整個複眼上 (圖十七 R~S 箭號),然 而這時期可在頭部前端兩個點上發現 Apeya 訊號 (圖十七 R~S 黑箭頭)。

卵細胞發育過程中,均無法偵測到 Apeyg 的表現 (圖十八 A),進入胚胎發育 時期,從 stage 3~12 都沒有偵測到 Apeyg 的訊號 (圖十八 B~C),第一次偵測到 Apeyg 訊號是在 stage 13 的胚胎,表現位置是在頭部複眼前端 (圖十八 D~E 白箭 頭) 以及靠近大顎的位置 (圖十八 D~E 箭號)。stage 14 胚胎中, Apeyg 訊號出現 在複眼前端 (圖十八 F~G 白箭頭)、觸角基部 (圖十八 F~G 箭號) 和唾腺原基上 (圖 十八 F~G 黑箭頭)。胚胎移動回復至原本方位後, Apeyg 訊號表現在複眼前端 (圖 十八 H~I 白箭頭)、觸角 (圖十八 H~I 箭號) 和唾腺上 (圖十八 H~I 黑箭頭)。胚胎 晚期,Apeyg 表現在複眼最前端 (圖十八 J~K 白箭頭)、觸角靠近梗節 (圖十八 J~K 箭號) 和唾腺上 (圖十八 K 黑箭頭)。