實驗一、斑石鯛 (Oplegnathus puctatus)人工孵化繁殖
1. 種魚培育與受精卵採集
本次孵化試驗種魚取自高雄市林園區合作養殖戶，使用以鱗片紋 路鑑定 6 年齡斑石鯛種魚，檢疫 3 天後將種魚各自蓄養於 8 噸圓形 玻璃纖維養殖槽，共 2 池，水溫維持在 20 ± 1 ℃，鹽度範圍在 33 - 35
ppt，養殖缸上方設置蘭花網遮蓋池面約 90 % 面積。每週清潔養殖缸 一次並於每日清晨抽底清除缸底髒物、更換海水以維持缸內水質穩定，
每日以胭脂蝦 (Aristaeomorpha foliacea)、鯖魚 (Scomber scombrus)、
南魷 (Sthenoteuthis oualaniensis) 及生鮮牡蠣等混合投餵 1 次。生殖季 期間發現斑石鯛具備婚姻色時，以手指輕壓種魚腹部檢查是否有精液 流出作為雄魚判斷依據；雌魚為腹部飽滿個體及以塑膠軟管插入生殖 孔吸取是否有卵粒作為判斷依據。雄魚為體長 25 - 40 cm，體中 2.5 - 3.5 kg 之自然成熟個體；雌魚挑選體長 25 - 40 cm，體重 2.5 - 3.5 kg 之個 體，先以塑膠軟管插入生殖孔吸取卵粒後觀察其成熟度，再以人類絨
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毛膜促性腺激素 (HCG) 1000 I.U. / kg、促黃體素釋放素 (LHRH - A2) 20 μg / kg 分別以生理食鹽水溶解後於背部肌肉採一次性注射催熟，
24 hr 後再注射一次上述二種激素觀察腹部是否肥滿、生殖孔是否突出 之個體作為採集成熟卵之依據。生殖季節傍晚晴朗時期將斑石鯛雌魚 與雄魚麻醉後分別取卵與精子，將精子以少量海水稀釋後與卵混合，
以毛筆緩慢攪動靜置 1 min，重複上述步驟 3 次後將卵以浮游生物網 收集，以海水洗去多餘精子後在將上浮於中、表層受精卵置入 100 L 容 器打氣，隔日清晨將受精與未受精卵分別收集秤重以瞭解斑石鯛人工 受精率。
2. 餌料生物與人工飼料
實驗用之海洋擬球藻、周氏扁藻種原購自國立台灣海洋大學水生 動物實驗中心，培養採半連續式培養 (Semi-continue culture)，經濾袋 過濾後將海水按比例加入 Walne 培養液配方 (Walne, 1974)，置入 20
L 透明酒果筒以高溫高壓滅菌，待冷卻後再依比例添加藻種後打氣培 養。光照週期維持 L 16 : D 8，照度 3000 - 5000 Lux，溫度維持 27 ± 0.5
℃，經 3 - 5 天呈現濃綠色時即可採收使用或繼續擴陪。
輪蟲體型約 130 - 300 μm，以 10 噸長方形玻璃纖維槽培養，加 入經濾袋過濾海水後，以淡水將鹽度調至 25 ppt，水溫維持 27 ± 0.5 ℃，
添加發酵液後 3 - 4 天後水色轉紅褐色後接種輪蟲，以微打氣方式培養，
每日添加適量發酵液維持水色，一週後即可以 300 目浮游生物網收集 輪蟲，依幼苗不同口徑大小使用不同網目 (150、120、100、80 網目) 篩選。
橈腳類培養方式參照輪蟲之培養方法，橈腳類需要較高溶氧，因 此培育期間採強打氣方式養殖，溶氧維持 > 5 ppm，一週後即可以 300 目浮游生物網收集橈腳類，依幼苗不同口徑大小使用不同網目 (150、
120、100、80 網目) 篩選橈腳類幼蟲及成蟲。
豐年蝦耐久卵為 Sanders 牌之 Great Salt Lake 品種 (Artemia franciscana)，去殼流程如下: 將卵浸泡於微打氣之淡水 1 hr，靜置沉
澱後，將上方懸浮卵倒除後收集下沉卵，以每克的耐久卵加入 13 ml 的漂白水溶液 (淡水/漂白水 = 1/1 比例配置) 作為去殼溶液，並攪拌觀 察耐久卵顏色變化，顏色呈現橘色時，使用浮游生物網收集並以乾淨 自來水清洗數次後再添加硫代硫酸鈉去除殘留氯，最後將卵風乾後存 於 4 ℃ 冰箱備用，孵化時將去殼卵放入強烈打氣之海水中，水溫 27
℃ 下約 16 - 18 hr 即可孵出無節幼蟲，孵化後即可採收並投餵幼苗，
多餘豐年蝦存於 4 ℃ 冰箱備用並於 12 hr 內用畢。
幼苗培育期間投餵之黑粒粉、海藻粉購自群冠公司。
3. 受精卵與胚胎發育
實驗期間共人工採卵 2 次，採集受精卵後置入 300 L 玻璃纖維桶
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中以連續微打氣、止水狀態做為孵化環境，孵化期間取出部分受精卵 置入 500 ml 燒杯中，燒杯外隔水加溫使溫度維持於 23 ± 1 ℃，每隔
30 min 利用塑膠滴管自燒杯內吸取受精卵至凹槽玻片上並以水蓋過受 精卵後，以複式顯微鏡觀察胚胎發育，並以數位相機拍照後再經影像 分析軟體 (Image J) 分析並記錄受精卵之卵徑、油球徑與胚胎發育各期 之時間與型態特徵。胚胎發育時期經歷時間，以顯微鏡視野中有 50 % 的受精卵胚胎從前一階段至下一階段所經歷的時間做判讀依據。
4. 仔稚魚孵化繁殖與型態觀察
採集受精卵後，隔日清晨將受精卵移入 4000 L、水溫 26 ± 1 ℃、
鹽度 35 ppt，pH 8.0 - 8.2 之方形玻璃纖維槽做為幼苗培育環境。仔魚 餌料以經海洋擬球藻及周氏扁藻滋養 3 hr 之輪蟲、橈腳類、豐年蝦及 人工配合微粒飼料做投餵餌料，每日視水色濃度適當添加藻水，並輔 以 250 目浮游生物網袋搓洗後之海藻粉及黑粒粉，將其均勻潑灑至養 殖槽中維持水色。育苗初期每日加入光合菌 (Rhodobacter capsulatus)、
枯草桿菌 (Bacillus substilis)、希瓦氏菌 (Shewanella sp.) 各 2 ppm 維 持水質穩定 (氨-氮 < 0.25 ppm；亞硝酸-氮 < 20 ppm)；育苗中後期開 始少量流水養殖，一週後將幼苗移至新養殖槽蓄養。培育期間定期採 樣 5 尾斑石鯛幼苗，隨魚體大小不同而分別以複式顯微鏡及解剖顯微 鏡觀察及拍攝記錄魚苗之體色及形態特徵變化，拍攝前以麻醉劑處理
幼苗後，待其跳動趨緩再移至顯微鏡進行拍照記錄，並以電子游標尺 或尺規測量平均體標準長，了解斑石鯛幼苗生長情形。