中草藥萃取物之抗微生物研究 彭?皓、蔡明勳
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摘 要
由於越來越多有致病力與傳染力的細菌，在臨床上被發現具有抗生素抗藥性，所以必須尋找新的化合物或天然萃取物來抑 制或治療細菌感染。我們利用各種微生物，包含實驗室常用指示細菌、病原菌和真菌，來測試五種中草藥植物之萃取物是 否具有抑制微生物生長的功效。 本研究首先使用濾紙擴散分析法來試驗萃取物是否能抑制細菌生長，然後再測定不同萃取 物的最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration, MIC)。結果顯示香椿、黃柏、白芍和番石榴的萃取物對Staphylococcus epidermidis的MIC分別為0.0200 mg/ml、>1.9223 mg/ml、0.0599 mg/ml與0.0200 mg/ml；香椿、高良薑、黃柏、白芍和番 石榴的萃取物對Bacillus cereus的MIC分別為0.0892 mg/ml、0.0198 mg/ml、0.9736 mg/ml、0.5111 mg/ml與0.0595 mg/ml；
香椿、高良薑、番石榴、黃柏、白芍萃取物對酵母菌Saccsharomyces cerevisiae的MIC分別為>1.9147 mg/ml、0.4199 mg/ml
、1.7316mg/ml、0.5911 mg/ml與>1.9147 mg/ml；對念珠菌Candida albicans的MIC分別為>1.9184 mg/ml、0.2728 mg/ml
、>1.9166mg/ml、0.6882 mg/ml與>1.9175 mg/ml；香椿、番石榴、黃柏、高良薑、白芍萃取物對病原菌Staphylococcus aureus subsp. aureus的MIC分別為1.5499 mg/ml、1.0706 mg/ml、>1.9225 mg/ml、0.5768 mg/ml與>1.9227 mg/ml；高良薑 和番石榴萃取物對病原菌Bacillus subtilis subsp. spizizenii的MIC分別為0.0798 mg/ml與1.3612 mg/ml。 我們發現這五種中草 藥植物的萃取物對革蘭氏陽性菌有明顯抑菌效果，但對格蘭氏陰性菌則無效，對酵母菌和真菌則有較低的抑制效果。這些 具有抗菌效果的萃取物，其MIC越小實用性就越高，未來在日常生活與醫療領域上的效用也越高，其中許多植物萃取物對 測試的細菌之MIC甚至低於常用的抗生素—Ampicillin，因此有近一步研究的必要。
關鍵詞 : 抗微生物、抗生素、中草藥萃取物、最低抑菌濃度 目錄
封面內頁 簽名頁 授權書 iii 中文摘要 iv 英文摘要 vi 誌謝 vii 目錄 viii 圖目錄 xii 表目錄 xvi 1 前言 1 2 文獻回顧 3 2.1香椿的介 紹 3 2.1.1香椿的成分和功效 3 2.2白芍的介紹 4 2.2.1白芍的成分和功效 5 2.3番石榴的介紹 7 2.3.1番石榴的成分和功效 8 2.4 高良薑的介紹 10 2.4.1高良薑的成分和功效 10 2.5黃柏的介紹 11 2.5.1黃柏的成分和功效 12 2.6微生物 13 2.6.1細菌 13 2.6.2 真菌 14 2.6.3病原菌 15 2.7實驗目的 16 3材料與方法 17 3.1實驗材料 17 3.1.1天然植物萃取物的材料 17 3.1.2菌種 17 3.2實驗 藥品 17 3.3實驗器材 18 3.4微生物培養基配置 18 3.4.1培養基組成 18 3.4.1.1 Nutrient Beef Extract Agar (NA)固態培養基 19 3.4.1.2 Nutrient Beef Extract (NB) 液態培養基 19 3.4.1.3 Yeast extract Peptone Dextrose (YPD)固態培養基 19 3.4.1.4 Yeast extract Peptone Dextrose (YPD)液態培養基 19 3.5菌株培養之條件 20 3.6測出菌株的菌落數 20 3.7植物萃取液的製備 21 3.8測 試植物萃取物對細菌生長的抑制效果 21 3.8.1抑菌圈實驗 21 3.8.1.1細菌和病原菌的抑菌圈實驗 21 3.8.1.2真菌的抑菌圈實驗 22 3.9測最低抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration, MIC)數值 22 3.9.1細菌、病原菌的MIC測定 23 3.9.2真菌的MIC測 定 23 4結果與討論 24 4.1五種天然萃取物對微生物的抑菌圈實驗 24 4.1.1五種天然萃取物對仙人掌桿菌(Bacillus cereus)抗菌 作用 24 4.1.2五種天然萃取物對黃金葡萄球菌(Staphylococcu epidermidis) 抗菌作用 28 4.1.3五種天然萃取物對大腸桿 菌(Escherichia coli)抗菌作用 31 4.1.4五種天然萃取物對葡萄球菌(Staphylococcus aureus subsp.aureus)抗菌作用 33 4.1.5五種天 然萃取物對枯草桿菌(Bacillus subtilis subsp.spizizenii) 抗菌作用 36 4.1.6五種天然萃取物對綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa) 抗菌 作用 38 4.1.7五種天然萃取物抗菌實驗比較 40 4.1.8五種天然萃取物對酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)抗菌作 用 43 4.1.9五種天然萃取物對念珠菌(Candida albicans)抗菌作用 45 4.2液態培養基測試 47 4.2.1白芍萃取物對微生物液態培養基 的MIC測試 47 4.2.2香椿萃取物對微生物液態培養基的MIC測試 52 4.2.3高良薑萃取物對微生物液態培養基的MIC測試 57 4.2.4番石榴萃取物對微生物液態培養基的MIC測試 63 4.2.5黃柏萃取物對微生物液態培養基的MIC測試 70 5結論 76 參考文 獻 80 圖2.1香椿全樹圖 4 圖2.2A白芍圖 6 圖2.2B赤芍圖 6 圖2.2C芍藥之外觀 7 圖2.3A番石榴葉 9 圖2.3B番石榴果實剖面圖 9 圖2.4高良薑葉圖 11 圖2.5黃柏圖 13 圖4.1.1A五種天然萃取物對仙人掌桿菌(Bacillus cereus)抑菌結果 26 圖4.1.1B萃取物對仙 人掌桿菌(Bacillus cereus)的抑菌圈實驗放大圖 27 圖4.1.1C萃取物對仙人掌桿菌(Bacillus cereus)的抑菌圈實驗放大圖 27 圖4.1.1D萃取物對仙人掌桿菌(Bacillus cereus)的抑菌圈實驗放大圖 27 圖4.1.2A五種天然萃取物對黃金葡萄球
菌(Staphylococcus epidermidis)抑菌結果 29 圖4.1.2B萃取物對金黃葡萄球(Staphylococcus epidermidis)的抑菌圈實驗放大圖 30 圖4.1.2C萃取物對金黃葡萄球(Staphylococcus epidermidis)的抑菌圈實驗放大圖 30 圖4.1.2D萃取物對金黃葡萄
球(Staphylococcus epidermidis)的抑菌圈實驗放大圖 30 圖4.1.3五種天然萃取物對大腸桿菌(Escherichia coli)抑菌結果 32 圖4.1.4A五種天然萃取物對葡萄球菌(Staphylococcus aureus subsp.aureus)抑菌結果 34 圖4.1.4B萃取物對葡萄球
菌(Staphylococcus aureus subsp.aureus)的抑菌圈實驗放大圖 35 圖4.1.5A五種天然萃取物對枯草桿菌(Bacillus subtilis subsp.
spizizenii)抑菌結果 37 圖4.1.5B萃取物對枯草桿菌(Bacillus subtilis subsp.spizizenii)的抑菌圈實驗放大圖 38 圖4.1.6五種天然萃 取物對綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)抑菌結果 39 圖4.1.8A五種天然萃取物對酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)抑菌結果 44 圖4.1.8B萃取物對酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)的抑菌圈實驗放大圖 44 圖4.1.9A五種天然萃取物對念珠菌(Candida albicans)抑菌結果 45 圖4.1.9B萃取物對念珠菌(Candida albicans)的抑菌圈實驗放大圖 46 圖4.2.1A白芍萃取物對仙人掌桿 菌(Bacillus cereus)液態培養基的測試 48 圖4.2.1B白芍萃取物對黃金葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)液態培養基的測試 49 圖4.2.1C葡萄球菌(Staphylococcus aureus subsp.Aureus)白芍萃取物對液態培養基的測試 50 圖4.2.1D白芍萃取物對酵母 菌(Saccharomyces cerevisiae)液態培養基的測試 51 圖4.2.1E白芍萃取物對念珠菌(Candida albicans)液態培養基的測試 51 圖4.2.2A香椿萃取物對仙人掌桿菌(Bacillus cereus)液態培養基的測試 53 圖4.2.2B香椿萃取物對葡萄球菌(Staphylococcus aureus subsp.Aureus)液態培養基的測試 54 圖4.2.2C香椿萃取物對黃金葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)液態培養基的測 試 55 圖4.2.2D香椿萃取物對酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)液態培養基的測試 56 圖4.2.2E香椿萃取物對念珠菌(Candida albicans)液態培養基的測試 56 圖4.2.3A高良薑萃取物對枯草桿菌(Bacillus subtilis subsp. spizizenii)液態培養基的測試 58 圖4.2.3B高良薑萃取物對葡萄球菌(Staphylococcus aureus subsp.Aureus)液態培養基的測試 59 圖4.2.3C高良薑萃取物對仙人掌 桿菌(Bacillus cereus)液態培養基的測試 60 圖4.2.3D高良薑萃取物對酵母菌 (Saccharomyces cerevisiae)液態培養基的測試 61 圖4.2.3E高良薑萃取物對念珠菌(Candida albicans)液態培養基的測試 62 圖4.2.4A番石榴萃取物對枯草桿菌(Bacillus subtilis subsp. spizizenii)液態培養基的測試 64 圖4.2.4B番石榴萃取物對葡萄球菌(Staphylococcus aureus subsp.Aureus)液態培養基的測 試 65 圖4.2.4C番石榴萃取物對仙人掌桿菌(Bacillus cereus)液態培養基的測試 66 圖4.2.4D番石榴萃取物對黃金葡萄球 菌(Staphylococcus epidermidis)液態培養基的測試 67 圖4.2.4E番石榴萃取物對酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)液態培養基的 測試 68 圖4.2.4F番石榴萃取物對念珠菌(Candida albicans)液態培養基的測試 69 圖4.2.5A黃柏萃取物對仙人掌桿菌(Bacillus cereus)液態培養基的測試 70 圖4.2.5B黃柏萃取對黃金葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)液態培養基的測試 71 圖4.2.5C黃 柏萃取物對葡萄球菌(Staphylococcus aureus subsp.Aureus)液態培養基的測試 71 圖4.2.5D黃柏萃取對酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)液態培養基的測試 72 圖4.2.5E黃柏萃取對念珠菌(Candida albicans)液態培養基的測試 73 表4.1.7A五種天然萃取物 對細菌抑菌圈實驗統整表 40 表4.1.7B五種天然萃取物對病源菌抑菌圈實驗統整表 41 表4.1.7C五種天然萃取物對真菌抑菌 圈實驗統整表 42 表5A五種天然萃取物對細菌之MIC統整表 76 表5B五種天然萃取物對病原菌之MIC統整表 77 表5C五種天 然萃取物對真菌之MIC統整表 78
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