第㆔章 實驗之部
第㆒節 實驗材料
㆒、實驗動物
本 研 究 採 用 的 動 物 為 ㆗ 國 醫 藥 學 院 之 動 物 ㆗ 心 所 提 供 Sprague-Dawley（SD）系雄性大鼠，體重約 180~250 g。
㆓、實驗試藥
1. 血液生化值測定試劑：
TG kit (Randox, Cat. No. : TR213)
Cholesterol kit (Randox, Cat. No. : CH201) HDL kit (Randox, Cat. No. : CH2652) LDL kit (Randox, Cat. No. : CH2657) UREA kit (Randox, Cat. No. : UR446) AST kit (Randox, Cat. No. : AS483) ALT kit (Randox, Cat. No. : AS485) CK kit (Randox, Cat. No. : CK335)
Creatinine reagent (Bayer, Cat. No. : 231141)
Alkaline phosphatase reagent (Raichem, Order No. : 83065) LDH-L reagent (Raichem, Order No. : 82045)
2. Guanidium thiocyante (Sigma) 3. N-laurolsarosin natriumsalz (Merck) 4. Tri-sodium citrate dihydrate (Merck) 5. 2-mecaptoethanol (Sigma)
6. Phenol (USB)
7. Chloroform (Merck) 8. Isoamylalcohol (Merck) 9. Sodium acetate (Merck) 10. 2-propanol (Merck)
11. Diethyl pyrocarbonate (Merck) 12. OligotexTM (QIAGEN)
13. Tris(hydroxymeyhyte)-aminomethane (Merck) 14. Sodium chloride (Merck)
15. Glycerol (Merck)
16. Sodium dodecyl sulfate (Merck) 17. Hexanucleotide Mix (Roche)
18. dATP、dTTP、dCTP、dGTP (Boehringer Mannheim) 19. Dig-11-2’-deoxy-uridine-5’-triphosphate (Roche) 20. RnaseOUTTM (Gibco BRL)
21. SuperscriptTM RT II (Gibco BRL) 22. Sodium hydroxy (Merck)
23. Acetic acid (Merck) 24. Ethanol (Merck)
25. Ultrahyb solution (Ambion)
26. Salmon sperm DNA (STEATAGENE) 27. Poly-A (GENSET OLIGOS)
28. Human Cot-1 DNA (Gibco BRL) 29. Blocking buffer (Roche)
30. Dextran sulfate (Merck) 31. BSA (Sigma)
32. Polyethylene glycol 8000 (Sigma) 33. Anti-digoxigenin-AP (Roche)
34. Fast Red TR/AS-MX Substrate kit (PERBIO) 35. Ethylenediaminetetraacetic acid (Merck) 36. Poly-dt (PURIGO BIOTECH, INC.) 37. Taq polymerase (ABgene)
38. Brome phenol blue (life science, USB) 39. Potassium chloride (Merck)
40. Magnesium chloride (Merck) 41. Sdium citrate (Merck)
42. Acrylamide (MDBio, Inc.)
43. N,N,N’,N’-tetramethylethylenediamine
㆔、實驗儀器
1. 溫度、溼度控制箱，濕阻證動物造型箱
2. 全自動生化分析儀（Roche 公司 COBAS MIRA）
3. 高速冷凍離心機（Backman GS-6R）
4. 掃描器（UMAX PowerLook 3000）
5. DNA 打點機（DNA Arrayer 06H24；Wittech Co , Taiwan）
6. UV light machine（DOC-008.XD, Uvltec limited）
7. 均質機（PT 3100；POLYTRON®）
8. 分光光譜儀（DU®640B, BECKMAN COULTER）
9. PCR machine（PTC-100）
10. 電泳槽（Embi Tec）
11. 恆溫水浴槽（ZC-4000, Zeta）
12. 恆溫乾浴槽（Violet BioSciences, Inc.）
13. 震盪器（OS701）
14. PH 校正器（6171）
㆕、實驗器材
1. 2.5 ml 注射針筒 2. 5 ml 採血管 3. 14 ml 均質管
4. 1.5 ml ependorph tube 5. 2 ml ependorph tube 6. 血清瓶
7. 燒杯 8. 攪拌磁石 9. 量筒
10. 雜交袋（萊富）
五、藥品配製
（1）Solution A：
表：Solution A 配方
成分 體積 Guanidium thiocyante 236.4 g N-laurolsarosin natriumsalz 2.5 g Tri-sodium citrate dihydrate 3.675 g 2-mecaptoethanol 3.6 ml Total volume 500 ml
先將其所使用的血清瓶滅菌，並稱取其前㆔個成分，再加入約 1/3 的 DEPC 水，再等微溶後加入 DEPC 水至 total volume，置 於 42℃震盪使之溶解，最後在加入 2-mecaptoethanol，然後避
（2）20X SSC（Sodium chloride and sodium citrate）：
取175.3 g NaCl 和 88.2 g sodium citrate 溶於 800 ml 水㆗，加入 10 N NaOH 調整 PH 值至 7.0，再加水至 1000 ml。
（3）10﹪Sodium dodecyl sulfate（SDS）緩衝液：
取100 g SDS 溶於 900 ml 水㆗，加熱到 68℃溶解，加入濃鹽酸，
PH 值至 7.2，再加水至 1000 ml。
（4）Liner polyacrylamide（LPA, 10 µg/µl）：
表：LPA 配方
成分 體積 Tris-HCl（1M, pH 7.8） 40 µl NaOAc（2M） 10 µl EDTA（0.5M） 2 µl 10﹪ammonium persulfate 10 µl TEMED 1 µl Acrylamide 50 mg H2O 937 ml Total volume 1 ml
將其配方混合均勻後，在室溫㆘靜置聚合 30 分鐘，在加入
ethanol 2.5 ml，並離心 10 分鐘（4℃, 14000 rpm），產生白色沉 澱物，然後再加入 70﹪ethanol 2 ml 清洗，吸乾㆖澄液留㆘白色 沉澱物，最後加入 5 ml H2O 溶解。
（5）TB buffer：
表：TB buffer 配方
成分 體積 Tris-HCl（1M） 2.4 ml NaCl（5M） 8 ml H2O 240 ml Total volume 250.4 ml
（6）Blocking buffer 表：Blocking buffer 配方
成分 體積 TB buffer 90 ml Liquid block 10 ml
Total volume 100 ml
（7）OEB buffer 表：OEB buffer 配方
成分 體積 Tris-HCl（1M） 5 µl DEPC H2O 1 ml
Total volume 1 ml
（8）OW2 buffer 表：OW2 buffer 配方
成分 體積 Tris-HCl（1M） 2 ml NaCl（5M） 6 ml EDTA（0.5M） 400 µl DEPC H2O 191.6 ml
Total volume 200 ml
（9）OBB buffer 表：OBB buffer 配方
成分 濃度 Tris-HCl（pH 7.5） 20 mM NaCl 1 M EDTA 2 mM SDS 0.2 ﹪
