第二章 總 論
第二節 靈芝的栽培方式
一、靈芝的來源可分為野生與人工栽培:
(一)野生靈芝-野生靈芝在台灣的平地及高海拔山區皆有分佈,常 常生於闊樹、針葉樹、相思樹及豆科植物,大部分為一年生的子實體。
缺點是生長期過長產量少且品質不易控制。
(二)人工栽培靈芝-靈芝目前因研究及應用需求迫切,而有人工栽 培法出現。最常見的品種為赤芝,其產量有一定經濟規模,且可以有 效控制其生長過程,能達到最接近天然靈芝的成份及品質,為大部分 靈芝產品的原料來源。
目前人工栽培靈芝其方法有二(林哲聖) : 1. 子實體栽培方面
(1)段木栽培:將靈芝的生長菌絲種植在櫟木或是枹木的枯木段上。
(2)木屑培養瓶或太空包栽培:
於廣口瓶或太空包中填裝木屑與生長培養基,將靈芝菌絲接入 後塞上棉塞培養,在30 ℃栽培70~90 天即可採收子實體。
2. 菌絲體液態培養方面
由於靈芝子實體的培養一般要2~3 個月的時間,而且從開始到採收相 當費力,又因為野生靈芝不易取得,所以發展出像生產抗生素那樣以
液體發酵的辦法,即為靈芝液體培養。將靈芝菌絲培養於液態培養基 中,給予足夠的氧氣,使菌絲生長、繁殖並累積有效物質,發酵培養 期僅五至七天。利用生物科技方法將靈芝菌種作發酵培養,以生產大 量靈芝菌絲體。其成本最低,但常會缺乏一些天然靈芝中特有的成分
(例如三萜類),在效果及品質上難免與靈芝子實體有所差異及療效 有所影響。
二、靈芝子實體的栽培方法
分析靈芝生長的環境便可知道,靈芝以木材中各種成分作為它的營 養,需要較高的溫、濕度和良好的通風透光的環境。故以下就營養、
溫度、濕度、空氣、光線五個方面來討論:
(1) 營養
真菌所需的營養基本上有三大類:碳素營養、氮素營養和礦質營養。
靈芝在朽木或樹樁上生長,無疑木材是靈芝的營養來源。木材的化學 成分相當複雜,概括起來可包括兩大類:有機物質和礦物質。而靈芝 菌絲可分泌多種將有機成分分解利用,礦質營養則可從木材中各種礦 質元素吸收得到。此外,在人工栽培方面為了促使靈芝生長更加快 速,一般會在木屑培養基中添加適量富含營養的物質(如米糠、麩皮、
增加,更重要的是富含營養的配料太多,會使營養生長特別旺盛,因 而抑制了子實體的分化(生殖生長)。
(2)溫度
對於靈芝生長與溫度的關係,有研究指出(陸文梁, 林忠平 et al.
1993):25~30℃是菌絲體生長的最適溫度,較高或較低的溫度都會使 菌絲體生長速度減慢,同時子實體原基分化的最適溫度也在25~30℃
之間。在接近25℃中培養的子實體生長較慢,質地較緊密,皮殼層發 育的較好,色澤也較光亮。在30℃左右培養的子實體生長較快,個體 發育週期較短,質地不如25℃中培養的緊密,皮殼及色澤也較差。
(3)濕度
水分是細胞內含物重要組成部分,又是有機生命活動中營養物質的運 輸工具及溶劑,各種物質只有在溶解的情況下才能被吸收。在自然界 中靈芝的發育離地面很近,又正值夏秋季節,雨量充足,這些都說明 了靈芝生長發育需要很充足的水分和空氣濕度。因為菌絲體的生長主 要是依靠分生能力旺盛的菌絲尖端來實現的。子實體的生長也是依靠 菌絲尖端組成的菌柄頂端或菌傘邊緣來實現的。這些菌絲尖端特別幼 嫩,其外表又沒有任何覆蓋物或保護物,如果濕度較低的話,這 些幼嫩的尖端很快就會乾死,一旦菌絲尖端死亡,靈芝的生長停止。
(4)空氣
靈芝是屬於異營性,依靠氧化和分解現成的有機物為自己的養料,所 以不發生光合作用過程,在它的生命過程中只進行呼吸作用。空氣中 通常含有0.03﹪的二氧化碳,當空氣中二氧化碳濃度超過0.1﹪時,靈 芝子實體就不能發育菌傘。通常人工栽培中出現的各種不正常型態大 都是由於培養室中二氧化碳濃度過高所造成的(林志彬 2001)。
(5)光線
一般可能認為,光照對於進行光合作用的綠色植物是必不可少的,而 對於進行呼吸作用的靈芝而言似乎不是必須的。其實不然,經實驗證 實光照對靈芝正常生長發育的影響是多方面的,如光照對菌絲體的生 長有抑制作用;對子實體的生長有促進作用以及菌柄和菌傘的生長有 明顯的向光性。而光強度在15000~50000勒克司,生長情況最佳(陸文 梁, 林忠平 et al. 1993)。
第三節發酵培養的技術
一、固態發酵培養技術
固態發酵是微生物培養的一種方式,使用固態物質當作基質,讓微 生物生長在上面。與液態深層發酵相比,使用固態發酵培養,微生物 有時能有良好的生長情形,也可產生較大量的胞外酵素,或其他代謝 產物。固態發酵有獨特特性與限制。胞外水解酵素與其他代謝產物有 時藉由固態發酵生產較大量的產物。雖然原因不是很清楚,但此特性 對固態發酵的應用很重要。
固態發酵與液態深層發酵主要的不同點(Sato and Sudo 1999) : (1) 固態發酵,微生物分佈在固體表面,微生物生長與產物生成也主 要在表面進行。基質不易攪拌均勻。因此培養環境為不均勻的。
(2) 固態基質的水分含量一般都非常低,必需依基質的物理性質與化 學性質而定。對於高水分含量的培養基而言, 通氣均勻通過基質床 很困難,通常會發生"渠道"效應。
(3) 由於菌體的新陳代謝與生長產生熱,提高了基質的溫度,造成水 分的流失。此現象使得固態發酵的控制更具挑戰性。
(4) 固態發酵的基質通常是天然物質,如:穀類、大豆、農業的生物 量、固體廢棄物等。
(5) 一般使用在固態發酵的微生物為黴菌,固態發酵中,黴菌的菌絲 型態與液態深層發酵之菌絲型態不同。這兩種菌絲有不同的生理活 性,複雜的控制過程 。
(6) 對基質床進行攪拌非常困難,某些產物的活性對剪應力非常敏 感,所以培養一般是靜態的,除了轉鼓反應器與流體化床發酵槽。由 於這些固態發酵的獨特性質引發了一些優點與缺點(Sato and Sudo 1999)。
固態發酵優於深層發酵的主要優點是:
(1) 因為細菌的生長受到低水活性的限制,因此固態發酵較不易受到 污染。
(2) 固態發酵的填充容積比液態深層發酵高,因為固態發酵水含量 低。
(3) 如果產物必需從固態發酵中來萃取,只需要較少的溶劑與較低的 回收成本。
(4) 發酵殘餘物的處理非常簡單。因為發酵殘餘物的水含量很低,可 將之乾燥做為動物飼料或肥料。
(5)允許分化的結構生長,對某些發酵而言是產物生成的關鍵點。
固態發酵的主要缺點是:
(1) 固體基質床的攪拌非常困難,造成基質床異質性的生理、物理、
化學環境不均勻。因此細胞、養分、溫度、水含量分佈不規則,這個 複雜性使得過程控制非常困難。
(2) 微生物呼吸或代謝產生熱使得溫度控制非常困難。因為固態基質 床的熱傳導係數非常低。通常強制通氣是控制培養溫度的唯一方法。
(3) 菌體生長與其它發酵參數的快速測量非常困難,尚無有用的感測 器可供直接測量。
(4) 微生物被限制在低水含量的基質上生長。黴菌或其他菌絲真菌最 適合,細菌則不適合生長。
(5) 目前仍然缺少有效的方法可用來分析發酵的狀況,連續操作與自 動化非常困難。
(6) 由於固態發酵高產率的影響因子間的交互作用相當複雜,培養策 略通常是依靠經驗與實驗結果。
固態發酵因天然基質具異質性,很難混合均勻,造成控制上的問題 (pH、DO、溫度)。為減少控制上的困難,基質通常以連續式或是間 歇性攪拌來達到混合。對大型的發酵體積而言,菌絲細胞在高攪拌速 率下會造成傷害,但低攪拌速率又無法避免濃度梯度的產生。因此,
固態發酵系統通常採用滾動式的反應器,但必需找出最適合的滾動速
率。固態發酵新技術與液態深層發酵技術一樣,是一種普遍性的微生 物生產應用技術,不限於某一種產品。隨著該技術體系的不斷改進與 完善,以技術開發帶動產品開發,擴大應用範圍。所此現代固態發酵 技術有著無限廣闊的應用前景。
以下針對固態發酵技術相關因素及特性做討論:
(一) 固態基質研究
在固態發酵中,固體基質常是不溶於水的天然聚合物,不僅提供微 生物所需營養(碳源、氮源、無機鹽、水及其他營養物),還作為細胞 的固定物,能提供微生物所需一切營養的基質被認為是理想基質。基 質在固態發酵中具有獨特的作用,它影響微生物發酵過程的質傳、熱 傳及微生物的代謝功能等。所以對基質研究比較透徹,主要集中在基 質的特性、預處理及滅菌等方面(林志彬 1996; 林志彬 2001)。
(1) 基質特性
微生物要在基質上進行生長並生產代謝產物,必將受到基質本身的物 理因素(基質顆粒大小、形狀、空隙率、纖維含量、黏度、顆粒之間 擴散率等)和化學因素(聚合度、疏水性、結晶度及電化學性質等)的影 響。基質顆粒的大小直接影響到單位體積反應表面積,也會影響顆粒 間菌體的生長、氧的供給率及二氧化碳的移出率等。一般來講,小的
反應速率,被認為是理想的選擇。 但是在許多情況下太小的顆粒容 易造成基質積團,顆粒間空隙率也減小,對熱傳、質傳產生不利的影 響,以致於妨礙微生物的呼吸或通氣,結果導致微 生物生長不良;
同時,大顆粒由於存在較大間隙,有利於提高質傳和熱傳效率,還可 提供更好的呼吸及通氣條件,但提供較小的微生物生長表面積。隨著
同時,大顆粒由於存在較大間隙,有利於提高質傳和熱傳效率,還可 提供更好的呼吸及通氣條件,但提供較小的微生物生長表面積。隨著