圖表 - Taipei Medical University Institutional Repository:Item 987654321/4228

Fig.1~ Fig.5 預試驗 I：倉鼠餵食高脂肪飼料及 KDS718，4 週後血中TG、TC、 HDL、LDL 及 VLDL 的濃度

Fig. 1

Total cholesterol (mg/dL)

Fig. 1~Fig. 5 倉鼠餵食高脂肪飼料及 KDS718，4 週後檢測血中 triglycerides (TG)，total cholesterol(TC)， LDL-cholesterol 及 HDL-cholesterol 的含量。而 VLDL-cholesterol 依下列公式計算之：

VLDL-cholesterol ＝ total cholesterol-(LDL-cholesterol + HDL-cholesterol)。I~X 為實驗組 High fat diet + KDS718，XI 為控制組 High fat diet (Positive control)，XII 為控制組 Basal diet (Negative control)。

Fig.6~ Fig.10. 預試驗 II：倉鼠餵食高脂肪飼料及 KDS718，4 週後血中TG、TC、 HDL、LDL 及 VLDL 的濃度

Fig. 1

Total cholesterol (mg/dL)

Fig. 6~Fig. 10 倉鼠餵食高脂肪飼料及 KDS718，4 週後檢測血中 triglycerides (TG)，total cholesterol(TC)， LDL-cholesterol 及 HDL-cholesterol 的含量。而 VLDL-cholesterol 依下列公式計算之：

圖11~圖 18. 正式試驗：倉鼠餵食高脂肪飼料及 KDS718，6 及 12 週

Total cholesterol (mg/dL)

100

Fig. 11~Fig. 18 倉鼠餵食高脂肪飼料及 KDS718，6 週及 12 後檢測血中triglycerides (TG)，total cholesterol(TC)，GOT 及 GPT。

Negative control 為 Basal diet， Positive control 為 High fat diet.

Fig. 5

Total cholesterol (mg/dL)

圖19~圖 21. 正式試驗：倉鼠餵食高脂肪飼料及 KDS718，1、6 及 12 週體重的變化

Fig. 11~Fig. 18 倉鼠餵食高脂肪飼料及 KDS718，1、6 及 12 週後測量體重的變化。Negative control 為 Basal diet， Positive control 為 High fat diet.

Fig. 9

Body weight (gram)

Fig. 22~Fig. 23 正式試驗：倉鼠餵食高脂肪飼料及 KDS718， 12 週試驗之血清LDL Oxidation 結果

Fig. 22~Fig. 23 將倉鼠餵食高脂肪飼料 12 週後，血清經超高速離心機分離出LDL，利用銅離子誘導 LDL 氧化於波長 232 nm 下連續即時測量氧化產物 conjugated dienes 的變化，直到達最高值且不再有明顯變化為止。劃出時間對 OD 值的變化，計算出氧化低密度脂蛋白之Lag phase。

Fig. 12

Lag phase (min)

Maximum Abs (OD234 nm) 0.0

Fig. 24~Fig. 25 附加試驗: 倉鼠餵食高膽固醇飼料及 KDS718，4 週 後血中total cholesterol 及 triglycerides 的濃度

Fig. 24~Fig. 25 18 倉鼠餵食高膽固醇飼料及 KDS718，4 後檢測血中total cholesterol 及 triglycerides 的濃度。Negative control 為 Basal diet， Positive control 為 High cholesterol diet. ST(Statin) 降血脂藥物作為降血脂之指標。

Fig. 1

Total cholesterol (mg/dL)

Table 1~2. KDS718 對於沙門氏菌的基因致突變性影響(Ames test)之結果

Table 1. Effects of KDS718 on the mutagenicity in bacterial (Ames test).

Without

S9

Negative Positive KDS718 0.01 mg TA1535 10±2.4 492±37.5 24±2.2 22±1.1 14±1.1 6±0.6 5±0.4 TA1537 27±3.2 >1700 34±1.6 31±2.8 48±6.2 13±0.4 35±3.6 WP-2ruvA 45±4.2 332±40.3 45±4.1 49±2.4 32±7.3 15±1.5 26±2.9

aNo. of histidine revertants/plate and are presented as mean±S.D.

(n=3~5).

Positive control :

Sodium azide (SA, 2~10 μg/plate): for TA1535, TA100 9-Aminoacridine (9AA, 50~150 μg/plate): for TA1537 2-Nitrofluorene (NF, 5 μg/plate): for TA98

methyl methanesulfonate (MMS, 500 ug/plate): for WP2 uvrA

Table 2. Effects of KDS718 on the mutagenicity in bacterial (Ames test).

With S9

Negative Positive KDS718 0.01 mg TA1535 17±1.6 876±84.6 17±1.6 11±0.6 6±0.3 6±0.6 4±0.6 TA1537 11±0.3 566±68.3 41±5.3 25±2.6 31±1.6 15±1.6 4±0.3 WP-2ruvA 37±3.3 240±50.6 37±3.3 50±6.3 46±2.6 33±0.6 36±3.3

aNo. of histidine revertants/plate and are presented as mean±S.D.

(n=3~5).

Positive control :

2-Aminoanthracene (2AAT, 5~30 μg/plate): for five strains Benzo[a]pyrene (BP, 10 μg/plate): for five strains

Table 1~2. KDS718 以水及 DMSO 萃取後經無菌過濾，以 5000 ug/plate ~ 4.9 ug/plate 等劑量，在含有或不含有代謝活化系統(S9 混合物)的測試條件下，對 5 種菌株 Salmonella typhimurium TA98、

TA100、TA1535、TA1537 及 WP-2ruvA 等進行 Ames Test 檢測。結果顯示，測試樣品對 Salmonella typhimurium TA98 、 TA100 、 TA1535、TA1537 及 WP-2ruvA 等測試菌株，不論在有或無添加 S9 狀況下，測試結果與溶劑對照組相比均無顯著的差異。KDS718 內容物粉末樣品其基因突變菌落數均未超過溶劑對照組2 倍以上，亦無劑量與反應正相關性，顯示測試結果為陰性反應，並不具基因突變性。

Fig. 26 KDS718 濃度影響 L5178Y tk+/-細胞存活率的結果

Fig. 26. L5178Y 細胞給予不同濃度的KDS718經過48小時反應後，

利用trypan blue染劑去計算細胞存活率。結果顯示KDS718小於50 ug/ml下，在有S9及無S9條件下，均沒有顯著的細胞毒性。

Data were presented as mean ±SD

Cell viability (%)

0 20 40 60 80 100

120 _-S9

+S9

Ctl. 0.5 1 10 50 (μg/ml) KDS 718

Table 3. 不同濃度的 KDS718 在不含 S9 條件下對於 L5178Y tk+/-細胞基因突變的影響

Table 3. Effect of KDS718 on the mutations of the thymidine kinase (TK) locus (tk) in L5178Y tk^+/- mouse lymphoma cells

without S9 P.E.% Positive control^b 105.1±9.6 525.3±44.9 577.2±46.2

KDS 0.5 μg/ml 91.1±12.6 91.7±28.4 87.2±26.8 KDS 1 μg/ml 102.9±10.1 76.9±12.7 76.0±20.5 KDS 10 μg/ml 78.6±4.9 61.1±20.1 77.6±25.2 KDS 50 μg/ml 58.6±4.2 17.8±12.6 29.5±18.9 P.E.%=(-lnP(0)/number of cells per well)×100%; C.E.%

=(-lnP(0)/number of cells per well)×100%; P(0)=number of empty wells/total wells plated;

M.F.=C.E.% in selective medium/P.E.% in non-selective medium

aNegative control: DMSO

bPositive control: 10μg/ml methylmethansulfonate

cMean±SD, n=3~4.

Table 4. 不同濃度的 KDS718 在含有 S9 條件下對於 L5178Y tk+/-細胞基因突變的影響

Table 4. Effect of KDS718 on the mutations of the thymidine kinase (TK) locus (tk) in L5178Y tk^+/- mouse lymphoma cells.

with S9 P.E.%

control^a 104.0±17.4^c 85.4±27.3 87.1±44.9 Positive control^b 100.5±8.1 387.4±39.5 386.4±41.0

KDS 0.5 μg/ml 99.1±1.8 132.8±24.0 134.3±26.1 KDS 1 μg/ml 95.6±10.9 95.6±19.4 101.1±25.8

KDS 10 μg/ml 97.8±18.0 63.2±24.9 69.8±42.4 KDS 50 μg/ml 53.2±3.1 21.4±10.9 39.8±20.0 P.E.%=(-lnP(0)/number of cells per well)×100%; C.E.%

=(-lnP(0)/number of cells per well)×100%; P(0)=number of empty wells/total wells plated;

M.F.=C.E.% in selective medium/P.E.% in non-selective medium

aNegative control: DMSO

bPositive control: 3μg/ml cyclophosphamide

cMean±SD, n=3~4.

Table 3~4. KDS718 內容物測試樣品在不含 S9 代謝活化系統下，

濃度為0.5、1.0、10 及 50 μg/ml 時，其突變頻率(M.F. x 10^-6)分別為 87.2±26.8、76.0±20.5、77.6±25.2 及 29.5±18.9 與陰性對照組(77.7±9.6) 相較，其差距均小於 2 倍；測試樣品在含有 S9 代謝活化系統下，

濃度為0.5、1.0、10 及 50 μg/ml 時，其突變頻率分別為 134.3±26.1、

101.1±25.8、69.8±42.4 及 39.8±20.0，與陰性對照組(87.1±44.9)相較，

其差距均小於2 倍。所以測試樣品結果為陰性反應(Tables 3-4)。故 測試結果為陰性反應。

Fig. 27. 不同濃度的 KDS718 對於雄性小鼠周邊血液產生微核的結果

I: reticulocytes ; II: micronucleated reticulocytes III: micronucleated RBC; IV: RBC

CP: cyclophosphamide

Fig. 27 雄性小鼠分別管餵劑量為 0、0.5、2.5 及 5 g/kg BW 之受測物「KDS718」，48 小時後採集周邊血液，以流式細胞儀進行微核分析。(I: reticulocytes ; II: micronucleated reticulocytes ； III:

micronucleated RBC; IV: RBC； CP: cyclophosphamide)

Table 5. 不同濃度的 KDS718 對於雄性小鼠周邊血液產生微核的數量

Table 5. Effect of KDS718 on the formation of micronucleated reticulocytes in ICR mice.

I II III IV

Negative control 1.803±0.689 0.010±0.000 0.357±0.040 97.83±0.71 Positive control 0.280±0.140^c 0.023±0.005^c 0.397±0.045 99.30±0.132 KDS718 0.5 g/kg 1.507±0.273 0.010±0.000 0.480±0.144 98.00±0.133 KDS718 2.5 g/kg 1.533±0.430 0.010±0.000 0.447±0.074 98.01±0.41 KDS718 5.0 g/kg 1.590±0.656 0.010±0.000 0.447±0.070 97.95±0.61 I, reticulocytes ; II, micronucleated reticulocytes;

III, micronucleated RBC; IV, RBC

aNegative control: P.O. normal saline

bPositive control: cyclophosphamide 100 mg/kg

c Data are presented as the mean±S.D. from five mice per group.

One-way ANOVA indicated significant effect (P<0.05).

Table 6. 不同濃度的 KDS718 對於雄性小鼠周邊血液產生微核及網狀紅血球的百分比

Table 6. Effect of KDS718 on the formation of micronucleated reticulocytes in ICR mice.

Groups MN-RET/RET (%) RET/RBC (%)

Negative control^a 0.630±0.297 1.813±0.689 Positive control^b 9.524±4.124^c 0.303±0.145^c

KDS718 0.5 g/kg 0.677±0.112 1.517±0.273 KDS718 2.5 g/kg 0.683±0.165 1.543±0.430 KDS718 5.0 g/kg 0.574±0.306 1.600±0.656 MN-RET: micronucleated reticulocytes; RET: reticulocytes;

RBC: red blood cells;

aNegative control: water

bPositive control: 100 mg/kg cyclophosphamide

c Data are presented as the mean±S.D. from five mice per group.

One-way ANOVA indicated significant effect (P<0.05).

Fig. 27 & Tabs 5-6 ICR 雄性小鼠分別管餵劑量為 0、0.5、2.5 及 5 g/kg BW 之受測物「KDS718」，48 小時後採集周邊血液，以流式細胞儀進行微核分析。結果顯示，各處理組(低、中、高三劑量組)之微核–網狀紅血球數值與陰性對照組比較並無顯著差異。

在文檔中 Taipei Medical University Institutional Repository:Item 987654321/4228 (頁 105-121)