蛇床子及其活性成分對於大鼠改善學習記憶障礙作用之研究

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(1)第一章緒論健忘(amnesia)是癡呆症主要臨床症狀之一，與學習記憶能力有密切的關係。現今已開發之智能增進劑有 cholinergic agents 如 tacrine, nootropics 如 piracetam(1)。至於自中藥開發之智能增進劑如 huperizine A 及本所十年來探討約二十種中藥及其方劑，如天麻、當歸、地黃、六味地黃丸等具改善學習記憶障礙之作用(2)。中醫對於「衰老」理論主要在於「腎衰」、「氣衰」及「血瘀痰瘀」，因此防治「衰老」多以溫腎壯陽中藥為主，其次為滋腎養陰，活血化瘀類 (3) 。蛇床子為繖形科植物蛇床 (Cnidium monnieri(L.)CUSSON)之乾燥成熟果實，始著錄於神農本草經上品，主溫腎壯陽，女子帶下陰癢，子宮寒冷不孕等功效；現代藥理研究證實蛇床子具有雌性激素樣、抗氧化及抗老化等作用，且於 1997 年之研究蛇床子成分蛇床子素對於氫化可體松 (hydrocortisone)誘發的腎陽虛大鼠之學習障礙具改善作用(4)。根據流行病學之研究，癡呆症之罹患率以女性居多，女性每十萬人約有 28 人罹患癡呆症，而男性每十萬人約有 16 人罹患癡呆症(5)。且於近期研究指出，在動物學習模式中，有性別操作之差異，其原因可能是 testosterone 及 estradiol 與 hippocampal formation 有關係(6)；另一方面，estrogen 具有增強智能及改善智 1.

(2) 能障礙之作用，且可用於預防或治療老年癡呆症或 Alzheimer’s disease，並對停經後婦女之智能有所助益(7)。因此，本論文之目的：擬探討蛇床子及其成分蛇床子素對卵巢去除雌性大鼠在動物學習模式學習操作能力之作用。而智能增進劑之開發，應於各類學習模式，如：被動迴避學習反應(passive avoidance learning)及水迷宮(water maze)等；均應具增強或改善作用。因此，本論文之另一目的，擬探討蛇床子及其成分蛇床子素(osthole)對被動迴避學習反應、水迷宮等動物學習模式之智能增進作用。另一方面，神經傳遞物質對於學習記憶扮演重要之角色，scopolamine(SCOP)為乙醯膽鹼 acetylcholine muscarinic receptor 拮抗劑，能影響學習獲得及短期記憶，其作用機轉與週邊及中樞神經系統有關。且 nootropics 類藥物 (piracetam)，智能增進作用之機轉，認為其作用可能經由影響腎上腺機能，使體內之 glucose 利用率增加，腦內血糖濃度增加，因而增加腦內能量之供給，活化腦內神經系統(8)。而中藥蛇床子為溫腎壯陽、滋陰補腎藥，因此，本研究更進一步探討蛇床子及其成分蛇床子素增強動物學習模式學習操作與腎上腺機能之關係；及其改善學習記憶之作用機轉與週邊及中樞神經系統之相關性。. 2.

(3) 第二章總論第一節蛇床子之本草及其文獻考察一、蛇床子之本草考察 1. 蛇床子之本草系統圖. 3.

(4) 2. 藥名之考訂子之名，首先著錄於神農本草經(9)之本經上品，以降諸. 蛇. 家本草如別錄(10)、新修(11)、開寶(12)、嘉祐(13)、圖經 (14)、證類(15) 及重修政和(16)等皆因襲之。更早之古籍爾雅除以盱為正名外，復以蛇. 為別名，迄本草綱目則沿用蛇. 原植物之名為正名(17)。. 俗書作床，與麻相近，各本誤作麻，今訂正。可知蛇. 子，即蛇. 床子，二物正名相通，而蛇、蛇床亦同，以蛇床為原植物之正名者，尚有湯液本草、本經逢源等二書，由此可知，蛇、蛇床為植物名，蛇至於蛇. 子、蛇床子為藥材名。. 、蛇床之名義，於明本草綱目釋名時珍曰：蛇. 喜. 臥于下，食其子，故有蛇、蛇粟諸名。其葉似蘼蕪，故曰牆蘼。爾雅云：盱，虺至於蛇. 也。皆通述其名義與別名乎。. 子之別名，本經曰：一名蛇粟，一名蛇米。名醫別. 錄增衍曰：一名虺，一名思益，一名繩毒，一名棗棘，一名牆蘼。爾後歷代諸家本草如陶弘景校定及集注本草經、新修、蜀本、嘉祐、大觀、重修政和、巉巖本草、救荒本草、本草品彙精要及本草綱目皆沿用著錄上述別名；迄新修本草注引爾雅：一名盱，而後開寶、蜀本、嘉祐、証類、品彙精要、綱目、圖考及長編，亦並錄盱為別名；嘉祐後引爾雅注盱，一名虺、蛇、馬並見馬. ，. 別名；復因所引諸書與方劑，有用子、仁、末、仁末、. 子末、子仁或仁炒等不同之敘述供藥用，明指其子實，去種皮之仁，或子、仁等研末及炒用，或因種子貌小如粟米而有蛇粟、蛇米，或因蛇喜臥其下食其子，而有蛇. 子、蛇床子、思益等別名。. 牆蘼別名，乃指田野墟落間或牆壁間甚多，花葉正似蘼蕪。馬. 4.

(5) 別名，乃其形於每枝上有花頭，百餘結同一窠，似馬芹類。復於長編引廣雅疏證：粟，. 也，此. 與蛇字俗書相近；御覽引. 吳普本草云：一名蛇珠；山居賦：蛇. 實為九實之一，即. 其義皆通，誠如粟米、珠，即小實也。詳蛇. 也，. 子之本草系統圖. 可知其藥名之記述情形。據文獻並綜如上述，蛇. 子、蛇床子之名稱，歷代諸家本草. 概指其子實供藥用，皆以蛇、蛇床為植物名，蛇. 子、蛇床子. 為藥材名，乃蛇喜臥其下食其子，因而得名。至於其別名，有蛇粟、蛇米、虺、思益、繩毒、棗棘、牆蘼、盱、馬蛇. 末、蛇. 仁末、蛇. 子末、. 、. 粟、. 、蛇. 仁、. ，皆因形狀象. 形，文字古今寫法，義含用辭、用部、方用炒製及其對蟲害毒性之義等之會意名辭或功用之意義名詞矣！. 3. 型態、產地、藥用部位之考訂本經、別錄未載蛇. 子之形態，陶注始論蛇. 子云：近道田. 野墟落間甚多，花葉正似蘼蕪。至嘉祐謹案蜀本圖經云：似小葉芎藭，花白，子如黍，粒黃白色，生下濕地，今所在皆有，出揚州、襄州者良，採子暴乾。此蜀本圖經乃新修實施全國生藥大普察時之圖經，明指該植物似小葉芎藭，同陶注花葉正似蘼蕪，可知蛇. 子為繖形科植物，花白，子如黍，粒黃白，為繖形花序。. 至圖經本草援引別錄、陶注及蜀本圖經之產地云：蛇. 子生臨淄. 川谷及田野，今處處有之，而揚州、襄州者勝。三月生苗，高三、四尺，葉青翠，作叢似蒿枝，每枝上有花頭，百餘結同一窠，似馬芹類，四、五月開白花，仁似散水，子黃褐色，如黍米至輕虛，. 5.

(6) 五月採實，陰乾。爾後救荒本草及本草蒙筌傳承別錄、圖經本草等之文，救荒曰：蛇床子，生臨淄川谷田野，今處處有之。苗高一、二尺，青碎作叢似蒿枝，葉似黃. J葉。又似小葉蘼蕪，又似. J本葉。每枝上有花頭百餘，結同一窠，開白花如傘蓋狀，結子米黍大，黃褐色。救飢：採嫩苗葉煠熟，水浸淘洗淨，油鹽調食。蒙筌云：在處田野俱產，揚州、襄州獨勝。春生苗，葉成叢，青翠彷彿蒿狀。開白花細綴百餘一窠，四、五月間開。結黃子輕虛粒如黍米。近秋採收，背日陰乾。本草品彙精要分項敘述曰：時生，三月生苗；採，五月取實。收陰乾。用子。質類蒔蘿而細。色黃褐。迄本草綱目〔集解〕時珍曰：其花如碎米攢簇，其子兩片合成，似蒔蘿子而細，亦有細稜。凡花實似蛇床者，當歸、芎藭、水芹、 J本、胡蘿蔔是也。至本草乘雅半偈覆曰：生臨淄川谷，及田野墟落間。三月生苗，高二、三尺，葉似蘼蕪，枝上有花頭百餘，同結一窠。四月放花白色，結子攢簇，兩片合成，極輕虛，似蒔蘿子，亦有細稜。至本草述更綜述曰：蛇. 子，又名蛇粟，因蛇虺喜臥其下，食其子，. 故有此名。生下溼地，所在皆有，三月生苗，高二、三尺，葉青翠，作叢似蒿枝，每枝上有花頭百餘，結成一窠，四、五月乃開白花，其子黃褐色，兩片合成，至輕虛，似蒔蘿子而細，亦有細稜，凡花實似蛇床者，當歸、芎藭、水芹、 J本、胡蘿蔔是也。迄本草備要及本草從新則曰：似小茴而細。至植物名實圖考引救荒本草之形態，復引淮南汜論訓云：夫亂人者，芎藭之與蛇. 之與蘼蕪也，此皆相似。說林訓云：蛇. 似蘼蕪而不能芳。. 故實際植物外形相似，質地芳香實有所差異矣！. 6. J本也，.

(7) 關於蛇. 子之產地，別錄曰：生臨淄川谷及田野。臨淄川谷. 即臨淄縣治區，為齊郡治，并為青州治，故治在今江蘇省六合縣東南。蜀本圖經曰：揚州、襄州者良或勝或稱獨勝，揚州仍古九州之一，唐改曰昇州，尋復曰揚州，又改為廣陵郡，在今江蘇省邗縣及江都縣治。襄州者，乃唐之襄陽郡，故治乃今湖北省襄陽縣(18)。綜觀蛇. 子之產地，並參考圖經、巉嚴本草、大觀、重修政. 和、品彙精要、救荒本草、綱目及圖考等之各種藥圖，由其苗、葉、枝、花白、子如黍，兩片合成，花頭如傘蓋狀，似小葉芎藭，蒔蘿、當歸、水芹… … 等之形態，可推定為雙懸果 Umbelliferae(繖形科)Cnidium(芎藭屬)植物無疑。並得以確知蛇. 之品種雖單. 一，但其類似代用植物為數不少，其藥材之偽品或代用品有多種。其產地古以臨淄、揚州、襄州為道地，然喜生於山坡溼地草叢中，或田間、路旁、處處可見，廣佈中國大部分地區。主產河北、山東、江蘇、浙江等地，此外廣西、四川、陜西、山西亦產。. 4. 性味、藥能之考訂本經曰：「蛇. 子。味苦、辛、甘，平。主婦人陰中腫痛，. 男子陰痿濕癢，除痺氣，利關節，癲癇，惡瘡，久服輕身。」而別錄曰：「蛇. 子。無毒。溫中下氣，令婦人子藏熱，男子陰強，. 好顏色，令人有子。」兩者性能，相輔相成，自漢唐迄宋初期，未見增益其功能，至嘉祐除引本經、別錄、陶注、唐本草原文外，並引藥性論云：「蛇毒. 仁，君，有小毒。治男子女人虛，濕痺，. 痛，去男子腰疼，浴男女陰，去風冷，大益陽事，主大風身. 7.

(8) 癢，煎湯浴之差，療齒痛及小兒驚癇。」復引日華子云：「治暴冷，煖丈夫陽氣，助女人陰氣，撲損瘀血，腰跨疼，陰行濕癬，四肢頑痺，赤白帶下，縮小便，凡合藥服食，即挼去皮殼，取仁微炒殺毒，即不辣，作湯洗病，則生用之。」二書亦修飾其溫腎助陽，袪風，燥濕，殺蟲及強陰，赤白帶下，疥癬濕瘡等相當於今日念珠球菌病況，並首論有小毒，生用可做湯洗浴之效。至南宋王介之履巉嚴本草載錄本經之功及別名，迄金元王好古之湯液本草合錄本經及別錄之文，更無新增療效，大抵皆從古說之為用。於本草品彙精要云：「性平、散。氣厚於味，陽中之陰。味臭。主除風益陽。合治合豬脂，治小兒癬瘡。」於本草蒙筌云：「治婦人陰戶腫疼，溫煖子臟；療男子陰囊濕癢，堅舉尿莖。斂陰汗，卻癲癇，掃瘡瘍，利關節。主腰胯腫痛，袪手足痺頑。大風身癢難當，作湯洗愈；產後陰脫不起，絹袋燙收。婦人無妊，最宜久服。」二書所論，略增注功能，亦對性味有所補益，彌足珍貴。迄綱目發明項時珍曰：「蛇. 乃右腎命門少陽三. 焦氣分之藥。神農列之上品，不獨補助男子，而又益婦人，世人拾此而求補藥於遠域，豈非賤目貴耳乎。」反譏世風眉眼高額，求補藥於他方，賤田野隨處可得之品，棄之不用之愚乎。本草乘雅半偈曰：「蛇. 子，苦、平，無毒。蛇性竄疾，獨. 居處隱僻，稟風木善行數變之體用耳。蛇床功用，靡不. 合。設. 非氣性相似，寧為蛇虺所嗜。男子陰痿濕癢，婦人陰中腫痛，正厥陰隱僻之地，氣閉不通所致。蛇床宣大風力，鼓舞生陽，則前陰疏泄，竄疾自如。并可伸癲癇之氣逆于藏，與關節之壅塞不開，痺去則身輕，肝榮則色其色矣。真堪作把握陰陽，維持風色之良. 8.

(9) 劑也。」似說明其藥性功能及作用機轉之道。本草新編、本草述、本草備要、本經逢源、本草詩箋、本草從新、得配本草、本草求真：等明清近代本草，大抵參詳本草綱目前引正統本草之性味、功能，復別述金元流用藥理論，詳細概述其藥理作用機轉，可詳閱蛇. 子歷代諸家本草原文。茲簡略概. 述其輪廓如下：新編：「蛇床子。味苦、辛，氣平，無毒。治陰戶腫痛且癢，溫暖子宮，療男子陰囊溼癢，堅舉尿莖，斂陰汗，卻癲癇，拂瘡瘍，利關節，主腰膝胯痛，袪手足痺頑，治產後陰脫不起，婦人無妊，尤宜久服，則功用頗奇。內外俱可兼施，而外治尤良。若欲修合丸散，用之於參、 I、歸、地、山茱之中，實有利益，然又宜乎陰寒無火之人，倘陰虛火動者，服之非宜也。或問蛇床子外治實佳，內治未必得如外治。不知蛇床子內、外治無無佳也。吾言其內治之，益絕陽不起，用蛇床子一兩、熟地一兩，二味煎服，陽道頓起，可以久戰，大異平日，非內治之尤佳乎？以之修合丸散，尤有久力。可見，蛇床子煎丸并用，無不佳妙。不可謂外治佳，內治不佳也。」本草述曰：「蛇. 子，氣味苦，平，無毒。」主治同別錄，. 略增方書於治痿，健忘，消癉，赤白濁諸劑中亦用之。並論其藥理曰：「夫實結於夏，而嘗之先有苦味，後轉為大辛，是火氣歸於金也，然由華而實，華白色而實輕虛，是金質復歸於火也。蓋火不歸金，則氣之體不全，金不歸火，則氣之用不昌，氣之體全，而乃歸命門以孕其元，氣之用昌，而乃達三焦以致其用。或曰：紫蘇亦火中之金，何以不歸命門。曰：火中之金，應歸命門元氣，蓋金水母子相戀，且友其所自始也，若紫蘇其見色紫，合於辛味，. 9.

(10) 自應入心與肺矣，蓋命門為元氣之根，而心肺即為氣之用也，為氣之用，所以紫蘇為宣劑。故本經言治男子陰痿溼癢，婦人陰中腫痛，除痺氣，利關節，非指其用而言乎。而別錄謂令女子子臟熱，男子陰強，非指其體而言乎！夫元氣之體用，全具於坎離，然而坎中孕離，離中宅坎，皆由其得全氣也，金為水母，火為金夫，惟水中有金，故坎中孕離，而水為火用，則元氣以生。惟火中有金，故離中蓄坎，而火為水用，則元氣以化，茲物乘夏火以結實，卻火氣盡歸金味，賦輕虛以攢成，而金味仍是火質，火歸金，故令火為水用而暢陰。夫從妻也，金化火，乃得水為火用而達陽，子隨母也，此味由化歸生，復由生歸化，元氣之體用全者，於茲味可窺一班也。或曰：如之頤所云：宣大風力，鼓舞生陽，其義不相戾歟。曰：蛇床所治諸證，皆由陽氣之不得鼓舞以暢其用，無非屬風虛之為病也，為溼痺，為毒氣，皆本諸此，如金火合而氣化，雖微物，而有天氣至地，地氣至天之化機，是即所以補風虛也。試觀其華實於夏火，而為質輕虛，豈非陰溼化為陽明，有鼓之舞之以暢天氣者乎！天氣暢，則至地，地氣達，則至天，火為水用而暢陽，此天氣至地，水為火用而達陽，此地氣至天。蓋陰陽則降而陽隨之，陽達則升，而陰隨之也。是物以達陽而升為終事，卻以暢陰而降為始事。始事終事之義也，是此，未樞要語。此乃金火合而歸於命門之實際也，金火合則陰暢，元氣乃歸於命門，歸於命門是非三焦之氣盛，能補風虛，原與足厥陰通者，能合而行上乎，此所謂地氣達至天也。升降原相因，惟其地氣達則至天，故方書有用之治喉痺，并耳溼瘡及齒牙周痛者，其方見本草綱目，準繩治腎虛耳聾二方，用蛇床子。或曰：據斯義，是. 10.

(11) 不止療溼而且療風，不止療風淫，更且療風虛矣，第如甄權所謂治男女虛溼痺毒風. 痛者，得與本經所云不少為差別否。曰：風. 與溼之用，人身具足，而風與溼之為病，無不相感以相化也。本經但未詳盡耳，大抵溼之痺，由於風虛，風虛乃病於陰氣，而為痺毒風之，由於溼淫，濕淫乃病於陽氣，陽氣即指陰中之陽，而為. 痛，又何異同之有，第雖有天氣地氣之分，然咸不越於氣. 交以為治，經所謂氣交之分，人氣從之，萬物由之者也。故別錄於此味，云有溫中下氣之義，蓋脾腎肝同起於下，而別錄於此味，更云甘辛，辛合於甘以歸腎，是由母趨子，故得致津液而化陰中之陽，如兔絲、覆盆、蛇床，皆補陰氣之方劑，非苦辛熱偏勝也。或曰：蛇床子之用，所謂天氣至地，地氣至天者，於何徵之曰：本草所云：強陰是天氣至徵而方書於健忘丸中用之，地氣至天也，此猶同宮水火之氣耳，若上以治面瘡，下以療痔疾，夫非上下極至之微歟！更有可參者，如內補鹿茸丸，治赤白濁，由於勞傷思想，陰陽兩虛者，其益陽之味頗多，即桂附亦有用之矣，豈猶藉此味以達陽歟！是蓋因思想傷陰，是陽中之陰不化，陰傷而及於陽也，或藉此以化陽中之陰，而後真陽乃得復歟！更如消癉之白茯苓丸，因消中之後，胃熱入腎，消爍腎脂，令腎枯燥，遂致此疾，而丸中用腎陰，并除胃腎之枯燥者是矣，乃反用此味以達陽歟，母亦陽陷於陰中而不化，藉此由陰之化以散陽歟，即此二治推之，則用此味，不得但勦陳說，抵以去溼達陽盡之矣。」由上述所論，得以了解陰陽、天地、五行、母子、生剋、濕痺、氣味、內治、外治、補陰、助陽、勝衰、上下、合治之用藥理論之奧妙，果是否如此，當以現代科學原理予以探討。其以下. 11.

(12) 諸本草所論功用等，大抵同綱目之說，其全文暫略，以省編幅。綜如上述，蛇床子自本經以下以迄明清近代諸本草，味辛，苦，溫，無毒。惟藥性論謂有小毒。主溫腎助陽，袪風，燥濕，殺蟲。治男子陽痿，陰囊濕癢，女子帶下陰癢，子宮寒冷不孕，風濕痺痛，疥癬濕瘡。. 5. 修治、方用與禁忌之考訂關於蛇床子之採收，別錄曰：「五月採實，陰乾。」嘉祐引蜀本圖經云：「採子暴乾。」迄圖經本草及品彙精要均沿用別錄之說，品彙精要更衍曰：「採，五月取實。收陰乾。用子。質類蒔蘿而細。」湯液本草曰：「五月採，陰乾。」本草蒙筌曰：「近秋收採，背日陰乾。入藥取仁炒用，浴湯帶殼生煎。」迄明長編引救荒曰：「採嫩苗葉煠熟，水浸淘洗淨，油鹽調食。」可知蛇床子自古以五月採實，陰乾為主，子則暴乾或秋季採收，背日陰乾。花期 4~7 月。果期 6~8 月。果實成熟，呈黃色時採收，割取全株如蒿枝，打落果實，曬乾。關於蛇床子之炮製，最早於嘉祐引日華子曰：「凡合藥服食，即挼去皮殼，取仁微炒殺毒，即不辣，作湯洗病，則生用之。」證類引炮炙論曰：「凡使，須用濃藍汁并百部草根、自然汁，二味同浸三伏時，漉出，日乾，卻用生地黃汁相伴蒸，從午至亥，日乾用。」本草乘雅半偈修治同上，迄本草述希雍曰：「修治，入丸散用，布色挼去皮殼取仁為炒，殺毒即不辣也，作湯洗浴則生用之。酒浸一宿，以生地汁伴，久蒸焙乾用。愚按：蛇床子之用，全在辣甚，炒猶不宜，不如雷氏用生地伴蒸之為當也。」本. 12.

(13) 草備要、本草從新二書曰：「似小茴而細，微炒。殺毒則不辣。以地黃汁拌蒸，三遍佳。」得配本草曰：「去殼取仁，微炒，殺其毒則不辣，酒浸日乾，以地黃汁拌蒸，焙乾用。或用濃藍汁、百部汁，同浸漉出，晒乾，再以生地汁拌蒸，晒乾用。若作湯洗瘡，生用。」可知蛇床子炮製，宜揀去雜質，篩去泥沙，洗淨再如得配本草所論最為詳盡。配伍禁忌方面，藥對曰：「惡牡丹、巴豆、貝母。」爾後諸家本草皆沿用而並錄之，湯液本草及明品彙精要等亦同，本草蒙筌稱：「所惡之藥有三：牡丹、巴豆、貝母。」至本草述希雍曰：「蛇床。性溫燥腎，有火及下部有熱者勿服。」本草新編曰：「若欲修合丸散，用之於參、 I、歸、地、山茱之中，實有利益，然又宜乎陰寒無火之人，倘陰虛火動者，服之非宜也。」本經逢源曰：「但腎火易動，陽強精不固者勿服。」本草詩箋曰：「只有陽強精不固，忌他溫性味辛香。」本草從新曰：「腎火易動者勿服。」本草求真曰：「但性溫燥，凡命門火熾及下部有熱者切忌，惡丹皮、巴豆、貝母。」由上可知蛇床子宜忌，惡牡丹、巴豆、貝母。凡下焦有溼熱，或腎陰不足，相火易動以及精關不固者忌服。蛇床子之方用，證類引千金方曰：「治產後陰下脫，蛇絹帶盛，蒸燙之，亦治陰戶痛。治小兒癬瘡，杵蛇. 子. 末，和豬脂. 塗之。」金匱玉函方曰：「溫中坐藥，蛇床子散方，蛇床子仁為末，以白粉少許，和令勻，相得如棗大，綿裹內之，自然溫矣。」本草綱目〔附方〕新十一。千金方：「陽事不起，蛇. 子、. 五味子、菟絲子，等分為末，蜜丸梧子大，每服三十丸，溫酒下，. 13.

(14) 日三服。」儒門事親方：「赤白帶下，月水不來，用蛇. 子、枯白礬，. 等分分為末，醋麵糊丸彈子大，胭脂為衣，綿裹納入陰戶，如熱極再換，日一次。」千金方：「婦人陰痛。」永類方：「男子陰腫，脹痛，蛇經驗方：「大腸脫肛，蛇. 子末，雞子黃調傅之。」. 錢，白湯下，日三服，并以蛇. 子、甘草各一兩，為末，每服一末傅之。」. 簡便方：「痔瘡腫痛，不可忍，蛇. 子煎湯薰洗。」. 普濟方：「小兒甜瘡，頭面耳邊連引，流水極癢，久久不愈者，蛇. 子一兩，輕粉三錢，為細末，油調搽之。」. 全幼心鑑：「耳內濕瘡，蛇. 子、黃連各一錢，輕粉一字，. 為末吹之。」千金、集簡方：「風蟲牙痛，千金用蛇集簡方用蛇. 子燭燼，同研塗之。. 子煎湯，乘熱漱數之，立止。」. 聖惠方：「冬月喉痺，腫痛不可下藥者，蛇. 子燒煙於瓶中，. 口含瓶嘴吸煙，其疫自出。」本草述：「同巴戟天、牛膝、何首烏、陽起石，治男子陰痿濕癢。愚按陰痿濕癢，多由肝經濕熱，璆氏以辛溫之味，治之恐有未當。同巴戟天、牛膝、杜仲、續斷、地黃、黃蘗、白膠，治婦人陰中腫痛。同黃蘗、山茱萸肉、五味子、茯苓、車前子、香附、川續斷、補骨脂，治一切帶下，赤者加白膠、阿膠。」附方：「陽事不起，蛇床子、五味子、兔絲子，等分為末，蜜丸梧子大，每服三十丸，溫酒下，日三服。赤白帶下，月水不來，用蛇床子、. 14.

(15) 枯白礬，等分為末，醋麵糊丸，彈子大，胭脂為衣，綿裹納入陰戶，如熱極再換，日一次。」綜如上述，蛇床子，自古以五月採實，陰乾為主，用子則暴乾或秋季採收，背日陰乾。炮製則揀去雜質，篩去泥沙，洗淨，曬乾。去殼取仁，微炒，殺其毒則不辣，酒浸日乾，以地黃汁拌蒸，焙乾用。或用濃藍汁、百部汁，同浸漉出，晒乾，再以生地汁拌蒸，晒乾用。若作湯洗瘡，生用。宜忌惡牡丹、巴豆、貝母。凡下焦有溼熱，或腎陰不足，相火易動以及精關不固者忌服。方用並治產後陰下脫，小兒癬瘡，溫中坐藥，陽事不起，赤白帶下，月水不來，婦人陰痛，男子陰腫脹痛，大腸脫肛，痔瘡腫痛，小兒甜瘡，耳內濕瘡，風蟲牙痛，冬月喉痺，男子陰痿濕癢，婦人陰中腫痛，帶下赤白，滴蟲性陰道炎，婦人子腫挺出，小兒唇口邊肥瘡等症。. 15.

(16) 二、蛇床子之生藥學考察 (19). 1. 蛇床子之性狀本品為雙懸果，成橢圓形，長 2~4mm, 直徑約 2mm。表面灰黃色或灰褐色，頂端有 2 枚向外彎曲的柱基，基部偶有細梗。分果的背面有薄而凸起的縱棱 5 條，接合面平坦，有 2 條棕色略突起的縱棱線。果皮鬆脆，揉搓易脫落，種子細小，灰棕色，顯油性。氣香，味辛涼，有麻舌感。. 2. 蛇床子之鑑別 (1) 本品分果橫切面：外果皮為 1 列扁平細胞，外被角質層。中果皮較厚，縱棱異常突出，中部有維管束，其周圍有厚壁木化網紋細胞；背面縱棱間各有橢圓形一個，接合面有油管 2 個，共有 6 個。內果皮為 1 列扁平細胞。種皮為 1 列淡棕色細胞。胚乳細胞含多數糊粉粒，澱粉粒及草酸鈣簇晶。. (2) 取本品粉末 2g，加乙醇 20ml，加熱回流 30 分鐘，濾過。取濾液數滴，點於白瓷板上，置紫外光燈(365nm)下觀察，顯藍紫色螢光；另取濾液 2ml，加等量的 3﹪碳酸鈉溶液，加熱 5 分鐘，放冷，再加新製的重氮對硝基苯胺試液 1~2 滴，即顯櫻紅色。. (3) 取本品粗粉 0.3g，加乙醇 5ml，離心處理 5 分鐘，放置，取上清液作為供試品溶液。另取蛇床子素對照品，加乙醇配成每 1ml 含 1mg 的溶液，作為對照品溶液。依照薄層色譜法試驗，吸. 16.

(17) 取上述兩種溶液各 2µl，分別點於同一片甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠Ｇ薄層板上，以苯－醋酸乙酯(30：1)為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相映的位置上，顯現相同顏色的螢光斑點。. 3. 蛇床子之含量測定精密秤取在五氧化二磷乾燥器中減壓乾燥至恒重的本品粉末(過三號篩)1g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇 20ml，振搖後放置過夜，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。依照薄層色譜法試驗，精密吸取上述兩種溶液各 1µl，分別交叉點於同一 TLC 薄層板上，以苯－醋酸乙酯(30：1)為展開劑，展開，取出，晾乾，照薄層色譜法進行螢光掃描，激發波長：λ＝365nm，測量供試品與對照品螢光強度積分值，計算，即得。本品含蛇床子素(C15H16 O 3)不得少於 1.0﹪. 4. 蛇床子及其混偽品芹菜子之鑑別 (1) 蛇床子為繖形科植物蛇床 Cnidum monnieri(L.)CUSSON 之乾燥成熟果實，在台灣有紅蘿蔔種子混雜其中，在大陸常有一種穗粒略小，外觀性狀十分相似之果實種子混在蛇床子中，或完全以該種子冒充蛇床子，經鑒定該種子為繖形科植物旱芹 Apium graveolens L. var. dulce DC 之乾燥成熟果實及芹菜子. 17.

(18) (2) 蛇床子與芹菜子之性狀鑑別市售蛇床子發現以偽品旱芹果實混雜其中，依張誌輝報告兩者性狀與鑑別如下(20)： A. 種子常數值之測定：靜止角靜止角：蛇床子 42°；芹菜子 39° 比重：蛇床子 0.263g/ml；芹菜子 0.481g/ml 千粒重：蛇床子 0.392g；芹菜子 0.385g. B. 現代鑑別水試法：將少量蛇床子投放盛有清水之燒杯中，蛇床子漂浮在水面，不下沉。芹菜子陸續下沉。. 因. 此兩者之混和品，可用水試法區分。 TLC：取樣品粉末 2g(60mesh)，於 flask 中加 ether 6ml 塞緊，冷浸 4hr，濾過，將濾液濃縮至乾，殘渣用氯仿溶解至 10ml, 並以 osthole 對照標準品點樣。展開劑：石油醚：乙酸乙酯(1：1). C. 組織顯微特徵：蛇床子： (a) 具五條翅狀果稜，形成不等分之五角形 (b) 中果皮具多層薄壁細胞 (c) 每條果核中間各有一個外勒形維管束，並有少數纖維 (d) 種皮為一列頹廢細胞，內含紅棕色物質. 18.

(19) 芹菜子: (a) 具五條突起果稜，形成近等分五角形 (b) 中果皮為數層薄壁細胞 (c) 與上相似 (d) 含黃色油脂. 5. 台灣芎藭(Cnidium formosanum YABE) 產地台灣。夏秋採全草，曬乾稱野芫荽。為強壯劑，治腰骨神經痛、陰痿。用量 4-75 公克。果稱蛇床子。. 19.

(20) 三、蛇床子之成分文獻考察. 1.揮發油蛇床子果實含揮發油 1.3 ﹪ ,其中主要成分為左旋蒎烯 (L-pinene) 、樟腦烯 (L-camphene). 、纈草酸龍腦酯. (bornyl-isovalerate)、異龍腦(isoborneol)、蛇床明素(cnidimine)及蛇床子素(osthole)等(21) 另從果實乙醇提取物中分離得到：異虎耳草素 (isopimpinellin) ，佛手內酯 (bergapten) 、二氫歐山芹醇 (columbianetin) 、當歸酸酯 (columbianaclin) 、圓當歸素 (archangelicin) 、蛇床定 (cnidiadin) 、 o- 乙醯二氫歐山芹素 (o-acetyl-columbianetin) 、 o- 異戊醯二氫歐山芹素 (o-isovaleryl-columbianetin)及 3’-異丁醯 -o-乙醯二氫歐山芹素 (3’-isobutyloxy-o-acetylcolumbianetin) (21). 2.香豆素類化合物(coumarins) 含歐前胡腦 (esthole) 、蛇床子素 (osthole) 、花椒毒內酯 (xanthotoxin)、異虎耳草素(isopimpinellin)、佛手內酯(bergapten)、歐芹屬素乙 (imperatorin) 、白芷素 (edultin) 、花椒毒酚 (xanthotoxol)、別歐芹素乙(alloimperatorine)等(21)。. 3.其他還含有棕櫚酸(palmitic acid)、β-sitosterol 及銅、錳、鋅等元素。. 20.

(21) 四、蛇床子及蛇床子素之藥理作用文獻考察. 1. 對呼吸系統之影響肺支氣管灌流實驗證明，給蛇床子素 15mg，5 分鐘後，即能增加豚鼠肺灌流量，其作用強於氨茶鹼，說明本品有較強的支氣管擴張作用。給豚鼠蛇床子總香豆素 200mg/kg，灌胃一次可使磷酸組織胺和氯化乙醯膽鹼所致豚鼠哮喘發作時間明顯延長。體外實驗證明，總香豆素 0.5mg/ml，對組織胺所致離體豚鼠氣管收縮有較強的拮抗作用。上述作用可被阻斷而對麻醉動物心率和血壓無影響，說明蛇床子總香豆素可能是選擇地興奮支氣管平滑肌上的β2 受體，產生解痙和止喘作用(22，23)。小鼠灌服蛇床子總香豆素 15mg/隻，能明顯增加酚紅排出量，說明本品具有較強的袪痰作用(23)。 2. 免疫抑制大鼠腹腔注射蛇床子素 50mg/kg 和 100mg/kg，能抑制天花粉所致大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒，抑制率為 56.40﹪和 78.60﹪，與對照組比較差異顯著(23)。於引喘前給豚鼠灌服蛇床子素 100 和 200mg/kg，均能明顯減少哮喘的發生率，說明有預防作用。體外實驗證明蛇床子素 20μg/ml 和 40μg/ml 時，和蛇床子總香豆素 20mg/ml 可以明顯對抗由慢反映物質所致的豚鼠回腸收縮。濃度在 5、10、20 和 30μg/ml 蛇床子素可明顯抑制 Schultz-Dale 反映，其抑制作用有劑量依賴關係。給小鼠一次灌服蛇床子素 100 mg 和 200mg 對小鼠被動皮膚過敏反應(PCA) 有較強的抑制作用 (23-24). 。. 21.

(22) 3. 抗心率失常給小鼠一次腹腔注射蛇床子水提取物 50g/kg，可預防氯仿所致心室性纖顫；一次靜脈注射 8.75g/kg，可明顯對抗大鼠心室性纖顫。在這一劑量下對烏頭鹼誘發的心率失常亦有預防與治療作用。蛇床子素有鈣拮抗劑活性，因此推論抑制鈣離子內流，可能是蛇床子抗心率失常的機理之一(25)。. 4. 抗病原微生物蛇床子流浸膏(1：2)在 37℃培養液中，經 17.5 分鐘將陰道滴蟲全部殺死(26)。顯微鏡下觀察，當滴入蛇床子素後滴蟲立即停止活動，而對照組可活動 1 小時以上。但也有人觀察蛇床子提取物在體外並無殺陰道滴蟲的作用(27)，但濃度為 1g/ml 的蛇床子浸出液，在培養基中稀釋倍數為 1：10 對絮狀表皮癬菌和石膏樣小芽胞菌有抑菌作用，在 1：20 時對羊毛樣小芽胞菌有抑菌作用 (28). 。對雞胚培養的病毒有一定抑制作用，對流感病毒有明顯抑制. 作用。. 5. 激素樣作用小鼠皮下注射蛇床子浸膏液 20mg/次，每日 1 次，連續 32 日，能延長交尾期，縮短交尾休期；對去勢雌性小鼠，以同樣劑量，連續給藥 21 日，出現交尾期，並能使子宮、卵巢重量增加。蛇床子醇提取物也有類似作用。以前列腺、精囊、提肛肌增加重量的方法證明：蛇床子提取物對小鼠也有雄性激素樣作用(29)。. 22.

(23) 6. 局部麻醉作用 100﹪蛇床子醇煎液可完全阻滯蟾蜍離體坐骨神經動作電位的產生，其強度與 10﹪普魯卡因相同。停藥後能恢復正常傳導功能。皮丘法實驗對豚鼠呈現一定浸潤麻醉效果，可被鹽酸腎上腺素所增強，但局部麻醉作用時間較 10﹪普魯卡因為短。對家兔進行椎管麻醉，1 分鐘內顯效，持續 15.3±9.2 分鐘。對兔眼角膜沒有表面麻醉作用。用豚鼠皮丘法試驗，蛇床子提取液 0.2ml 有一定浸潤麻醉作用，但局部麻醉作用較普魯卡因短。在提取液中加入微量腎上腺素後，不僅麻醉作用強度增強，局部麻醉持續時間也明顯延長(30)。. 7. 對學習記憶之影響依沈麗霞教授等以被動迴避、跳台及 Y 型水迷路實驗觀察蛇床子素對小鼠學習記憶的影響，結果顯示可改善記憶獲得、鞏固及方向辨別障礙，但對記憶再現無效(31)。. 23.

(24) 8. 抑制 B 型肝炎作用蛇床子素對於 B 型肝炎表面抗原以 MS-G2 及 HuH7 細胞培養，體外試驗具有抑制 B 型肝炎病毒之分泌，其作用機轉與增加 B 型肝炎表面抗原之糖化作用(glycostlation)有關(32)。. 9. 對兔陰莖海綿體鬆弛作用蛇床子素對於兔陰莖海綿體具有鬆弛作用，其作用機轉與釋放陰莖海綿體內皮細胞之 NO 有關，且係經由抑制 phosphodiesterase 而增加 cGMP 與 cAMP 所致(33)。. 10. 毒性 (1) 急性毒性：小鼠腹腔注射蛇床子提取液 20g/kg，半小時內小鼠活動減少，呈鎮靜作用，觀察 48 小時未見死亡；小鼠口服蛇床子總香豆素的 LD50 為 2.44±0.05g/kg(22)。 (2) 亞急性毒性：Wistar 大鼠灌服蛇床子總香豆素 60 mg/kg 和 140mg/kg，每日 1 次，連續 31 日，結果體重、血象、生化指數及主要臟器組織型態檢查均在正常範圍內與對照組比較無明顯差異(22)。. 24.

(25) 五、蛇床子之臨床應用. 1. 外陰騷癢用蛇床子、地膚子、苦參、花椒煎劑外洗，治療外陰濕癢症 500 例，總有效率 97.2﹪(34)。用蛇黃洗劑，蛇床子、黃柏、沒食子、枯礬外洗，治療 82 例，總有效率 100﹪(35)。. 2. 滴蟲性陰道炎用參百蛇洗劑：蛇床子、苦參、生百部煎汁 2000ml，薰洗坐浴，治療 56 例，總有效率 96﹪(36) 。用蛇床子、百部、苦參、枯礬煎液濃縮為 250ml 沖洗陰道，治療 156 例，有效率 100﹪(37)。. 3. 外陰部硬化萎縮性苔癬用蛇床子、青黛軟膏，每週塗 2~4 次，2 月為一療程，治療 82 例，兩個療程治癒率 75.61﹪(38)。. 4. 子宮頸麋爛用消糜栓：硼砂、蛇床子、川椒、枯礬、血竭等，陰道用藥，每次一粒，隔日 1 次，5~8 次為一療程，治療 524 例，總有效率 94﹪(39)。. 25.

(26) 5. 不育、不孕症 (1)蛇羊養精活血湯：蛇床子、淫羊藿、巴戟天、紅花等加減煎服，治療不育症 39 例，治癒率 92.36﹪(40)。 (2)十子六君湯：蛇床子、菟絲子、桑椹子、五味子、枸杞子、金櫻子、女貞子、覆盆子等煎服、治療缺無精子症 10 例，均全愈(41)。 (3)補腎活血胎孕湯：蛇床子、當歸、蓯蓉、益母草、菟絲子等煎服、治療不孕症 624 例，治癒率 49.20﹪(42)。. 6. 手足癬用蛇床子、黃精、丁香、白蒺藜煎汁 1500ml 浸洗，治療足癬 54 例，總有效率 98.15﹪(43)。用蛇床子、苦參、白鮮皮、生百部加減煎液外洗，每次浸泡 20~30 分鐘，每日 2 次，治療鵝掌風 90 例，總有效率 97﹪(44)。. 7. 溼疹溼疹散-蛇床子、密陀僧、白礬、大黃等研磨外敷，配合四黃三子湯：蛇床子、地膚子、蒼耳子、黃連、黃芩、大黃局部外洗，治療 512 例，治愈率 91.96﹪(45)。用苦蛇椒礬煎：蛇床子、苦參、白礬、川椒煎劑外洗、治療急性濕疹 104 例，有效率 100﹪(46)。用蛇床子軟膏治療嬰兒濕疹也有一定療效(47)。. 26.

(27) 8. 銀屑病用蛇床子、苦參、白鮮皮、地膚子、殭蠶、蜈蚣、荊芥等組方，治療 143 例，總有效率為 95.60﹪(48)。. 9. 哮喘及喘息性支氣管炎口服蛇床子總香豆素，80mg/日，每日一次，連續 3 日，治療 118 例，總有效率 87.3﹪(49)。用蛇床子、陳皮、半夏、細辛、五味子治療小兒支氣管哮喘 36 例，總有效率 96.2﹪(50)。. 27.

(28) 六、蛇床子素之結構與理化性質. 1.蛇床子素(osthole):於 1972 年日本學者 Hata 等從其果實中分離得到蛇床子素 (51),事實上,顏焜熒教授於 1959 年就從白芷 (Angelica dahurica BENTH. et HOOK var. formosana YEN)之根部分離得到，爾後顏焜熒教授又從台灣北部海濱採集濱當歸 (Angelica hirsutiflora LIU, CHAO et CHUANG) 之根部亦分離得到蛇床子素(52)。. 2. 蛇床子素之分離蛇床子藥材以乙醇抽取蛇床子素之效率最佳，且真空減壓分段蒸餾法較適合於純化取得蛇床子素(53)。 3.蛇床子素之性質(54) (1)化學名 7-methoxy-8-[3-methylpent-2-enyl] coumarin (2)結構式. o. H3CO. CH2CHC(CH3)2. (3)分子式及分子量分子式：C15H16O3 分子量：244.29. 28. o.

(29) (4)理化性質熔點：83-84℃ 沸點：145-150℃ 易溶於甲醇、乙醇，不溶於水。. 29.

(30) 第二節. 神經化學及內分泌與學習記憶之關係. 一、神經傳遞物質與學習記憶之關係：本所吳啟瑞博士等人，曾發表中藥增強學習記憶與神經傳. 遞物質之相關性 (55)。記憶是經過學習而獲得的經驗或行為的保持。學習記憶之基本過程，當外界之刺激訊息輸入後以致記憶形成，可分為學習獲得(acquisition)、記憶鞏固(consolidation)、及記憶再現(retrieval)三個階段 (56)而在形成過程一旦接受外界訊息之刺激，人體第一步反應使神經活性改變，使突觸前神經傳遞物質釋出。至於神經傳遞物質與學習記憶之關係，略述如下：. 1. Acetylcholine(Ach)與學習記憶關係：據 Drachman 及 Leavitt 1974 年發現年輕人在服用 acetylcholine 接受器拮抗劑 scopolamine 後，會產生類似老人癡呆症之進行性健忘症(anterograde amnesia)症狀(57)，又 Quartermain 及 Leo 發現大鼠給 scopolamine 後，可使腦內 Ach 神經消失，並會造成學習行為操作之障礙(58)，另 Worms 等發現乙醯膽鹼 M1 接受器之拮抗劑 pirenzepine (59)，Glicks 等發現乙醯膽鹼尼古丁接受器之拮抗劑 mecamylamine (60)，及 Walsh 等發現乙醯膽鹼神經毒素 AF64A (61) ，均會造成大鼠學習行為操作之障礙。因此，在增進學習記憶之能力，Ach 確具重要之參與角色。故本研究使用 scopolamine 等作為誘發學習獲得障礙之動物模式。. 30.

(31) 2. Norepinephrine 與學習記憶關係：據 Pisa 及 Fibiger 指出 norepinephrine 在空間性記憶能力及注意力扮演重要之角色(62)，在老年智能障礙患者，單胺類神經物質系統失衡為第二項較重要之因素，阿耳滋海默氏病人在藍斑區 (locus ceruleus) 之正腎上腺素 (norepinephrine) 之合成酵素 dopamine β-hydroxylase 有明顯減少，腦內正腎上腺素濃度及其代謝物濃度亦有減少(63)。據 Zis 等以 6-OHDA 破壞 nigro-striatal bundle，可造成主動迴避反應之操作障礙(64)，若將 striatum 區之神經損壞，可阻斷刺激 amygdala 區誘發之學習記憶能力增加現象(65)，當 amygdala 區給予β-接受器拮抗劑 propranolol 會造成學習的障礙，因此智能增進劑會被經 amygdala 區給予 propranolol 所阻斷(66)。. 3. Serotonin 與學習記憶關係：據 Arai 等人研究指出阿耳滋海默氏病人在腦部背側大縫核 (dorsal raphe nucleus)之血清素(serotonin)及其接受器密度有明顯減少(63)，但據 Essman 認為在脊椎動物之學習行為模式研究中， serotonin 扮演著負向性之角色 (67)，因此 serotonin 之釋出促進劑 p-chloroamphetamine 可增加中樞 serotonin 之活性而造成學習獲得障礙(68)。且蛋白質合成抑制劑 cycloheximide 誘發記憶鞏固障礙，主要是經由中樞 serotoninergic system 之活性以間接降低中樞 cholinergic system 之活性(69)。 5-HT 接受器在學習記憶亦扮演重要之角色，5-HT 1A 接受器致效劑 8-OH-DPAT 會造成學習記憶及工作記憶之障礙(70)，另當. 31.

(32) 以 serotoninergic neurotoxin 5,7-DHT 投在 neocortex亦可造成學習記憶損傷(71)。神經傳遞物質除 acetylcholine, norepinephrine 與 serotonin與學習記憶有關外，尚有興奮性胺基酸(excitatory amino acid)在參與神經可塑性之初期過程、腦部發展及學習記憶之過程扮演重要之角色；enkephalin 在學習記憶亦扮演重要角色；神經荷爾蒙在學習記憶過程之作用與單胺神經系統有密切關連；另外蛋白質合成亦為記憶鞏固過程之必要因素。. 32.

(33) 二、內分泌與學習記憶之關係： 1. 腎上腺與學習記憶關係依據 Bialik 等人於 1984 年研究報告指出大鼠在去腎上腺後會造成被動記憶障礙. (72). 。又 Adem 等人於 1994 年發現腎上腺摘. 除後會引起海馬迴中 dentate granule 及 CA1-4 區域中神經細胞的損失及死亡(73)，而造成學習記憶障礙。腎上腺皮質荷爾蒙 adrenocortical hormone(cortisol)之合成，係由下視丘所分泌之 gonadotropin releasing hormone(GnRH)刺激腦下垂體釋放 adrenocorticotropic hormone(ACTH)，最後刺激腎上腺皮質分泌 cortisol。當腎上腺摘除後，cortisol 的分泌量減少，在腎上腺摘除手術後 1-3 日即造成記憶的障礙，而記憶的障礙在腎上腺摘除手術後第 7 日才得到修復。因血中 ACTH 濃度在腎上腺摘除手術後第 3 日開始下降，在腎上腺摘除手術後第 7 日才回復正常水平(74)，所以 ACTH 關係著 corticosterone 及 aldosterone 的分泌，且干擾腎上腺兒茶酚胺(catecholamines)及醣類的變化 (75,76). ，進而影響記憶之機制。智能增進劑如 piracetam 會因腎上. 腺切除而阻斷其增強記憶之作用，但此現象可因給予 corticosterone 及 aldosterone 而恢復，因此發現 piracetam 之增強記憶作用與調控腎上腺分泌 corticosterone 及 aldosterone 有關 (74,77). 。因此本研究以大鼠去腎上腺作為誘發學習障礙之動物模. 式。. 33.

(34) 2.. Estrogen 與學習記憶關係. Estrogen 之合成係由下視丘之弓狀核(arcuate nucleus)所分泌之 gonadotropin releasing hormone(GnRH) 促使腦下垂體釋放 follicle-stimulating hormone(FSH)，再刺激卵巢分泌 estrogen 而來。estrogen 除了調節生殖系統生理作用外，在中樞神經系統亦扮演了相當重要的角色；且作用於學習記憶相關的神經傳遞路徑 (如下視丘、海馬迴)藉以影響著學習記憶。根據研究發現，去卵巢後的大鼠皮質及海馬迴之膽鹼乙醯轉胺?. (choline. acetyltransferase)活性降低(78)。故大鼠去卵巢後因 acetylcholine 及 estrogen 減少而造成工作記憶障礙. (79). ；另外，給予 estrogen 對於. 短暫性腦缺血時去卵巢大鼠的腦部具保護作用(80)；對於進入更年期的婦女採用 estrogen 替代療法，可增強認知和記憶的功能(81) 。 estrogen 具有保護腦部神經細胞作用，其作用機轉主要經由本身之血管性作用與神經生長因子(nerve growth factors)及神經生長因子接受器(trks)直接或間接保護腦部神經細胞(82,83)。另對於因 ß-amyloid protein、kainic acid 誘導繼發性神經凋亡，estrogen 具有抗細胞凋亡作用，其作用機轉主要是能增加抗凋亡蛋白 Bcl-xL 的合成(84)，並改變細胞傳遞物質如胞外信號調節? (extracellular signal-regulated kinase)等的表現(85)。因此本研究以大鼠去卵巢作為誘發學習障礙之動物模式。. 34.

(35) 第三章材料與方法第一節實驗材料. 一、蛇床子之抽提流程本研究材料蛇床子(Cnidii Fructus)購自欣隆藥行，經謝文全教授鑑定為繖形科植物蛇床Cnidium monnieri (L.)CUSSON之乾燥成熟果實。實驗抽提，先用甲醇萃取後再用石油醚萃取，迴流抽取四∼五次，每次約四小時，合併抽取液，經減壓濃縮乾燥後，得石油醚粗萃取物(簡稱CF)，萃取率為6.26﹪。. 二、實驗試劑 1. 蛇床子素 osthole(OST)購自山本製藥(日本)，以95﹪酒精溶解後，加入少許Tween 80後，再加水至需要濃度。. 2. 基本實驗試劑之製備：本實驗所使用試劑均購自Sigma(如一覽表)其製備如下： (1)SCOP, M- SCOP, PHEN, PROP 以saline溶解 (2)6-OHDA, 5,7-DHT 以saline(含0.5﹪vit C, 防止氧化)溶解 (3)AF64A 以NaNO2溶解後再以1N HCl調整pH至7.4 (4)YOH以0.2﹪酒精溶解. 35.

(36) 藥物全名 Scopolamine hydrobromide. 簡稱 SCOP. 作用機制 muscarinic receptor antagonist. Scopolamine methylbromide. M-SCOP 乙醯膽鹼週邊拮抗劑. 6-hydroxydopamine. 6-OHDA catecholaminergic. Ethylcholine aziridinium 5,7-dihydroxytryptamine. neurotoxin. AF64A cholinergic neurotoxin 5,7-DHT serotoninergic neurotoxin. Phenoxybenzamine. PHEN. 腎上腺素α 1 拮抗劑. Propranolol. PROP. 腎上腺素β拮抗劑. Yohimbine. YOH. 腎上腺素α 2 拮抗劑. 三、實驗動物本實驗採用行政院國科會國家實驗繁殖及研究中心所提供 Sprague-Dawley 系雄性或雌性大鼠，體重 220∼250 公克，飼養在空調的飼養室，溫度維持在 23±1℃，燈光控制採 12 小時亮 12 小時暗(08:00 燈亮、20:00 燈暗)，食物與水不予限制。. 36.

(37) 四、實驗儀器 1. 被動迴避學習之設備使用「條件反應測定裝置」(Muromachi Kikai Co. Ltd. Japan)，此裝置分成兩部分：實驗箱(Shuttle Box)係為一經中間閘門分隔為相同大小二室 (48 ×20 ×30cm) 的箱子及其控制器 (MCU-101 Controller，Muromachi Kikai Co. Ltd. Japan)；在實驗裝置處置上，於相同大小二室之其中一室上方置一 20W 之電燈泡，將相同大小二室區分為明暗二室，中以門閘控制，箱底設有間隔 2 ㎝平行排列的金屬桿(直徑 1.5 mm)，並接上電流器。. 2. 水迷宮之設備由一直徑 160 cm、高 50 cm、壁厚 15 mm 之不銹鋼水池及一個逃逸平台(直徑 11 cm、高 22 cm，當泳池充滿水時，置於水面下 1 cm 處)所組成，而且水溫需保持在 23 ± 1℃(86)。水池由電腦劃分為四個象限(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)，A、B、C 三個環(自圓心往壁緣依序為 A、B、C 環)如下圖所示. 37.

(38) Ⅰ 象限. Ⅱ 象限 C B A. Ⅲ 象限. Ⅳ 象限. 水迷宮實驗所使用之紀錄儀器： Columbus Instruments' VIDEOMEX-V. video. monitor(COLUMBUS. tracking ， Video. Camera ， Video. INSTRUMENTS. INTERNATIONAL. CORPORATION). 實驗所使用之軟體為 Columbus Instruments' Water Maze Program.. 38.

(39) 第二節實驗方法. 一、被動迴避學習反應實驗於實驗步驟上，先將大鼠置入明室，同時開啟閘門，以大鼠在90秒內進入暗室者，供做本實驗。訓練期：將篩選過之大鼠，置入明室，同時開啟閘門，待大鼠進入暗室後，關閉閘門，同時於底板通以電流(1 mA，2 sec)，待電刺激後5秒，自暗室取出大鼠，歸回飼養籠。測定期：於訓練後24小時，再將大鼠置入明室，同時並開啟閘門，記錄大鼠在明室之滯留時間(step-through latency，STL)。當於明室之滯留時間大於5分鐘(300秒)時，則稱大鼠之學習記憶能力正常(87)。誘發障礙物質：scopolamine(0.5 mg/kg，i.p.)(88). 二、水迷宮實驗本實驗利用 Morris Water Maze 來進行學習記憶測試 (89， 90)，其訓練過程如下：第一天至第三天前段：將泳池分成四個象限，逃逸平台固定置於第四象限的 B 區，而大鼠依序分別置入四個象限，每天訓練 4 次，每次 2 分鐘；若大鼠於 2 分鐘內即找到逃逸平台，讓大鼠休息 30 秒鐘後，抓出泳池休息 30 秒鐘，再進行下一次之訓練；但若大鼠於 2 分鐘尚未找到逃逸平台，則將大鼠抓到逃逸平台，休息 30 秒鐘後，抓出泳池休息 30 秒鐘，在進行下一次之訓練；共訓練 3 天，此三天稱之為「學習操作」(91)。 39.

(40) 第三天後段：於第三天訓練完 2-4 小時後，將逃逸平台自水面下取走，再將大鼠置於第一象限，連續測定 60 秒鐘，記錄大鼠於泳池內游泳之軌跡及於原逃逸平台所花之時間及游泳距離，此階段稱之為「參考記憶(reference memory)」(92)。第四天：於第四天再將逃逸平台置入第四象限並使其露出於水面 1 cm，訓練 4 次，稱之為「非空間性記憶(non-spatial memory)」 (91). 。第五天前段：於第五天將逃逸平台置於第二象限，加水使其. 沉入水面 1 cm，大鼠先置入第一象限，連續測定 120 秒鐘或至大鼠找到逃逸平台，稱之為「再學習(reacquisition)」(93)。第五天後段：第五天前段結束後休息 2-4 小時，再將大鼠先置入第三象限，亦連續測定 120 秒鐘或至大鼠找到逃逸平台，此稱之為「記憶再現(retrieval)」(93)。所有大鼠游泳之軌跡及實驗資料均由電腦自動記錄。第五天前段與後段總稱為「工作記憶 (working memory)」。. 三、去除腎上腺大鼠於訓練 5 天前，雄或雌性大鼠腹腔注射 sodium pentobarbital(45 mg/kg)麻醉後，去除兩側之腎上腺，待大鼠清醒後，歸回飼養籠。蛇床子石油醚粗抽物及其成分 osthole 或正對照組，於每天訓練前 30 分鐘腹腔注射給藥；或於訓練完成後測定前 30 分鐘腹腔注射給予，進行大鼠學習記憶能力之評估。. 40.

(41) 四、去除卵巢雌性大鼠於訓練 21 天前，雌性大鼠腹腔注射 sodium pentobarbital(45 mg/kg)麻醉後，去除卵巢，待大鼠清醒後，歸回飼養籠。蛇床子石油醚粗抽物及其成分 osthole 或正對照組，於每天訓練前 30 分鐘腹腔注射給藥；或於訓練完成後測定前 30 分鐘腹腔注射給予，進行大鼠學習記憶能力之評估。. 41.

(42) 第三節數據分析. 水迷宮空間性學習操作所獲得之 data，以 one -way repeated measures analysis of variance，各組之間以 Dunnet's test 來作分析；若 P 值小於 0.05 以下時，則認為有統計意義；其餘之水迷宮參考記憶暨工作記憶，所獲得之結果均以 Independent-Sample T Test，統計並分析其間差異之顯著性，凡 P 值小於 0.05 以下時，則認為有統計意義。而於被動迴避實驗，則以無母數分析法統計，先以 Kruskal-Wallis 單因子變異數分析各組間之變異數差異，再以 Mann-Whiteny U-test 檢定其間差異之顯著性，凡 P 值小於 0.05 以下時，則認為有統計意義。. 42.

(43) 第四章實驗結果一、蛇床子石油醚萃取層對雄性大鼠由 scopolamine 誘發被動迴避學習暨水迷宮學習操作之影響於訓練前 30 分鐘腹腔注射給予 scopolamine 0.5 mg/kg，將造成雄性大鼠在被動迴避學習操作之障礙；當蛇床子石油醚萃取層於訓練前 60 分鐘口服給予時，在 0.1∼0.6 g/kg 劑量下可明顯改善 scopolamine 誘導之被動迴避學習操作障礙(如圖 1)。而在水迷宮之學習操作實驗中，於每日學習操作前 30 分鐘腹腔注射給予 scopolamine 0.5 mg/kg，亦可造成雄性大鼠在水迷宮學習操作之障礙；當蛇床子石油醚萃取層於訓練前 60 分鐘口服給予時，在 0.05∼0.6 g/kg 劑量下可明顯改善 scopolamine 誘導之水迷宮學習操作障礙(如圖 2). 43.

(44) 300. (12) ###. Step-through latency (sec). (8) 200. ###. ###. (8). (8). (8). 100 *** (8) 0. VEH. VEH. 0.05. 0.1. 0.3. 0.6. CF (g/kg) SCOP 0.5 mg/kg Fig 1. Effect of petroleum ether fraction of Cnidii Fructus (CF)on impairment of passive avoidance performance induced by SCOP with high stimulus (1 mA, 2 sec) footshock in male rats. *** P<0.001 compared with VEH group. ### P<0.001 compared with VEH/SCOP group.. 44.

(45) 120. VEH SCOP CF 0.05 g/kg + SCOP CF 0.1 g/kg + SCOP CF 0.3 g/kg + SCOP CF 0.6 g/kg + SCOP. Swimming Time (sec). 100. *** *** ***. 80. *** *** *** ***. 60. 40. *** *** *** ***. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 2. Effect of petroleum ether fraction of Cnidii Fructus (CF) on impairment of water maze performance induced by SCOP in male rats.***P<0.001 compared with SCOP group.. 45.

(46) 二、蛇床子石油醚萃取層改善學習記憶與週邊神經之關係 1. 週邊乙醯膽鹼拮抗劑 M-SCOP 對蛇床子石油醚萃取層改善學習記憶之影響. 蛇床子石油醚萃取層在雄性大鼠學習記憶障礙改善作用之週邊機轉進行探討。首先選擇乙醯膽鹼週邊拮抗劑 scopolamine methylbromide(M-SCOP)做為併用藥物，以探討週邊乙醯膽鹼神經系統在蛇床子石油醚萃取層改善雄性大鼠於被動迴避學習操作障礙之角色。乙醯膽鹼週邊拮抗劑 scopolamine methylbromide(0.5 mg/kg)於訓練前 30 分鐘腹腔注射給予雄性大鼠，本身並不會造成學習記憶之障礙。在本研究乙醯膽鹼週邊拮抗劑 M-SCOP 亦不會造成雄性大鼠被動迴避學習操作障礙，同時對訓練前 60 分鐘口服給予 0.1 g/kg 蛇床子石油醚萃取層之改善學習障礙作用亦不具阻斷作用(如圖 3)。顯示蛇床子石油醚萃取層之改善學習障礙作用與週邊乙醯膽鹼神經系統無關。. 46.

(47) 300. (12). (8). Step-through latency (sec). NS (8) 200 (8). 100 *** (8) 0. VEH. VEH. CF. VEH. CF+SCOP. SCOP 0.5 mg/kg M-SCOP 0.5 mg/kg Fig 3. Effect of scopolamine methylbromide (M-SCOP, 0.5 mg/kg) on the reversal from SCOP-induced impairment of passive avoidance performance treated with petroleum ether fraction of Cnidii Fructus(CF 0.1 g/kg) in male rats. *** P<0.001 compared with VEH group.NS:Not significant.. 47.

(48) 2. 週邊 catecholamine 神經毒素 6-OHDA 對蛇床子石油醚萃取層改善學習記憶之影響. 選擇週邊交感神經毒素 6-hydroxydopamine(6-OHDA)做為併用藥物，探討週邊 catecholamine 神經系統在蛇床子石油醚萃取層改善雄性大鼠於被動迴避學習操作障礙之角色。週邊交感神經毒素 6-OHDA〈25 mg/kg〉於訓練前一天靜脈注射給予雄性大鼠，本身並不會造成學習記憶之障礙。在本研究週邊交感神經毒素 6-OHDA 亦不會造成雄性大鼠被動迴避操作障礙，同時對訓練前 60 分鐘口服給予 0.1 g/kg蛇床子石油醚萃取層之改善學習障礙作用亦不具阻斷作用〈如圖 4〉。顯示蛇床子石油醚萃取層之改善學習障礙作用與週邊 catecholamine 神經系統無關。. 48.

(49) (12). (8). 300. Step-through latency (sec). NS 200 (8) (8) 100 *** (8) 0. VEH. VEH. CF. VEH. CF+SCOP. 6-OHDA 25 mg/kg SCOP 0.5 mg/kg Fig 4. Effect of 6-hydroxydopamine (6-OHDA, 25 mg/kg, i.v.) on the reversal from SCOP-induced impairment of passive avoidance performance treated with petroleum ether fraction of Cnidii Fructus (CF 0.1g/kg) in male rats.*** P<0.001 compared with VEH group. NS:Not significant.. 49.

(50) 三、腎上腺去除對蛇床子石油醚萃取層改善學習記憶之關係本研究繼續採腎上腺切除方式，以探討腎上腺在蛇床子石油醚萃取層改善雄性大鼠於被動迴避學習操作障礙之角色。雄性大鼠經腎上腺切除後於 5∼7 天，因 ACTH 之迴饋增加，故不影響其學習操作能力。本研究採雄性大鼠腎上腺切除後 5 天進行學習操作能力之評估，亦發現不會造成雄性大鼠被動迴避學習操作障礙，但對訓練前 60 分鐘口服給予 0.1 g/kg 蛇床子石油醚萃取層之改善學習障礙作用則具部分阻斷作用(P<0.01, 如圖 5〉。顯示蛇床子石油醚萃取層之改善學習障礙作用與腎上腺系統有關。. 50.

(51) (12). Step-through latency (sec). 300. aa p<0.01 200 (8) ### 100 *** (8) 0. VEH. VEH. CF. Intact rats. *** (8). (8) aa. VEH. CF. ADX rats. SCOP 0.5 mg/kg Fig 5. Effect of petroleum ether fraction of Cnidii Fructus(CF 0.1g/kg) on impairment of passive avoidance performance induced by SCOP with high stimulus (1 mA, 2 sec) footshock in intact or ADX male rats.*** P<0.001 compared with VEH group. ###P<0.001 compared with VEH/SCOP group. aa P<0.01 compared with SCOP/CF intact group.. 51.

(52) 四、蛇床子石油醚萃取層對雌性大鼠由 scopolamine 誘發被動迴避學習暨水迷宮學習操作之影響以 scopolamine(SCOP 0.5 mg/kg)誘發雌性大鼠在被動迴避學習操作之障礙；當蛇床子石油醚萃取層於訓練前 60 分鐘口服給予時，僅在 0.3 g/kg 劑量下可明顯改善 SCOP 誘導之被動迴避學習操作障礙〈如圖 6〉。而在水迷宮之學習操作實驗中，於每日學習操作前 30 分鐘腹腔注射給予 SCOP 0.5 mg/kg，亦可造成雌性大鼠在水迷宮學習操作之障礙；當蛇床子石油醚萃取層於訓練前 60 分鐘口服給予時，在 0.3∼0.6 g/kg 劑量下可明顯改善 SCOP 誘導之水迷宮學習操作障礙〈如圖 7〉。當雌性大鼠於被動迴避學習暨水迷宮學習操作模式評估後，所有雌性大鼠抽血以測定血中 estradiol 及 progesterone 之濃度，結果發現給予 SCOP 之雌性大鼠血中 estradiol 的濃度遠低於正常鼠；而服用蛇床子石油醚萃取層之雌性大鼠可使血中 estradiol 之濃度恢復至與正常鼠相當；但對 progesterone 則均不影響〈如圖 8〉。. 52.

(53) (12). Step-through latency (sec). 300. ** (8). 200. 100 (8). 0. VEH. VEH. (8). 0.3. 0.6. CF (g/kg) SCOP 0.5 mg/kg Fig 6. Effect of petroleum ether fraction of Cnidii Fructus (CF ) on impairment of passive avoidance performance induced by SCOP with high stimulus (1 mA, 2 sec) footshock in female rats. ** P<0.01 compared with VEH/SCOP group.. 53.

(54) Swimming Time (sec). 120. VEH SCOP CF 0.3 g/kg + SCOP CF 0.6 g/kg + SCOP. 90. 60. ** ** ** **. 30. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 7. Effect of petroleum ether fraction of Cnidii Fructus (CF) on impairment of water maze performance induced by SCOP in female rats. **P<0.01 compared with SCOP group.. 54.

(55) Estradiol Progesterone. 75. Concentration (pg/ml). 60. **. *. **. 45. 30. ##. 15. 0 VEH. VEH. 0.3. 0.6. CF (g/kg) SCOP 0.5 mg/kg Fig 8. Effect of petroleum ether fraction of Cnidii Fructus (CF) in combination with SCOP on the levels of plasma estradiol and progesterone in female rats. * P<0.05, ** P<0.01 compared with VEH/SCOP group. ## P<0.01 compared with VEH group.. 55.

(56) 五、卵巢去除對蛇床子石油醚萃取層在被動迴避學習操作之影響卵巢切除造成雌性大鼠停經之動物模式，卵巢切除後之雌性大鼠其被動迴避學習能力明顯出現障礙；蛇床子石油醚萃取層僅 0.6 g/kg 可改善被動迴避學習操作障礙之現象〈如圖 9〉。至於，其血中 estradiol 之濃度則低於本研究所用檢測方法之檢測範圍。. 56.

(57) Step-through latency (sec). 300. (12). 200 * (8) 100 (8). (8). VEH. 0.3. 0 Sham. 0.6. CF (g/kg) OVA Fig 9. Effect of petroleum ether fraction of Cnidii Fructus (CF) on impairment of passive avoidance performance with high stimulus (1 mA, 2 sec) footshock in ovariectomized (OVA)female rats. * P<0.05 compared with VEH/OVA group.. 57.

(58) 六、蛇床子素對卵巢切除後在水迷宮學習記憶之影響我們對蛇床子油溶性主要成分 osthole 在雌性大鼠暨卵巢切除後之停經大鼠進行學習操作能力之評估；同時並探討 osthole 週邊給藥與中樞給藥作用之差別，以期瞭解 osthole 之作用。本研究發現卵巢切除後之停經大鼠在水迷宮之學習操作能力亦明顯出現障礙；當 3, 10 mg/kg osthole 於訓練前經皮下注射給予卵巢切除後之停經大鼠時，可明顯改善水迷宮中學習操作能力障礙之現象(如圖 10)。而在游泳第五天更換浮板位置後之工作性記憶評估中，3, 10 mg/kg osthole 於訓練前經皮下注射僅可改善記憶再現能力，而對再學習過程則不影響，但對記憶再現有改善(如圖 11)。其次，若 osthole (10, 30 µg/brain)經腦室給藥可改善 SCOP 對雌性大鼠在水迷宮之學習操作障礙(如圖 12)，但對再學習及記憶再現不具改善作用(如圖 13)。同時對卵巢切除後停經大鼠之水迷宮中學習操作能力障礙現象亦具改善作用(如圖 14)。至於在工作性記憶方面，osthole(10, 30 µg/brain)經腦室給藥僅可改善再學習過程，而對記憶再現能力則不影響(如圖 15)。綜合上述之研究結果，蛇床子油溶性主要成分 osthole 不論週邊給藥或中樞給藥均具增強雌性大鼠水迷宮學習操作能力之作用，亦可改善卵巢切除後停經大鼠水迷宮學習操作能力障礙之現象。. 58.

(59) 120. VEH OVA OST 3 mg/kg + OVA OST 10 mg/kg + OVA. Swimming Time (sec). 100. 80. 60. 40. ** ** ** **. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 10. Effect of osthole (OST 3 and 10 mg/kg, s.c.) on impairment of water maze performance in ovariectomized(OVA) female rats. ** P<0.01 compared with OVA group.. 59.

(60) 40 30 ### ###. Time to target (sec). 50. Sham OVA OST 3 mg/kg OST 10 mg/kg. **. 60. 20 10 0 Reacquisition. Retrieval Fig 11. Effect of osthole (OST 3 and 10 mg/kg, s.c.) on reacquisition and retrieval of water maze in ovariectomized(OVA) female rats. ** P<0.01 compared with sham group, ### P<0.001 compared with OVA group.. 60.

(61) 120. VEH SCOP OST 10 µg + SCOP OST 30 µg + SCOP. Swimming Time (sec). 100. 80. 60. 40. ** **. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 12. Effect of osthole (OST 10, 30 µg/brain, i.c.v.) on swimming time to target on the hidden platform of water maze in female rats. ** P<0.01 compared with SCOP group.. 61.

(62) 120. VEH SCOP OST 10 µg + SCOP OST 30 µg + SCOP. Time to target (sec). 90. 60. 30. 0 Reacquisition. Retrieval. Fig 13. Effect of osthole (OST 10, 30 µg/brain, i.c.v.) on reacquisition and retrieval of water maze in female rats.. 62.

(63) 120 Sham VEH + OVA OST 10 µg + OVA OST 30 µg + OVA. Swimming Time (sec). 100. 80. 60. **. ** **. 40. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 14. Effect of osthole (OST 10, 30 µg/brain, i.c.v.) on swimming time to target on the hidden platform of water maze in ovariectomized(OVA) female rats. ** P<0.01 compared with sham group.. 63.

(64) 150. VEH OST 10 µg + OVA OST 30 µg + OVA. Time to target (sec). 120. 90. 60. 30. ***. 0 Reacquisition. Retrieval Fig 15. Effect of osthole (OST 10, 30 µg/brain, i.c.v.) on reacquisition and retrieval of water maze in ovariectomized(OVA) female rats. ***P<0.001 compared with VEH group.. 64.

(65) 七、蛇床子素改善學習記憶與中樞神經系統之關係 1. 蛇床子素對中樞膽鹼神經毒素 AF64A 誘發水迷宮學習記憶障礙之影響針對 osthole 在雄性大鼠學習記憶障礙改善作用之中樞機轉進行探討。首先選擇神經毒素 AF64A 做為併用藥物，以探討中樞膽鹼系統在 osthole 改善大鼠水迷宮學習操作障礙之角色。結果發現，在 AF64A(3µg/brain)於訓練前 10 天腦室給藥，學習操作能力明顯出現障礙，而在學習操作前腦室給予 osthole(10µg) 並不具有改善學習障礙作用(如圖 16)；進一步探討參考記憶與工作記憶，圖 17、圖 18 顯示給予 AF64A 在參考記憶與工作記憶明顯出現學習操作能力障礙，而 osthole 並不具有改善的作用。由此可知，osthole 改善學習障礙作用與中樞膽鹼神經系統無關。. 65.

(66) VEH AF64A OST 10 µg - AF64A. 120. ** **. Swimming Time (sec). 100. **. NS 80. NS 60. 40. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 16. Effect of osthole(OST 10µg/brain, i.c.v.) on impairment of water maze performance induced by AF64A. **P<0.01 compared with VEH group. NS: Not significant.. 66.

(67) Time spent in target (sec). 15. 12 VEH AF64A OST 10 µg + AF64A. 9 NS 6. 3. 0 VEH. VEH. OST 10. AF64 A (3 µg/brain) Fig 17. Effect of osthole(OST 10µg/brain, i.c.v.) on reference memory of water maze induced by AF64A. NS: Not significant.. 67.

(68) 120. NS. VEH AF64 A OST 10 µg + AF64 A. NS. Time to target (sec). 90. 60. 30. 0 Reacquisition. Retrieval. Fig 18. Effect of osthole(OST 10µg/brain, i.c.v.) on reacquisition and retrieval of water maze induced by AF64A. NS: Not significant.. 68.

(69) 2. 蛇床子素對中樞血清素神經毒素 5,7- DHT 誘發水迷宮學習記憶障礙之影響選用血清素神經毒素 5,7- DHT 做為併用藥物，以探討中樞血清素神經系統在 osthole 改善大鼠水迷宮學習操作障礙之角色。結果發現，在 5,7- DHT (25µg/brain)於訓練前 14 天腦室給藥，學習操作能力明顯出現障礙，而在學習操作前腦室給予 osthole(10µg)不具改善學習障礙作用(如圖 19)；進一步探討參考記憶與工作記憶，圖 20、圖 21，顯示給予 5,7- DHT 在參考記憶與工作記憶明顯出現學習操作能力障礙，而給予 osthole 不具改善的作用。由此可知，osthole 改善學習障礙作用與中樞血清素神經系統無關。. 69.

(70) VEH VEH+5,7-DHT OST 10 µg + 5,7-DHT. 120. Swimming Time (sec). 100. NS. 80. NS. 60. 40. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 19. Effect of osthole(OST 10µg/brain, i.c.v.) on impairment of water maze performance induced by 5,7-DHT. NS: Not significant.. 70.

(71) Time spent in target (sec). 15. 12 VEH VEH + 5,7-DHT OST 10 µg + 5,7-DHT. 9. 6. NS. 3. 0 VEH. VEH. OST 10. 5,7-DHT (25 µg/brain) Fig 20. Effect of osthole(OST 10µg/brain, i.c.v.) on reference memory of water maze induced by 5,7-DHT. NS: Not significant.. 71.

(72) NS. NS VEH 5,7-DHT OST 10 µg - 5,7-DHT. 120. Time to target (sec). 90. 60. 30. 0 Reacquisition Retrieval Fig 21. Effect of osthole(OST 10 µg/brain i.c.v.) on reacquisition and retrieval of water maze induced by 5,7-DHT. NS: Not significant.. 72.

(73) 3. 蛇床子素對中樞 catecholamine 神經毒素 6-OHDA 誘發水迷宮學習記憶障礙之影響以 catecholamine 神經毒素 6-OHDA 做為併用藥物，以探討中樞 catecholamine 神經系統在 osthole 改善大鼠水迷宮學習操作障礙之角色。結果發現，在 6-OHDA (25µg/brain)於訓練前 14 天腦室給藥，學習操作能力明顯出現障礙，而在學習操作前腦室給予 osthole(10µg)能夠明顯改善學習障礙作用(如圖 22)；進一步探討參考記憶與記憶再現，圖 23、圖 24，顯示給予 6-OHDA 在參考記憶與記憶再現明顯出現學習操作能力障礙，而給予 osthole 有明顯的改善作用。由此可知，osthole 改善學習障礙作用與 catecholamine 神經系統有關。. 73.

(74) VEH 6-OHDA OST 10 µg + 6-OHDA. 120. Swimming Time (sec). 100. 80. 60. **. *. 40. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days. Fig 22. Effect of osthole(OST 10 µg/brain, i.c.v.) on impairment of water maze performance induced by 6-OHDA. *P<0.05, **P<0.01 compared with 6-OHDA group.. 74.

(75) Time spent in target (sec). 15. VEH 6-OHDA OST 10 µg + 6-OHDA. 12. # P<0.05. 9. #. 6 **. 3. 0 VEH. VEH. OST 10. 6-OHDA (25 µg/brain) Fig 23. Effect of osthole(OST 10 µg/brain, i.c.v.) on reference memory of water maze induced by 6-OHDA. **P<0.01 compared with VEH group. #P<0.05 compared with 6-OHDA group.. 75.

(76) VEH 6-OHDA OST 10 µg + 6-OHDA. P<0.01 120. P<0.01. *** ***. ##. 60. ##. Time to target (sec). 90. 30. 0 Reacquisition. Retrieval Fig 24. Effect of osthole(OST 10 µg/brain, i.c.v.) on reacquisition and retrieval of water maze induced by 6-OHDA. ***P<0.001 compared with VEH group. ##P<0.01 compared with 6-OHDA group.. 76.

(77) 4. 蛇床子素對中樞腎上腺素β拮抗劑 propranolol 誘發水迷宮學習記憶障礙之影響. 選用腎上腺素β拮抗劑 propranolol(PROP)做為併用藥物，以探討中樞腎上腺素β接受器在 osthole 改善大鼠水迷宮學習操作障礙之角色。結果發現，在 PROP (80ng/brain)於訓練前雙側海馬迴給藥，學習操作能力明顯出現障礙，而在學習操作前腦室給予 osthole(10µg)不具改善學習障礙作用(如圖 25)；進一步探討參考記憶與工作記憶，圖 26、圖 27，顯示給予 PROP 在參考記憶與工作記憶明顯出現學習操作能力障礙，而給予 osthole 不具有改善的作用。由此可知，osthole 改善學習障礙作用與中樞腎上腺素β接受器無關。. 77.

(78) VEH PROP OST 10 µg + PROP. 120. Swimming Time (sec). 100. 80. NS 60. 40. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 25. Effect of osthole(OST 10 µg/brain, i.c.v.) on impairment of water maze performance induced by PROP. NS: Not significant.. 78.

(79) Time spent in target (sec). 15. 12 VEH PROP OST 10µg + PROP. 9. 6. NS. 3. 0 VEH. VEH. OST 10. PROP (80 ng/brain) Fig 26. Effect of osthole(OST 10 µg/brain, i.c.v.) on reference memory of water maze induced by PROP. NS: Not significant.. 79.

(80) VEH PROP OST 10 µg + PROP. NS 120. NS. Time to target (sec). 90. 60. 30. 0 Reacquisition Retrieval Fig 27. Effect of osthole(OST 10 µg/brain, i.c.v.) on reacquisition and retrieval of water maze induced by PROP. NS: Not significant.. 80.

(81) 5. 蛇床子素對中樞腎上腺素α2 拮抗劑 yohimbine 誘發水迷宮學習記憶障礙之影響. 用腎上腺素α2 拮抗劑 yohimbine(YOH)做為併用藥物，以探討中樞腎上腺素α2 接受器在 osthole 改善大鼠水迷宮學習操作障礙之角色。結果發現，在 YOH (80ng/brain)於訓練前雙側海馬迴給藥，學習操作能力明顯出現障礙，而在學習操作前腦室給予 osthole(10 µg)不具改善學習障礙作用(如圖 28)；進一步探討參考記憶與工作記憶，圖 29、圖 30，顯示給予 YOH 在參考記憶與工作記憶明顯出現學習操作能力障礙，而給予 osthole 不具改善作用。由此可知，osthole 改善學習障礙作用與中樞腎上腺素α 2 接受器無關。. 81.

(82) VEH YOH OST 10 µg + YOH. 120. NS. Swimming Time (sec). 100. NS. 80. 60. 40. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 28. Effect of osthole(OST 10 µg/brain, i.c.v.) on impairment of water maze performance induced by YOH. NS: Not significant.. 82.

(83) Time spent in target (sec). 15. VEH YOH OST 10 µg + YOH. 12. 9. NS. 6. 3. 0 VEH. VEH. OST 10. YOH (80 ng/brain) Fig 29. Effect of osthole(OST 10µg/brain, i.c.v.) on reference memory of water maze induced by YOH. NS: Not significant.. 83.

(84) NS 120. VEH YOH OST 10 µg + YOH. NS ***. Time to target (sec). 90. 60. 30. 0 Reacquisition Retrieval Fig 30. Effect of osthole(OST 10 µg/brain, i.c.v.) on reacquisition and retrieval of water maze induced by YOH. ***P<0.001 compared with VEH group. NS: Not significant.. 84.

(85) 6. 蛇床子素對中樞腎上腺素α1 拮抗劑 phenoxybenzamine 誘發水迷宮學習記憶障礙之影響以腎上腺素α1 拮抗劑 phenoxybenzamine(PHEN)做為併用藥物，以探討中樞腎上腺素α1 接受器在 osthole 改善大鼠水迷宮學習操作障礙之角色。結果發現，在 PHEN (80ng/brain)於訓練前雙側海馬迴給藥，學習操作能力明顯出現障礙，而在學習操作前腦室給予 osthole(10µg)能夠明顯改善學習障礙作用(如圖 31)；進一步探討參考記憶與工作記憶，圖 32、圖 33，顯示給予 PHEN 在參考記憶與工作記憶明顯出現學習操作能力障礙，而給予 osthole 有明顯改善的作用。由此可知，osthole 改善學習障礙作用與中樞腎上腺素 α1 接受器有關。. 85.

(86) VEH PHEN OST 10 µg - PHEN. 120. Swimming Time (sec). 100. 80. ## 60. ## 40. 20. 0 0. 1. 2. 3. 4. Days Fig 31. Effect of osthole(OST 10µg/brain, i.c.v.) on impairment of water maze performance induced by PHEN. ##P<0.01 compared with PHEN group.. 86.

(87) Time spent in target (sec). 15 VEH PHEN OST 10 µg + PHEN. 12. P<0.01 9 ## 6. 3 *** 0 VEH. VEH. OST 10. PHEN (80 ng/brain) Fig 32. Effect of osthole(OST 10µg/brain, i.c.v.) on reference memory of water maze induced by PHEN. ***P<0.001 compared with VEH group. ##P<0.01 compared with VEH/PHEN group.. 87.

(88) P<0.01. 120. VEH PHEN OST 10 µg + PHEN. ***. P<0.01 ***. Time to target (sec). 90. 60 ## ## 30. 0 Reacquisition Retrieval Fig 33. Effect of osthole(OST 10µg, i.c.v.) on reacquisition and retrieval of water maze induced by PHEN. ***P<0.001 compared with VEH group. ##P<0.01 compared with PHEN group.. 88.