物 技 術
表3-6 使用定量 PCR 法與一般 PCR 法比較檢測 CCYV 之靈敏度 Dilution series a
One step RT-PCR One step qRT-PCR
ng Copy number Ct CV 素水稻（Oryza sativa L. ssp. japonica; AAN）作為 花 粉 貢 獻 親 ， 台 農 糯73 號 （ O. sativa L. ssp.
japonica cv. ‗Tainung 73‘; TNG 73）作為花粉接受 親 ， 進 行 緩衝區 設 置 對 基因轉 殖 水 稻花 粉流 佈 之 種皮花青素合成酶基因（anthocyanin synthase, ANS）
之 ‗Lineker‘ 和 ‗Magenta Lineker‘ 之 菊 花
（Dendranthema grandiflorum）轉殖系與常見之菊科 雜草（兔仔草 Ixeris chinensis（Thunb） Nakai.、鱧 腸 Eclipta prostrata L. 、 紫 花 藿 香 薊 Ageratum
生 物 技 術 ACC 脫氨 基因轉殖鳳梨的組培繁殖與遺傳性
狀調查 為進行基改作物之生物安全評估，本研究 使用中興大學林金和老師所提供的基因轉殖鳳梨為 材料，該鳳梨轉殖系可大量表現ACC 脫氨酶（ACC deaminase, ACCD）基因，降低轉殖細胞內乙烯生成 量；一般情況下田間鳳梨常因低溫短日誘導乙烯累 積 而 導 致 花 芽 分 化 ， 而 ACCD 轉 殖 鳳 梨 則 因 為 ACCD 的作用，延遲或抑制自然開花，期望能達產 期調節的最終目的。本研究為增函ACCD 轉殖鳳梨 的 參 試 樣 本 數 ， 利 用 莖 頂 分 切 繁 殖 的 方 式 建 立 ACCD 轉殖鳳梨組織培養系統，並以 1 mg/L 的百試 達進行篩選，確認參試之鳳梨苗均帶有外源基因（圖 3-12）。將 ACCD 轉殖鳳梨與其對照組台農 17 定植
田間後，定時採取植株剛成熟葉 （即最高直立葉 片，又稱D 葉）進行植株乙烯試放量分析，本試驗 以氣象層析儀（430-GC，VARIAN）測量乙烯濃度，
再換算單位時間內單位鮮重的乙烯釋放率。在初步 試驗中，依照生長發育分為四個時期，分別是營養 生長期（I）、花芽分化期（II）、第 1 朵小花開放期
（III）與全部小花凋謝期（IV），結果顯示 ACCD 轉殖系在營養生長期與第一朵小花開放期，都能顯 著抑制體內乙烯釋放（表 3-9），但全部小花凋謝期 的乙烯釋放量則與未轉殖的台農 17 對照組無顯著 差畨，推測 ACCD 轉殖系抑制乙烯生成量有其極 限，生理老化所釋放的乙烯量可能已超出ACCD 之 控制範圍，實際結果仍待更進一步試驗證實。
表3-7 基因轉殖植酸酵素水稻（AAN）於農業試驗所隔離試驗田區在有緩衝區 8 個方向、5 個不同距離之花粉流佈帄均頻 度（％）的結果
Distancez (m)
Frequency of outcrossed seeds(%)
North Northeast East Southeast South Southwest West Northwest Average 1 1.88±0.20y 1.76±0.35 2.15±0.57 2.70±0.32 3.33±0.25 3.10±0.56 2.63±0.13 1.54±0.36 2.39 3 1.85±0.35 1.20±0.16 1.85±0.39 2.15±0.24 2.72±0.38 2.03±0.36 1.45±0.14 1.23±0.45 1.81 5 1.58±0.09 1.25±0.56 1.36±0.21 2.70±0.67 2.42±0.54 1.47±0.25 0.97±0.07 1.60±0.25 1.67 7 0.23±0.13 0.43±0.13 0.52±0.09 1.73±0.37 1.80±0.13 1.60±0.22 0.55±0.04 1.50±0.17 1.05 9 0.03±0.01 0.10±0.01 0 0.84±0.61 0.83±0.21 0.63±0.03 0 0.60±0.08 0.38 Average 1.11 0.95 1.18 2.02 2.22 1.77 1.12 1.29 1.46
z Distance between recipient plots (TNG 73) and the donor plot (AAN).
y Mean ± SE (n = 3).
表3-8 基因轉殖植酸酵素水稻（AAN）於農業試驗所隔離試驗田區在無緩衝區於 8 個方向、5 個不同距離之花粉流佈帄均 頻度（％）的結果
Distancez (m)
Frequency of outcrossed seeds (%)
North Northeast East Southeast South Southwest West Northwest Average 1 1.82±0.32y 1.35±0.11 2.38±0.45 3.02±0.57 2.58±0.32 3.64±0.25 2.23±0.35 1.24±0.16 2.28 3 1.18±0.18 0.85±0.26 2.34±0.56 2.67±0.31 2.88±0.42 2.15±0.11 1.82±0.05 0.84±0.21 1.84 5 0.85±0.12 1.21±0.14 1.58±0.25 2.57±0.35 1.87±0.32 2.52±0.21 1.20±0.21 0.45±0.12 1.53 7 1.20±0.35 1.45±0.28 1.30±0.16 2.14±0.27 1.98±0.41 1.97±0.24 1.01±0.13 0.55±0.21 1.51 9 0.52±0.13 0.62±0.13 0.80±0.08 1.65±0.13 1.53±0.65 1.55±0.03 0.63±0.03 0.98±0.30 1.04 Average 1.11 1.10 1.68 2.41 2.17 2.36 1.38 0.81 1.64
z Distance between recipient plots (TNG 73) and the donor plot (AAN).
y Mean ± SE (n = 3).
生 物 技 術
表3-9 不同生長發育時期田間鳳梨葉片乙烯釋放量
Ethylene production rate (nL g-1 hr-1)
I II III IV
TN17 12.82±3.19az 12.04±1.19a 6.79±1.23a 9.68±0.50a
ACCD 8.93±0.73b 11.66±0.19a 3.53±0.01b 10.06±0.11a
z Mean ± standard error (n=9); each value in the same column followed by the same letter are not significantly different at 5％ level by LSD test.
圖3-10 鱧腸（Eclipta prostrata L.）為母本與轉殖菊花雜交所得種子萌芽情形。
圖3-11 鱧腸（Eclipta prostrata L.）為母本與轉殖菊花雜交所得種子以抗生素（5 mg/L hygromycin）進行篩選情形。
生 物 技 術
圖3-12 轉殖 ACCD 鳳梨組織培養苗篩選與再生。（A）及（C）為台農 17 號鳳梨組培苗，（B）及（D）為 ACCD 基因轉 殖苗。Bar = 1 cm。