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第五章 葛屬活性成分定量

第二節 泰葛與川葛、臺葛活性成分之定量分析比較

市售川葛檢品 1、2、3,市售台灣葛根檢品 1、2),分別加入已知濃度的 標準品溶液,混合振盪一分鐘,然後重新層析定量,所測得之五種指標成 分增加量除以已知的標準品添加量即為回收率。

實驗結果可知 Puerarin、Daidzin 、Genistin、Daidzein 和 Genistein 於藥材中之回收率(﹪),得到各個指標成分的回收率在 96.1﹪-104.8﹪

之間,顯示實驗之回收率良好。(Table 23.)

Table 23. Puerarin, Daidzin, Genistin, Daidzein, Genistein 的回收率(﹪)

Constituent Puerarin Daidzin Genistin Daidzein Genistein PM(mean±S.D) 100.93 99.30 101.20 103.13 99.17 PL1(mean±S.D) 102.73 101.63 97.933 98.73 101.63 PL2(mean±S.D) 99.57 101.37 101.67 101.53 101.17 PL3(mean±S.D) 102.87 99.57 100.63 102.13 101.33 PT(mean±S.D) 102.97 103.87 99.97 98.57 100.80 PP(mean±S.D) 99.43 101.60 102.30 98.93 101.63

第二節 泰葛與川葛、臺葛活性成分之定量分析比較

我們將取得之藥材與植物進行前處理,計畫以同樣萃取方式進行葛屬 植物七種葛根(Table 24)進行萃取,得到各種葛屬植物之抽提率,進而 分析,得到層析圖,再換算得到五種活性成分(Puerarin、Daidzin、Genistin、

Daidzein 及 Genistein)在原生藥材或植物中的實際含量,達到一個良好的 品質監測及不同葛屬植物之活性成分含量的比較。

Table 24. 七種葛根的縮寫

壹、各種葛屬之抽提率值:

在對各種檢品萃取方式的試驗,以 PM 為萃取標準,置於 60℃,先以 10 倍的甲醇萃取五次,10 倍的 70%甲醇萃取四次,10 倍的 50%甲醇萃取 四次,再以 30 倍甲醇萃取。之後再以 10 倍甲醇萃取,過濾打入 HPLC,

檢測是否仍有五種指標成分,接著以 10 倍 70%甲醇、50%甲醇萃取,萃 取完都用 HPLC 證明將成分萃取完全,此時濃縮乾燥秤重為乾燥重,乾 燥重除以原植物重之比率,為抽提率。抽提率由大至小依序 PM1>PM>

PP>PL3>PT>PL1>PL2 .(Table. 25 & Fig. 4 )

Table 25. 各種葛屬植物之抽提率百分比

種 類 縮 寫

泰國葛根… … …

PM

泰國葛根市場品… … …

PM1

大陸四川葛根(藥用)… … … PL1 大陸四川葛根(一般民間食用)… … … PL2

大陸四川葛根(藥用)… … … PL3 臺灣野葛… … … PT

臺灣葛根… … … PP

PM PM1 PL1 PL2 PL3 PT PP 抽提率 37.44﹪ 40.55﹪ 13.57﹪ 11.30﹪ 15.90﹪ 15.06﹪ 17.02﹪

貳、葛屬植物檢品活性成分含量:

將 PM、PL1、PL2、PL3、PT、PP 配置適當濃度,經由高效液相層 析之定量結果如 Table 27(Fig. 5、6、7、8、9)所示,各生藥之層析圖 分別如圖(Chrom. 1-6)。

葛屬植物檢品活性成分含量結果顯示如下:

Table 26.各種葛屬植物每公克內所含活性成分之含量(mg/g)

Puerarin Daidzin Genistin Daidzein Genistein

PM 7.55 0.56 0.0634 0.28 0.36

PM1 0.53 0.22 0.0302 0.20 7.20

PL1 0.87 0.73 0.0692 0.20 0.19

PL2 3.78 0.39 0.0314 0.26 0.26

PL3 5.29 0.75 0.0665 0.29 0.22

PT 5.65 1.63 0.50 0.57 1.53

PP 6.23 1.76 0.59 0.90 3.18

由 Table 26. 可以發現,以泰國、四川、臺灣三地之葛根來比較,除了 Puerarin,臺灣葛根(PT、PP)的活性成分含量明顯比其他兩地葛根的活 性成分含量來的多。成分高低含量如:Genistin,可高達 18.85 倍,少則 如 Daidzein ,可高達 4.58 倍,顯示臺灣葛根的活性成分可用率會比其他 兩地來的好。

其中,三種川葛的市售品,又以 PL3 所含的 Puerarin 最高,由表可看出 PL3 比 PL1 高出 6 倍,顯示出市場品間品質的差異性。以同樣來源的藥

用川葛與一般民間食用川葛比較,發現兩者主要差別在 Puerarin、 Daidzin 和 Genistin 的含量比。

Puerarin 方面,食用川葛比藥用川葛高出 4.32 倍。

Daidzin 和 Genistin 方面,藥用川葛反而比食用川葛高出約兩倍。

泰葛除了具其特有成分外,Puerarin 含量為三地七種葛屬植物中佔最 高者。

不同產地葛屬植物之定量比較結果如表所示,各植物之高效液相層析 圖分別如圖(Chrom. 1-6)。結果顯示 PM、PM1、PL1、PL2、PL3、PT、

PP 中,

以 PT 含 Puerarin 最多(PT>PP>PL2>PL3>PM> PL1>PM1)

以 PT 含 Daidzin 最多(PT>PP>PL3> PL1>PL2>PM>PM1)

以 PP 含 Genistin 最多(PP>PT>PL1>PL3>PM>PL2>PM1)

以 PP 含 Daidzein 最多(PP>PT>PL3>PM>PL2>PM1>PL1)

以 PM1 含 Genistein 最多(PM1>PT>PP>PL2>PL3> PL1>PM)

第二部分 泰葛一年生不同部位器官之成分定量

與泰葛組織培養-癒傷組織之二次代謝產物的研究比較

第一節 分析條件的選擇及最佳化:(沿用第一部份的分析條件)

※最佳的分析系統: (UV=254nm,Rate =1 ml/min,30℃,RP-18) ACN:H2O:HAC Time A B Curve A 15:85:0.15 0 100 0 linear B 35:65:0.15 60 0 100 linear

第二節 泰葛一年生不同部位器官與癒傷組織二次代謝產物之抽