血清生化參數結果

一、預試驗I

1. 倉鼠餵食高脂肪飼料後，血清總膽固醇含量顯著增加約二倍 (Fig. 1)，然而 10 種複方無法降低其總血清膽固醇含量，此外對血清 HDL-cholesterol (Fig. 3)及 LDL-cholesterol (Fig. 4)亦無顯著抑制作 用，A4 配方有些許降低 VLDL-cholesterol 的現象，但統計學上是無 意義的。而在血清三酸甘油脂(TG)方面，倉鼠餵食高脂肪飼料後，

血清 TG 含量顯著增加約四倍 (Fig. 2)，A4 及 A8 配方可輕微降低 TG 但統計學上仍無意義，其他配方無法降低 TG 甚至更高。

2. 由數據看來，高脂飼料亦可有效提升血脂，實驗設計上應無 大問題，似乎是這10 種配方，並不適合用來降血脂。故重新設計配 方，進行中第二次的預試驗。

二、預試驗II

1. 倉鼠餵食高脂肪飼料後，血清總膽固醇含量顯著增加約 1.5 倍 (Fig. 6)，10 種複方無法降低其總血清膽固醇含量(Fig. 6)，此外 對 血 清 HDL-cholesterol (Fig. 8) 、 LDL-cholesterol (Fig.9) 及

VLDL-cholesterol (Fig. 10)均無顯著抑制作用。而在血清三酸甘油脂 (TG)方面，倉鼠餵食高脂肪飼料後，血清 TG 含量顯著增加約二倍 (Fig. 7)，B2、B5 及 B8 配方可顯著降低 TG，B1、B10 亦可有意義 地降低TG。

2. 經過檢討後，採用 B8 配方進行正式的試驗。

三、正式實驗

1. 倉鼠餵食高脂肪飼料 6 週後，血清總膽固醇及三酸甘油脂(TG) 含量顯著增加約2.7 倍 (Figs. 11~12)，KDS718 複方無法降低其總血 清 膽 固 醇 及 三 酸 甘 油 脂 含 量 ， 對 血 清 HDL-cholesterol 、 LDL-cholesterol 及 VLDL-cholesterol 也 均 無 抑 制 作 用 (data not shown)，對脂肪肝的形成也無抑制作用(data not shown)，此外各組 體重均無顯著差異(data not shown)。

2. 倉鼠餵食高脂肪飼料 12 週後，血清總膽固醇含量顯著增加約 3 倍 (Fig. 11)，三酸甘油脂(TG)含量顯著增加約 1.8 倍 (Fig. 12)，

KDS718 複方無法降低其總血清膽固醇及三酸甘油脂含量，對血清 HDL-cholesterol、LDL-cholesterol 及 VLDL-cholesterol 也均無抑制 作 用(data not shown)，對脂肪肝的形成也無抑制作用(data not shown)，此外各組體重也均無顯著差異(data not shown)。

3. 倉鼠餵食高脂肪飼料 6 週或 12 週後，GOT/GTP 無顯著增加 現象(Figs 13~14， 17~18)，而 KDS718 也不會影響 GOP/GTP。

4. 所有組別的體重，在第一第六及第十二週時，均沒有顯著差 異(Figs. 19-21)。

5. 倉鼠餵食高脂肪飼料 12 週後，血清經超高速離心機分離出 LDL，隨後進行體外的氧化試驗，結果在 Negative control 的倉鼠中，

只分離得到非常少量的LDL，所以屏除 Negative control。其他組別 LDL 氧化的 Lag phase 均落在 120 分鐘左右，最大 conjugated dienes 值均在OD234 =2.20 左右(Figs. 22， 23)，顯示 KDS718 無法延遲 LDL 的氧化。

6. 為了解動脈粥狀硬化的情形，請心臟專科醫師協助分離心臟 及主動脈弓的染色，但可能是切片位置不正確，未觀察到動脈粥狀 硬化的斑塊。

四、附加實驗

1. 倉鼠餵食膽固醇飼料 4 週後，血清總膽固醇含量顯著增加約 1.6 倍 (Fig. 24)，KDS718 複方無法降低其總血清膽固醇含量。血清 三酸甘油脂沒有顯著增加 KDS718 複方亦無法改變其血清三酸甘 油脂含量(Fig. 25)。

2. 倉鼠餵食高脂肪飼料 4 週，statin 顯著抑制血清總膽固醇及三 酸甘油脂含量。

第二節 基因安全性評估

一、沙門氏逆突變試驗(Ames test)

1. TA 98 (參考 Tables 1 & 2)

陰性對照組自發性突變菌落數，無 S9 下平均值為 35 個菌落，

有 S9 下平均值為 22 個菌落。陽性對照組逆突變菌落數，無 S9 下 平均值為 836 個菌落，有 S9 下為大於 1200 個菌落。KDS718 逆突 變菌落數，各種劑量無 S9 下平均值為 2~36 個菌落，有 S9 下平均 值為14~58 個菌落。

2. TA 100(參考 Tables 1 & 2)

陰性對照組自發性突變菌落數，無 S9 下平均值為 140 個菌落，

有 S9 下平均值為 15 個菌落。陽性對照組逆突變菌落數，無 S9 下 平均值為大於2300 個菌落，有 S9 下為大於 2500 個菌落。KDS718 逆突變菌落數，各種劑量無 S9 下平均值為 36~147 個菌落，有 S9 下平均值為36~226 個菌落。

3. TA 1535(參考 Tables 1 & 2)

有 S9 下平均值為 17 個菌落。陽性對照組逆突變菌落數，無 S9 下 平均值為492 個菌落，有 S9 下為 876 個菌落。KDS718 逆突變菌落 數，各種劑量無S9 下平均值為 5~24 個菌落，有 S9 下平均值為 4~17 個菌落。

4. TA 1537(參考 Tables 1 & 2)

陰性對照組自發性突變菌落數，無 S9 下平均值為 27 個菌落，

有 S9 下平均值為 11 個菌落。陽性對照組逆突變菌落數，無 S9 下 平均值為大於 1700 個菌落，有 S9 下為 566 個菌落。KDS718 逆突 變菌落數，各種劑量無 S9 下平均值為 13~48 個菌落，有 S9 下平均 值為4~41 個菌落。

5. WP-2ruvA(參考 Tables 1 & 2)

陰性對照組自發性突變菌落數，無 S9 下平均值為 45 個菌落，

有 S9 下平均值為 37 個菌落。陽性對照組逆突變菌落數，無 S9 下 平均值為大於332 個菌落，有 S9 下為 240 個菌落。KDS718 逆突變 菌落數，各種劑量無 S9 下平均值為 15~49 個菌落，有 S9 下平均值 為33~50 個菌落。

6. 由上述 1~5 結果顯示，KDS718 內容物樣品對 Salmonella

typhimurium TA98、TA100、TA1535、TA1537 及 WP-2ruvA 等測試

均無顯著的差異。KDS718 內容物粉末樣品其基因突變菌落數均未 超過溶劑對照組2 倍以上，亦無劑量與反應正相關性，顯示測試結 果為陰性反應，並不具基因突變性。

二、鼷鼠淋巴瘤tk 分析

1. KDS718 樣品，在濃度超過 50 μg/ml 以上，具有顯著的細胞毒 性，故本試驗所使用的濃度均小於50 μg/ml。細胞毒性測試，顯示 KDS718 小於 50μg/ml 下，在有 S9 及無 S9 條件下，均沒有顯著的 細胞毒性(Fig. 26)。當 KDS718 為 50μg/ml 時，在有 S9 及無 S9 條件 下，顯示已有些微的細胞毒性(Fig. 26)

2. KDS718內容物測試樣品在不含S9代謝活化系統下，濃度為 0.5、1.0、10及50 μg/ml時，其突變頻率(M.F. x 10^-6)分別為87.2±26.8、

76.0±20.5、77.6±25.2及29.5±18.9與陰性對照組(77.7±9.6)相較，其差 距均小於2倍；測試樣品在含有S9代謝活化系統下，濃度為0.5、1.0、

10及50 μg/ml時，其突變頻率分別為134.3±26.1、101.1±25.8、69.8±42.4 及39.8±20.0，與陰性對照組(87.1±44.9)相較，其差距均小於2倍。所 以測試樣品結果為陰性反應(Tables 3-4)。然而在KDS718濃度為50μ g/ml時，與陰性對照組比較其突變頻率有不正常的下降現象，可能因 為有部分毒性的原因。

3. 由上述 1-2 得知 KDS718 測試樣品在含有與不含代謝活化系 統下，其突變頻率與陰性對照組比較，其差距均小於2 倍，故測試 結果為陰性反應。

三、小鼠周邊血液微核試驗

1. 陰性對照組之微核試驗，其周邊血液中微核–網狀紅血球比例 為0.63%，網狀紅血球比例 1.81% (Fig. 27 & Tabs 5-6)。

2. 環磷醯氨為一已知致突變劑，為本試驗之陽性對照組，不僅 會增加微核–網狀紅血球之比例(9.52%)，且會影響紅血球生長過程 之代謝機制，導致紅血球中網狀紅血球比例(0.30%)較陰性對照組顯 著減少(p＜0.05)(Fig. 27 & Tabs 5-6)。

3. ICR 雄性小鼠分別管餵劑量為 0、0.5、2.5 及 5 g/kg BW 之受 測物「KDS718」，48 小時後採集周邊血液，以流式細胞儀進行微核 分析。結果顯示，各處理組(低、中、高三劑量組)之微核–網狀紅血 球數值與陰性對照組比較並無顯著差異(Fig. 27 & Tabs 5-6)。

4. 除觀察染色體被破壞所形成之微核現象外，亦可藉由觀察周 邊血液中網狀紅血球佔成熟紅血球的比例，了解紅血球之生成代謝 是否受到影響，作為微核試驗細胞毒性之另一評估參考指標。結果 顯示，受測物「KDS718」於餵食 48 小時後，各實驗組與陰性對照

組間無差異，而陽性對照組有顯著減少(p＜0.05)，如 Tabs 5 所示。

5. 由上述 1-4 結果顯示，受測物各劑量組與陰性對照組比較，

「KDS718」對 ICR 雄性小鼠周邊血液微核生成的比例無顯著差異，

且不影響雄性小鼠網狀紅血球之生成比例。