應 用 動 物
利用微生物系統表現具活性之家蠅乙醯膽鹼酯 本所於 1985 年以 Ellman‘s test 為原理開發有機 磷及氨基甲酸鹽類農藥殘留快速檢驗技術，利用純 化自家蠅（Musca domestica）之乙醯膽鹼酯酶檢測 上開藥劑於農作物殘留概況。本研究藉由選殖家蠅 乙醯膽鹼酯酶基因並利用微生物大量表現之方式，
提高家蠅乙醯膽鹼酯酶生產效率，改善目前酵素生 產過程。前期已利用 NCBI 資料庫上已知之家蠅 AChE cDNA 序列 合成 引 子 增幅 此家 蠅 之 AChE cDNA，確認此感性品系家蠅 AChE mRNA 全長為 2,434 bp，其中凿含 237 bp 之訊息胜肽（79）（a.a.）
及1839 bp 之成熟胜肽（613）（a.a.），估計此重組蛋 白分子量為68KDa，蛋白質等電點為 5.3。102 年進
一 步 將 此 AChE cDNA 轉 殖 至 酵 母 菌
（ Saccharomyces cerevisiae ） 與 大 腸 桿 菌
（Escherichia coli）表現系統比較，得知大腸桿菌表 現之產量與活性較佳，利用 IPTG 於 37℃下誘導大 腸桿菌 4 小時後即能獲得大量具活性之重組蛋白
（圖7-3）。初步測試結果顯示，誘導後之重組蛋白 經 尿 素 處 理 並 通 過 濃 縮 管 柱 可 提 升 其 比 活 性 （ 由 11.0 U/mg 提升至 1,5137. 9 U/mg），較直接由家蠅萃 取者（777.1 U/mg）為高。未來將大量製備重組蛋 白並測試其理化性狀與穩定度，期能以大腸桿菌量 產重組家蠅乙醯膽鹼酯酶，取代過往飼育家蠅並純 化酵素之繁複流程。
圖7-2 農藥殘毒快速檢驗資訊網(http://rbpr.tari.gov.tw)首頁畫面。
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圖7-3 酵母菌表現系統與大腸桿菌表現系統之比較。
小菜蛾 抗藥性 監測 與 防 治 對 策 本年度分別 針 對 高 雄 市 路竹 區 、 彰 化縣溪 湖 鎮 及雲 林縣 土 庫 鄉 等 地 區 之蔬菜 產 區 進 行小菜 蛾 抗 藥性 監測 。 將 採 自 上 述 地 點 之 小 菜 蛾 ， 攜 回 實 驗 室 大 量 飼 育 後，以葉片浸藥法測試 3 齡帅蟲對各類推薦藥劑 之 抗 藥 性 程度。 測 試 藥 劑凿括 目 前 推薦 使用 之 阿 巴安勃等22 種化學藥劑，並以室內飼養之感性品 系 小 菜 蛾 作為對 照 。 試 驗藥劑 濃 度 以各 藥劑 推 薦 濃度及兩倍濃度供試，結果顯示如表7-1，依藥劑 致 死 率 之 高低排 序 ， 前 五名依 序 為 賜諾 特、 因 滅 汀、因得克、脫芬瑞及培丹（表 7-2），賜諾特之 致死率除溪湖外，均高達 90％以上，除蟲菊精類 農 藥 則 幾 乎已無 防 治 效 果。由 不 同 地區 之抗 藥 性
監 測 結 果 相較， 目 前 剋 安勃及 其 與 其它 藥劑 之 混 合 劑 ， 在 田間對 小 菜 蛾 幾乎無 效 ， 建議 目前 應 暫 停 此 類 藥 劑之推 廣 及 使 用，待 抗 藥 性消 退後 再 檢 測 是 否 可 以恢復 使 用 。 三個地 區 之 抗藥 性以 溪 湖 居 冠 ， 路 竹次之 ， 土 庫 較低， 顯 見 不同 地區 農 民 用 藥 習 慣 與抗藥 性 有 明 顯之關 聯 。 另比 較路 竹 地 區4 月份及 11 月份自採集之小菜蛾，對相同藥劑 之抗藥性結果亦有差畨，11 月份自路竹地區採集 之小菜蛾其抗藥性比同年 4 月採集之小菜蛾高。
建 議 農 民 應確實 遵 守 植 物保護 手 冊 所建 議之 用 藥 規 範 ， 並 能夠審 慎 選 擇 有效且 不 同 作 用 機制 之 藥 劑 輪 流 使 用、配 合 非 化 學防治 技 術 之整 合管 理 策 略，以延緩田間抗藥性之發生。
Ⅰ Ⅱ
應 用 動 物
表7-1 不同藥劑對小菜蛾帅蟲致死率之測試結果 IRACz
農藥分類 代號
作用機制 農藥名稱/
登記年份
測試濃度 (推薦濃度/
兩倍濃度)
推薦濃度/兩倍濃度死亡率(％) 高雄路竹 雲林土庫 彰化溪湖 頭城 102-04 102-12 102-04 102-12 102-05
1A 抑制乙醯膽鹼
酯酶
40%納乃得/‘85 1500x/750x 4.0/6.3 0/3.6 3.8/3.8 0/0 16.9/63.4 40.64%函保扶/‘ 1200x/600x 16.6/21.2 10.6/20.4 9.0/11.3 5.3/14.5 45.0/43.3 1B 10%美文松/‘85 350x/175x 31.1/79.5 — 19.6/59.1 — —
43%佈飛松/‘85 1000x/500x 48.8/69.3 1.8/1.9 37.2/65.9 61.5/34.8 100 2B γ-胺基丁酸氯離
子通道拮抗 49.5%芬普尼/‘96 2000x/1000x 3.7/6.0 3.9/18.8 13.4/14.7 0/0 100 5
畨位活化尼古 丁乙醯膽鹼受 體
2.5%賜諾殺/‘99 750x/375x 60.0/68.8 — 64.7/95.1 — 100 11.7%賜諾特/‘10 2000x/1000x 91/97.8 97.9/100 96.2/100 82.7/92.5 100
6 活化氯離子通
道
2.15%因滅汀/‘00 1500x/750x 76.5/95.3 46.3/57.7 85.4/90.1 91.4/92.7 100 2%阿巴汀/‘92 2000x/1000x 6.0/11.9 4.3/4.3 1.9/21.5 0/0 100 13
干擾質子梯度 分解氧化磷酸 化反應
10%克凡派/‘96 1000x/500x 20.4/30.6 25.5/43.1 15.6/34.6 16/18 100
14
阻斷尼古丁乙 醯膽鹼受體通 道
50%培丹/‘85 1000x/500x 68.4/60 39.6/84.4 69.2/75 43.4/84.8 100
15 抑制鱗翅目幾
丁質合成 5%克福隆/‘87 2000x/1000x 25.5/27 14.2/31.3 39.2/39.6 7.8/20.8 80.7/86.7 21A 抑制粒線體複
合物I電子傳遞
15%脫芬瑞(SC)/‘08 2000x/1000x 71.4/78.7 61.7/82.9 75.5/86.0 81.8/88.6 100 15%脫芬瑞(EC)/‘09 2000x/1000x — 79/84 — 76.5/95.9 — 22A 阻斷神經傳導
電壓相關鈉離 子通道
14.5％因得克/‘02 2500x/1250x 82.7/79.7 72.9/94.6 90/90.3 50/80 100 22B 22％美氟綜/‘08 1000x/500x 30.6/40.8 72.9/94.6 23.0/38.7 17.4/26.5 100/98.1
28 二醯胺類頄尼
丁受體調節
18.4％剋安勃/‘09 3000x/1500x 6.1/10 21.6/30.4 48.8/64.5 0/0 100 20％氟大滅/‘10 3000x/1500x 65.9/70.2 51.8/57.1 48.8/64.5 34.1/55.3 100
z IRAC 農藥分類係依藥劑作用機制歸類。
表7-2 不同地區對小菜蛾致死藥劑效果差異
地區別 藥劑效果較佳
溪湖 因滅汀、賜諾特、脫芬瑞
路竹 賜諾特、因得克、因滅汀、脫芬瑞(EC＞SC)
土庫 賜諾特、因得克、因滅汀、脫芬瑞
農 WR-301 型（無輪式）動力中耕管理機、大順牌 TS-899 型動力中耕管理機、日農牌 650N 型（無輪式）動